《临床免疫检验技术实验》

《临床免疫检验技术实验》(供四年制医学检验技术本科使用)教学大纲实验教学管理中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室2021年10月

前言一、基本信息课程名称：临床免疫检验技术实验学时学分：临床检验方向共24学时,1.5学分；技术研发方向共16学时，1学分适用专业：四年制医学检验技术本科先修课程：免疫学基础,临床免疫检验技术二、课程简介《临床免疫检验技术实验》是医学检验专业学生的一门重要实验课，是关于免疫学、免疫学技术及其在医学领域中实际应用的一门学科。随着免疫学理论研究的飞速进展，在免疫学理论的基础上不断建立起新的实验方法，使免疫学检测技术日新月异。临床免疫学检验技术现广泛应用于生物学、医学及其他相关领域，在基础医学研究、临床诊断、治疗及预防中起着重要作用。通过《临床免疫学检验技术》实验，要求学生加深对实验原理的理解、了解影响实验的因素、学会分析实验结果、并熟悉其检测项目的临床意义；同时培养学生在免疫学检验方面的基本操作技能，并具备基本的建立相关检验方法的能力。本实验教学大纲依据李金明、刘辉主编的《临床免疫学检验技术》（人民卫生出版社，第1版）教材制定，实验教材为重庆医科大学自编教材《临床免疫检验实验指导》(卢贤瑜主编)，适用于四年制医学检验技术本科等学生。结合我校教学计划和学时安排，实验课分为模块A和模块B，其中模块A为24学时，主要适用于四年制医学检验技术本科(临床检验方向);模块B为16学时,适用于四年制医学检验技术本科(技术研发方向)。实验教学通过讲授、操作、示教、视频等方式进行。三、课程目标1.思想道德与职业素质目标通过本课程学习，培养学生尊重科学、实事求是、热爱医学事业、不惧艰苦、求知务实的探索精神和为医学健康服务的献身精神和良好的医学职业素养及高尚的思想品德。2.知识目标通过本课程的学习，使学生掌握临床免疫学实验原理，熟悉免疫学实验知识并能设计并运用相关实验。3.技能目标通过本课程的学习，掌握临床免疫学实验基本操作技能，最终达到培养学生理论联系实际、基础联系临床的思维能力，并具有自主学习能力，为后续的临床课程学习打下良好的基础。四、教学要求根据课程教学大纲及目标，确保课程教学内容、教学过程（环节）、知识与能力目标的达成，同时，对学生自主学习能力进行培养。五、考核方式参与人（排名不分先后）：张光媛、邓西川、陈婷婷、刘全执笔人（排名不分先后）：张光媛审定人：何永林

教材、教辅用书与参考书目一、教材选用教材为重庆医科大学检验系临床免疫学教研室编著的《临床免疫学检验及技术实验指导》二、教辅用书及参考书目1.李金明，刘辉.《临床免疫学检验技术》“十二五”普通高等教育本科国家级规划教材，第1版，人民卫生出版社，2015年1月出版2.王兰兰，许化溪.《临床免疫学检验》“十二五”普通高等教育本科国家级规划教材，第5版，人民卫生出版社，2013年12月出版3.徐顺清，刘衡川.《免疫学检验》国家卫生和计划生育委员会“十二五”规划教材，第2版，人民卫生出版社，2015年2月出版4.杨致帮，叶彬.《病原生物学与免疫学实验》高等医药院校实验教学系列教材，第2版，科学出版社，2013年8月出版5.朱道银，吴玉章.《免疫学实验》高等医药院校实验教学系列教材，第1版，科学出版社，2008年6月出版

模块A目录实验一间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）…………………7实验二ELISA试剂盒制备（ELISA试剂配制、包被、封闭）…7实验三ELISA间接法检测抗结核抗体……………8实验四总补体活性检测（CH50实验）……….…8实验五PEG法检测血清循环免疫复合物（CIC）…………………9实验六人外周血淋巴细胞分离、计数、活细胞测定……………9模块A教学时数分配表（临床检验方向，共24学时）实验序号教学内容实验课学时实验类型实验一间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）4综合型实验二ELISA试剂盒制备（ELISA试剂配制、包被、封闭）、免疫标记技术视频4基本实验方法实验三ELISA间接法检测抗结核抗体4综合型实验四总补体活性检测（CH50实验）4综合型实验五PEG法检测血清循环免疫复合物（CIC）、凝集反应视频4综合型实验六人外周血淋巴细胞分离、计数、活细胞测定4综合型合计24实验一间接免疫荧光法检测抗核抗体【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握免疫标记技术的概念、特点及分类。2.了解荧光的基本知识及荧光显微镜的基本使用方法。3.掌握免疫荧光法检测抗核抗体的基本原理，熟悉其实验步骤，掌握荧光免疫实验的影响因素。【实验学时】4学时【实验内容】1.制备小鼠肝细胞印片、固定，采用间接免疫荧光法检测血清抗核抗体、进行结果观察，判断核型；并分析可能引起的自身免疫性疾病。2.荧光显微镜的基本使用和维护。【实验分组】1~2人/组实验二ELISA试剂盒制备【实验类型】基本实验方法【目的要求】1.熟悉聚苯乙烯酶标板的特点及其主要性能。2.掌握ELISA包被的试验条件：包被浓度、包被量、包被时间。3.了解ELISA实验常用的封闭液及封闭过程。【实验学时】4学时【实验内容】1.ELISA实验基本试剂的配制(PH9.6CB、PH7.2PBS、PH5.0底物缓冲液)、包被（PPD）、封闭。2.免疫标记技术视频。【实验分组】1~2人/组实验三ELISA间接法检测抗结核抗体【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握酶联免疫吸附实验的原理、特点及主要方法学分类。2.掌握间接ELISA法检测抗结核抗体的原理；熟悉其操作步骤及实验的影响因素。3.掌握ELISA实验所设各项对照的意义。【实验学时】4学时【实验内容】1.运用“实验二”所制备的试剂盒检测血清中抗结核抗体，记录实验结果。2.对实验结果进行判定、分析及讨论。【实验分组】1~2人/组实验四总补体活性检测-CH50实验【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握补体的概念、特点。2.熟悉补体经典激活途径的激活过程。3.掌握50%溶血实验（CH50）的检测原理、正常值及临床意义，了解其检测方法。【实验学时】4学时【实验内容】1.抽绵羊血，制备2%SRBC悬液，调T（透光率）为38%~42%。2.抽同学新鲜血（提供补体）、低速离心，采用50%溶血实验检测血清总补体活性，并进行结果判断。【实验分组】1~2人/组实验五PEG法检测循环免疫复合物（CIC）【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握循环免疫复合物的概念及PEG法检测循环免疫复合物的原理。2.了解PEG法检测循环免疫复合物的实验步骤及结果计算方法、结果判断标准。3.熟悉PEG法检测循环免疫复合物的实验影响因素，并分析可能出现假阳性的原因。【实验学时】4学时【实验内容】1.PEG法检测循环免疫复合物。2.凝集反应视频。【实验分组】1~2人/组实验六人外周血淋巴细胞分离、计数、活细胞测定【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握人外周血淋巴细胞分离的原理（密度梯度离心法）。2.熟悉运用牛鲍氏计数板进行淋巴细胞计数并进行活力检测。3.熟悉人外周血淋巴细胞分离、计数及活细胞测定的实验步骤及淋巴细胞活力判断标准。【实验学时】4学时【实验内容】1.应用淋巴细胞分离液（Ficoll液）进行人外周血淋巴细胞分离。2.运用牛鲍氏计数板进行淋巴细胞计数。3.应用台盼蓝染色检测淋巴细胞活力。【实验分组】1~2人/组

模块B目录实验一间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）…………………13实验二ELISA试剂盒制备（ELISA试剂配制、包被、封闭）…13实验三ELISA间接法检测抗结核抗体…………..14实验四人外周血淋巴细胞分离、计数、活细胞测定…………14模块B教学时数分配表（技术研发方向，共16学时）实验序号实验题目实验课学时实验类型实验一间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）4综合型实验二ELISA试剂盒制备（ELISA试剂配制、包被、封闭）、免疫标记技术视频4基本实验方法实验三ELISA间接法检测抗结核抗体4综合型实验四人外周血淋巴细胞分离、计数、活细胞测定4综合型合计16

实验一间接免疫荧光法检测抗核抗体【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握免疫标记技术的概念、特点及分类。2.了解荧光的基本知识及荧光显微镜的基本使用方法。3.掌握免疫荧光法检测抗核抗体的基本原理，熟悉其实验步骤，掌握荧光免疫实验的影响因素。【实验学时】4学时【实验内容】1.制备小鼠肝细胞印片、固定，采用间接免疫荧光法检测血清抗核抗体、进行结果观察，判断核型；并分析可能引起的自身免疫性疾病。2.荧光显微镜的基本使用和维护。【实验分组】1~2人/组实验二ELISA试剂盒制备【实验类型】基本实验方法【目的要求】1.熟悉聚苯乙烯酶标板的特点及其主要性能。2.掌握ELISA包被的试验条件：包被浓度、包被量、包被时间。3.了解ELISA实验常用的封闭液及封闭过程。【实验学时】4学时【实验内容】1.ELISA实验基本试剂的配制(PH9.6CB、PH7.2PBS、PH5.0底物缓冲液)、包被（PPD）、封闭。2.免疫标记技术视频。【实验分组】1~2人/组实验三ELISA间接法检测抗结核抗体【实验类型】综合型实验【目的要求】1.掌握酶联免疫吸附实验的原理、特点及主要方法学分类。2.掌握间接ELISA法检测抗结核抗体的原理；熟悉其操作步骤及实验的影响因素。3.掌握ELISA实验所设各项对照的意义。【实验学时】4学时【实验内容】1.运用“实验二”所制备的试剂盒检测血清中抗结核抗体，记录实验结果。2.对实验结果进行判定、分析及讨论。【实验分组】1~2人/组实验四人外周血淋