动物血细胞分析仪电解质

动物血细胞分析仪和电解质分析仪在动物医疗中的应用

一、国内外动物医疗现状和发展趋势二、血细胞的检测三、血细胞分析仪常见故障及处理方四、电解质分析仪在动物诊疗中的应用一、国内外动物医疗现状和发展趋势

随著社会人口高龄化、家庭人口简单化及国民生活水平的升高，宠物（伴侶动物）已成为大部份现代家庭中不可或缺的一份子。人们对宠物的情感与日巨增，加上近年来动物保护意识抬头，动物医疗品质日趋受重视，也因此促进了动物医学的蓬勃发展。1、国内动物医学现状我国动物医院和兽医人才总体缺口很大，改革开放以来，我国畜牧业尽管有了较快的发展，2000年禽蛋生产量居世界第一，占全球总量的30%，猪的存栏数接近全球的一半，猪肉产量占全球45.1%，但从畜牧业整体生产水平和技术含量而言，仍比西方发达国家落后15-20年（相当于美国80年代中期的水平）。2、国外动物医学现状西方发达国家现代动物医学专业教育已有200多年历史（1762年法国成立的里昂兽医学院为最早）。近50年来随着生产的发展，科学领域的开拓和科学研究的深入，美国、加拿大、澳大利亚、丹麦、瑞典、奥地利、法国、德国、日本等国家的兽医事业更是空前发展，兽医工作的任务范畴较过去更为广阔，主要包括食用动物病、人兽共患病、伴侣动物病、观赏动物病、野生动物病、毛皮兽病、实验动物病等的研究和防治，及食品卫生检疫、人类疾病动物模型的研究等。同时在动物性食品安全、实验动物在环保中的应用、生物工程技术应用等新兴学科发展中发挥作用。3、国内动物医学趋势国内由于经济尚不够发达，各级政府对兽医的重要性认识不足，重视不够，并且由于社会陋俗，对兽医存有偏见，兽医师的地位不高，行业也较为艰苦。而随着家庭饲养宠物越来越普遍，小型的宠物医院跟随雨后春笋般兴起，宠物医院已成为城市公共卫生体系中不可或缺的一部分，但是由于总体的投入不够和观念的陈旧，医疗水平并不是很高。同时医疗行业的弊病也如影随形，潜伏着大量的医疗纠纷，尤其是最近几年，宠物医疗纠纷不断。近几年来，由于我国社会主义市场经济建设持续发展，居民经济收入水平提高，对生活质量的要求随着提高，以及农业产业结构发生了巨大变化、我国加入WTO、加上疯牛病、禽流感、口蹄疫风波的连续出现，特别是出现在国内的非典和前几天出现的猪链球菌感染等人畜共患病的发生等事件从另一个方面说明动物医学专业在强国富民大战略中的重要性，相信已开始引起了社会和各级政府对动物医学专业的重视。

4、国外动物医学趋势值得注意的是，随着科技水平的全面提高，西方发达国家的动物医学专业的社会功能早已超越单纯为畜牧业服务的狭小范围。在集中了高技术含量的集约化畜牧养殖业中，通过科学、合理、规范化的饲养管理技术和程序化的疫病预防措施等，常发的危害性巨大的疾病得到了有效的预防和控制，食用动物的生产（如养禽、养猪、养牛等）已经不再依赖专职兽医人员提供的医疗保障。而随着经济的发展，人民生活水平的提高，崇尚宠物的社会需求更为明显，因此，目前西方动物医学专业的教育，更为注重的是对学生临床诊疗技术水平的提高，如美国圣保罗州明尼苏达大学兽医学院自1989年来的统计资料显示，该校每年毕业生中，从事兽医临床和私人开业的占80%以上，其中从事赛马为主的大动物临床者占25-28%，宠物（犬、猫为主）临床占30-45%，上述两者混合型临床者占30%左右。与其相应的是，西方国家兽医师成为与律师、牙医齐名的顶级职业，既令人羡慕，又充满最为剧烈的竞争。同时对宠物医院的投入也在以很快的速度增加，许多以前只在人医医院才有的临床诊断设备相继进入了动物（宠物）医院如血细胞分析仪、电解质分析仪和B超等。二、血细胞的检测

2.1血细胞检测的原理和方法及临床意义

2.1.1、血细胞检测简介血细胞检验是指对血液中白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HGB）及相关数据的计数检测分析，也称血常规检验。血常规检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，而且对其它系统疾病的诊断和鉴别也可提供许多重要信息，是临床医学检验中最常用、最重要的基本内容之一。2.1.2、血细胞分析的发展血常规检验的最原始的手段是通过显微镜人工镜检，随着基础医学的发展，高科学技术的应用，血液细胞分析仪已成为取代镜检进行血常规分析的重要手段，尤其是带分类的血液分析仪的出现，对血常规的检测发展起到了决定性作用。早在五十年代美国库尔特（Coulter）先生首先发明了电阻式血细胞分析仪，血细胞的检测进入了仪器时代。2.1.3、检验过程（1）标本的稀释血液是由血细胞和血浆两部分组成的红色粘稠混悬液。在进行血细胞检验计数时，直接用血液计数是困难的，无论是镜检还是用血细胞分析仪，血液均需合适准确的稀释后才才能进行血细胞的检验。

准确合理的稀释倍数（在用于仪器时，RBC、PLT的稀释倍数一般为1：10000至1：3000；WBC、HGB的稀释倍数一般为1：250左右，我公司仪器为1：50000）和准确、稳定的测量容量是血细胞检测的重要基础。稀释倍数过低，会形成细胞排队通过传感器的重合缺损；稀释倍数过大，则会造成一定测量容量内血细胞的数量过少，这都会严重影响血液细胞检验的测量精度。

（2）红细胞和血小板的检测稀释液通常是一类具有酸碱缓冲作用、适当的离子强度和电导率的等渗溶液。适当的离子强度和与血浆相同的渗透压，能在一定的时间内完整地保持血细胞原来的体积；而合适的电导率能保证获得与细胞体积相应的脉冲大小。稀释液的配方成份不同，其电导率也不可能相同，测试时获得的细胞脉冲大小也不会相同，

会影响测试结果。这些变化不仅影响MCV、RDW、MPV，

还影响WBC计数及分类结果。因此，稀释液的研制和生产一定要与分析仪配套进行。（3）血液中白细胞对红细胞测定的影响绝大多数血细胞分析仪都使用电阻法进行红细胞计数和红细胞比积测定，其中计数结果中包括白细胞。但由于红、白细胞比例为750：1，故白细胞因素可忽略不计，当有白血病或贫血伴有核红细胞增加时，应减去白细胞或有核红细胞。（4）红细胞、血小板检测的临床意义（人，动物相同）a、一般的情况下红细胞的增多主要为真性红细胞增多症及各种原因的脱水；而红细胞减少主要是由于各种原因引起的贫血。b、平均红细胞体积（MCV）为80-94μm3，表示单个平均体积。是用于贫血形态学的分类指标，大于正常时提示为大细胞性贫血，小于正常为小细胞性贫血。c、红细胞比积（HCT），主要用于贫血形态学分类及协助了解血液浓缩和稀释程度。d、血小板检测的临床意义血小板数量增多一般见于原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、慢性粒细胞性白血病、急性肾炎、恶性肿瘤、急性化脓性感染等疾病。血小板减少一般见于原发性血小板减少性紫癜、脾功能亢进、血栓性血小板减少紫癜、弥散性血管内凝血（DIC）、再生障碍性贫血、放射病等。（（5）溶血素和白细胞检测的关系在血液中，由于红细胞的数量远远高于白细胞的数量，因此，在临床上对红细胞检测时可以忽略白细胞对结果的影响，但在白细胞的检测中必须要消除红细胞对白细胞计数的影响。因此，在实际检测过程中要在准备检测的血液样本中加入一定量的溶血素。由于红细胞和白细胞在细胞膜结构上有着极大的区别，因此溶血素中的表面活性剂对红细胞具有较强的溶解能力，使其完全被破坏，而对白细胞却没有破坏，同时还可以在一定时间内保持白细胞的体积和完整性。（6）溶血素和血红蛋白检测的关系血红蛋白式红细胞中的主要蛋白质，它对于氧和二氧化碳的运输起着重要的作用。在一般的情况下血液中游离存在的血红蛋白量很少（小于40mg/L），但当红细胞被溶血素破坏后，血红蛋白就会被释放，因此只有在溶血素的作用下才能进行血红蛋白的检测。当红细胞被破坏后，血红蛋白被释放，同时与溶血剂的有关成份结合形成血红色的衍生物，再进入仪器中的血红蛋白检测系统，在530-550nm波长下比色，吸光度的变化与血红蛋白的含量成正比。（7）白细胞和血红蛋白检测的临床意义a、白细胞总数的增减主要受嗜中性粒细胞数的影响。白细胞总数和嗜中性粒细胞的增加主要见于急性化脓性感染、严重组织损伤、大量红细胞破坏、急性中毒、大出血和恶性肿瘤等疾病。减少主要见于伤寒、副伤寒、疟疾、再生障碍性贫血及某些自身免疫性疾病等。b、淋巴细胞增多主要见于传染性单核细胞增多症、流行性腮腺炎、病毒性肝炎和结核病；也见于急、慢性淋巴细胞白血病，急性感染恢复期，再生障碍性贫血等疾病。淋巴细胞减少以相对减少为多，有些发生于接触放射线、应用皮质激素后。c、单核细胞增多主要见于亚急性细菌性心内膜炎、活动性结核病、慢性感染恢复期、单核细胞性白血病等。d、嗜酸性粒细胞在正常人体内的数量为50-500/m3。增多主要见于某些过敏性疾病、皮肤病、寄生虫病、嗜酸性粒细胞白血病等疾病；减少主要见于伤寒、副伤寒等疾病和应急状态及应用皮质激素等情况。e、血红蛋白检测的临床意义增多的意义与红细胞相同。减少时不一定与红细胞成比例。血红蛋白在临床上的主要意义之一是帮助确定贫血的种类。2.2人用血细胞分析仪和动物专用血细胞分析仪在检测结果上的差异

随着动物医疗水平的提高，很多宠物医院引进了血球分析设备，但是由于认识上的不足和资金的匮乏，加上大部分动物专用血球检测设备都是进口的，价格昂贵，因此一些医院引进的是人医院淘汰下来的旧设备，较好一点的购买的是价格较便宜的人用血球计数仪。但是由于动物血细胞的参数与人的血细胞参数有着极大的差异，因此在结果的判定上会出现较大误差，极易误诊，轻者耽误治疗时机，重者引起不必要的医疗纠纷。表一人和动物血细胞参数一览表英文简称

中文全称

人

狗

猫

牛

羊

猴

猪

马

鼠

WBC

白细胞数量

4.0-10.0×109/L

11.3-18.2

9.0-24

6-12

5-10

5.5-12

7.0-20

5.0-11

7-19

NEUT

中性粒细胞

50-70%

62-80%

44-82

20-40

20-45

21-47

12-50

27-63

22-50

EO

嗜酸性粒细胞

0.5-5%

2-14%

2-11

3-15

1-7

0-60.25-100.4-5.52-12BASO

嗜碱性细胞

2-5%

0-2%

0-0.50-10-20-20-40-0.90-2LYMPH

淋巴细胞

20-40%

10-28%

15-4445-6550-7047-7516-6011-4437.64MONO

单核细胞

3-8%

3-9%

0.5-73-151-80.1-1.50.25-39-133-13RBC

红细胞数量

4.0-5.5×1012/L

4.5-8.0

6.5-9.56.1-10.79.4-11.13.6-6.86.48.21-10.354.5-7HCT

红细胞压积

0.42-0.49

0.38-0.530.28-0.520.33-0.470.27-0.3460.32-0.520.38-0.40.28-0.420.37-0.47MCV

平均红细胞体积

82-92fl

59-6851-6347-5430-72---59-63---71-83HGB

血红蛋白

120-160g/L

110-18070-15587-145100-118100-160132-14280-140110-165MCH

平均Hb含量

27-31pg

21-2512-16---11.0---21-22---24.5-27.5MCHC

平均Hb浓度

320-350g/L

330-350230-310290340-350300350330330-350PLT

血小板

100-300×10.9/L

126.4-300.8100-500250-600---250-750240100-500116通过上述表格可以清楚的看出，人和动物及不同品种的动物之间的血细胞参数有着很大的差异，为了能够准确及时的对患病动物进行诊治，应该选择具有特定检测功能的血细胞计数仪，以便及时的对症治疗。

三、血细胞分析仪常见故障及处理方法

3.1）故障一

RBC与HCT结果偏高3.2）故障二

WBC偏高3.3）故障三

HGB偏高3.4）故障四

在正常的计数范围内，RBC或HCT偏低3.5）故障五

血小板质控物计数正常，而测定计数偏高3.6）故障六

血小板质控物计数正常，而测定计数偏低3.1故障一

RBC与HCT结果偏高RBC与HCT计数结果偏高的原因有试剂和机器两方面的因素。试剂因素：1、稀释液空白计数高

一般是由于试剂有细菌生长或有较多的颗粒（如过滤欠佳、灰尘污染等），需要更新试剂。2、稀释液空白计数正常时，RBC与HCT偏高见于（1）

1：50000稀释的血液未混匀。（2）

1：500稀释的血样要进行1：100稀释时未混匀。（3）

1：50000稀释的血样中有气泡：在进行1：100稀释时应沿标本杯内壁加入血样，以免直接排到杯底产气泡。（4）

血红蛋白吸管不准确：用水银称重法检查并校正血红蛋白吸管。（5）

稀释液加量不准确：如果用自动加液器加样，校对红细胞档的加液量，如不足9.94ml应调节稀释器。（6）

二次稀释时吸出的1：500稀释血样体积可能>100微升，检查并调整加液量。（7）

稀释液的渗透压偏低（<245mosm/kg），此时红细胞结果正常，而仅HCT偏高。仪器因素1、检测器的微孔不完全堵塞。2、电噪音干扰

血液分析仪的电源插座不能与电动机、离心机等大功率设备连用，并要远离放射和理疗设备。3、检测器内壁有气泡。4、固定检测器的金属座潮湿或连接处有盐类沉积

卸下金属座并干燥或洗掉盐类结晶。5、检测器内部不干净

卸下检测器用清洗剂清洗。6、检测器输出单元上的输出线连接不良。7、检测器损坏。3.2）故障二

WBC偏高试剂因素1、稀释液空白计数高

一般是由于试剂有细菌生长或有较多的颗粒（如过滤欠佳、灰尘污染等），需要更新试剂。2、稀释液空白计数正常时，WBC偏高见于（1）

计数前血样未混匀。（2）

稀释液的量不准确。（3）

溶血剂的量不够：每三滴应约为0.09-0.11ml，必要时清洗溶血剂滴瓶口的塑料分配器孔或直接使用刻度吸管。（4）

溶血不完全：一般见于加入溶血剂后1：500稀释的血样未充分混合，或溶血时间不够（至少放置30秒），溶血剂过期失效溶血能力下降。（5）

稀释液的温度过低，一般情况稀释液的适用温度应在18℃以上。仪器因素1、检测器的微孔不完全堵塞。2、电噪音干扰

。3、检测器内壁有气泡。4、固定检测器的金属座潮湿或连接处有盐类沉积。5、检测器内部不干净。6、检测器输出单元上的输出线连接不良。7、检测器损坏。8、内电极不干净

用纸巾蘸蛋白酶清洗液轻轻擦去污物，在用蒸馏水冲净。3.3）故障三

HGB偏高1、溶血不完全主要见于溶血剂的用量不足、溶血时间不够、溶血剂有结晶。加温使溶血剂结晶溶解，每10毫升1：500稀释的血样加溶血剂0.1毫升充分混匀并放置30秒以上再测定。2、血红蛋白比色池不干净将盛有15毫升蛋白酶清洗液的标本杯放置在血红蛋白吸口处，按测量键3次，等15分钟后换蒸馏水3次。如果用3%的次氯酸钠溶液清洗，注意不能将检测器浸泡在次氯酸钠中，以防腐蚀微孔。3、血红蛋白校正错误

用血红蛋白校正物重新校正，或将EDTA-K2抗凝的静脉血先用HICN法定值再校正血液分析仪。3.4）故障四

在正常的计数范围内，RBC或HCT偏低1、1：50000稀释的血样未混匀。2、1：500稀释的血样在进行1：100稀释前未混匀。3、取血不准确—小于20微升。4、稀释液量大于9.94ml。5、二次稀释时吸出的1：500稀释血样体积小于100微升。6、可能发生稀释溶血。7、在特殊的情况下有些取样杯可能使样本溶血（SYSMEX系列产品配有专用的、内壁含有抗溶血保护膜的取样杯）；同时，1：50000稀释的血样放置时间不应超过30分钟。

五）故障五

血小板质控物计数正常，而测定计数偏高

1、体内或体外溶血产生大量的红细胞碎片，体积在20-30fl范围内的碎片落入血小板的计数范围，需要重新采集标本或目测计数。

2、血样中存在较多的小红细胞，需目测计数。

3、冷球蛋白或纤维蛋白原等非定形物聚集，将标本置于37℃水浴30分钟后立即稀释测定。

（六）故障六

血小板质控物计数正常，而测定计数偏低1、肝素抗凝应该为用EDTA-K2抗凝。2、采血失误导致血小板凝集较多的凝块。需重新采血。3、血小板的卫星状态（类似血小板凝集成团），由于抗凝剂EDTA-K2启动了免疫球蛋白导致血小板凝集——用枸橼酸钠抗凝重新采血。4、存在大量的大血小板，需目测计数。5、血样中有血凝块，这时血小板结果异常低，需重新采血。

四、电解质分析仪在动物诊疗中的应用

（一）血中电解质测定的原理和方法1、概述：血液中含有多种无机离子，最主要的离子有三种，分别是钠、钾和氯离子，钠是细胞外液中主要的阳离子，含量最多，平均浓度为140mmol/L（人），其次是钾离子，平均浓度为4.5mmol/L（人）；氯离子是细胞外液的主要阴离子，血清（浆）中氯化物的浓度为96-108mmol/L（人）。这三种离子在体内有着重要的生理功能。对于动物来说，动物体的体液环境必须具有适宜的酸碱度，才能维持正常的代谢和生理功能。心肌和神经系统的正常电生理及细胞的正常活动都要求特定的pH范围与电解质水平。在临床上，水、电解质紊乱和酸碱平衡失调很常见，多为许多疾病发展过程中的继发现象。因此，在临床上对电解质进行测定，对于正确的确诊某些疾病具有重要的参考价值。2、测定的方法（1）钠钾的测定：由于钠、钾离子对机体有着重要的生理作用，血清（浆）中钠、钾浓度的改变与某些疾病有密切关系，故临床上重视血清中钠、钾浓度的测定，且同时被测定。体液中钠、钾测定的常用的方法有化学法、火焰发射光谱法、离子选择电极法及原子吸收分光光度法。化学法的缺点是操作步骤繁琐，测定结果的准确性及精密性差，已被淘汰。钠钾的原子吸收光谱法灵敏、准确，但设备昂贵，需要特殊的元素灯，因此不能广泛使用。我国卫生部推荐的是火焰发射光谱法和离子选择电极电位分析测定法（ionselectiveelectrodes，IES）。其中FES是参考方法，而IES是自动电解质分析仪中使用的方法。a、原理：离子选择性电极视一种化学感受器，它能将溶液中的某种特定粒子的活度转变成电信号，然后通过电位计来测量。离子选择性电极（ionselectiveelectrodes，IES）电位法是以测量电池的电位为基础的定量分析方法。将离子选择性电极和一个由银/氯化银构成的残币电极连接起来，置于待测的溶液中，形成一个测量电池。此电池的电位随样品的离子浓度的改变而改变，电位的变化与离子活度的对数符合能斯特（Nernst）方程。离子选择性电极由钠、钾离子不同活度作用而产生不同的电位。这种电极电位的变化由钠、钾离子的活度所决定，后者与钠、钾离子活度成比例。检测时首先加入样品，测定起电位，然后加入标准液测其电位，二者之差值与样本中钠、钾离子浓度和它们在标准液中离子浓度之比存在对数关系，可计算出样品中的钠、钾离子浓度。

b、主要的器材是钠、钾离子选择电极分析仪。钾电极：钾电极是对钾离子具有选择性响应的颉氨霉素液膜电极。此敏感膜的一侧与电极电解液接触，另一面与样品液接触，膜电位的变化与样品液中钾离子活度对数成正比。钠电极：钠电极由对钠离子具有选择性响应的特殊玻璃毛细管组成。钠电极与参比电极之间的电位差随样品溶液中的钠离子活度的变化而变化。参比电极：通常由Ag/AgCl组成，保持一个恒定不变的电位。c、试剂：对于电解质分析仪来说，各厂家生产的仪器所需的试剂都是配套供应的。间接ISE分析时高低浓度的斜率液及血清用指定pH值，离子强度的稀释液做高度稀释。斜率液可在给定pH值的缓冲液中添加指定浓度的氯化钠和氯化钾溶液即可。直接ISE法是测定离子活度的，离子活度与溶液中的pH值及离子强度有关。高、低浓度斜率液除用氯化钠溶液、氯化钾溶液外，还要加入一定量的醋酸钠或磷酸二氢钠/磷酸氢二钠溶液，调节特定的pH值来模拟血清水的离子活度。d、临床意义1）血钠降低临床上常见于：稀释性低血钠症：肾病综合症的低蛋白血症、肝硬化腹水、右心衰竭时的有效血容量减低等都能引起抗利尿激素增多，血钠被稀释。损耗性低血钠症：多见于胃肠道失钠（如幽门梗阻、呕吐、腹泻、胃肠道、胆道、胰腺术后造瘘及引流等）；尿钠排除增多（见于严重肾盂肾炎、肾小管严重损害、肾上腺皮质功能不全、糖尿病及应用利尿剂治疗等）；皮肤失钠（大量出汗，只补充水分而不补充钠；大面积烧伤、创伤，体液及钠从创口大量丢失等）。2）血钠增高常见于：肾上腺