补体CC检测免疫比浊法

补体C3&C4检测（免疫比浊法）一、用途体外定量测定血清、血浆样品中补体C3&C4（C3&C4）的含量。二、临床意义（一）概述补体(complement)是存在于正常人和脊椎动物血清及组织液中一种含有酶原活性的蛋白质，是机体免疫防御系统的重要构成成分。它涉及约30中可溶性蛋白及膜结合蛋白，统称为补体系统。生理状况下，血清中大多数补体成分均以无活性的脚前体形式存在，只有在某歧活化物的作用下补体各成分才依次活化，发生连锁的酶促反映，体现出多个生物学活性。（二）临床意义C3:减少：重要见于免疫复合物引发的肾炎、系统性红斑狼疮、重复性感染、皮疹、肝炎、肝硬化、关节疼痛等。增高：见于多个传染病及组织损伤和急性炎症，肝癌等C4:减少：见于免疫复合物引发的肾炎、系统性红斑狼疮、病毒性感染、狼疮性症侯群、肝硬化、肝炎等。在SLE，C4的减少常早于其它补体成分，且缓和时较其它成分回升迟。狼疮性肾炎较非狼疮性肾炎C4值明显低下增高：见于多个传染病、急性炎症、组织损伤、多发性骨髓瘤等。

C4含量升高常见于风湿热的急性期、结节性动脉周边炎、皮肌炎、心肌梗塞、Reiter综合征和多个类型的多关节炎等；减少则常见于本身免疫性慢性活动性肝炎、SLE、多发性硬化症、类风湿性关节炎、IgA肾病、亚急性硬化性全脑炎等。三、检查原理样品中补体C3&C4（C3&C4）与抗补体C3&C4抗体在液相中相遇，立刻形成不溶性抗原－抗体复合物，并产生一定浊度。浊度高低反映样品中C3&C4的含量。通过与同样解决的补体C3&C4校准品比较，即可计算出样品中C3&C4的含量。四、样品血液样品原则上采集空腹血（禁食12小时）；患者处在安静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立刻松开；对的使用抗凝剂；避免溶血；避免过失性采样。样品运输过程中应避免过分振荡、避免样品容器的破损、避免样品被污染、避免样品及唯一性标志的丢失和混淆，避免样品对环境的污染、水分蒸发。C3&C4测定样品为空腹不溶血的血清、血浆（肝素或EDTA抗凝）样品应在低温条件下运输保存，样品中C3&C4在2～8℃保存可稳定1天，-20℃保存可稳定1个月。五、试剂（一）试剂构成R1：试剂1缓冲液50mmol/LR2：试剂2抗补体C3&C4抗体500ml/L补体C3&C4多点校准品另购不同批号试剂中各组份不能交换。（二）试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。（三）试剂的保存及稳定性1.不能冰冻试剂。2.未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定时为瓶签标示的使用期。开瓶后的试剂应在2～8℃保存，稳定时为30天。（四）试剂性能可接受的指标空白吸光度：试剂空白在主波长340nm、副波长700nm处，10mm光径下，吸光度值≤0.500。（五）试剂使用中的注意事项1.严格按照试剂阐明书的规定使用试剂。2.试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的使用期。对超出使用期的试剂不能使用。3.严禁放置0℃下列保存。4.试剂开瓶后，如果长久放置，会吸取空气中的二氧化碳，造成pH值下降，造成测定值不精确，因此请尽快使用。5.当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值＞0.500时，表明试剂已失效，应弃去。6.装载试剂时避免产愤怒泡，否则成果无法确保。7.不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能混用，否则试剂的稳定性将无法确保。（六）防止危险发生的注意事项使用时应避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者附着到皮肤上的时候，请立刻用大量清水冲洗，如有必要，请接受医生的治疗。（七）解决废弃物时的注意事项试剂反映后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照有关法规进行废物解决。六、操作环节1.基本参数方法：终点法样品/试剂：1/84（C3）、1/42（C4）主波长：340nm反映温度：37℃副波长：700nm反映时间：10min2.操作（1）工作曲线绘制将校准品浓度由低到高次序排列后，按下表操作：加入物C1C2C3C4C5加入物校准品（μl）5/10*5/10*5/10*5/10*5/10*校准品（μl）试剂R1（μl）350350350350350试剂R1（μl）加入物C1C2C3C4C5加入物混匀，37℃恒温2～5分钟，340nm波优点以空白管调零测定吸光度A1。试剂R2（μl）707070707070混匀，37℃恒温5分钟，340nm波优点测定吸光度A2，计算△A=A2-A1，绘制校准曲线图。（2）样品测定加入物空白（B）测定（U）样品（μl）--5/10*（μl）5/10*--试剂R1（μl）350350混匀，37℃恒温2～5分钟，340nm波优点以空白管调零测定吸光度A1。试剂R2（μl）7070混匀，37℃恒温5分钟，340nm波优点测定吸光度A2，计算△A=A2-A1。注：*表达C3测定时样品或校准品用量为5μl；C4测定时样品或校准品用量为10μl。3.操作流程图空白读数R2:70μl5分钟主波长:340nm副波长:700nm测定读数空白调零温度:37℃时间:空白读数R2:70μl5分钟主波长:340nm副波长:700nm测定读数空白调零温度:37℃时间:5分钟5分钟RR1:350μl样品:5μl（C3）10μl（C4）4.计算使用多点非线性/半对数校准模式，以样条函数为计算模式，根据校准品的值与吸光度变化值作剂量/响应曲线，样品中C3&C4的含量可根据其吸光度变化值在剂量/响应曲线上计算出。七、参考值范畴C3：0.79～1.80g/LC4：0.10～0.40g/L八、注意事项（一）本试剂尽管含有较好的抗交叉污染能力，但仍应根据仪器性能及实验室条件做好避免交叉污染的工作。（二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品体积比例不变的条件下，适宜增加或减少试剂与样品的用量。（三）采用必要的防止方法使用试剂，试剂使用后应立刻盖紧瓶盖，避免污染。（四）精确的成果取决于精确校正的仪器、温度及时间的控制。（五）药品、抗凝剂、促凝剂、分离胶等其它物质都可能对测定值造成无法预知