几种磷酸缓冲液的配制方法介绍

几种磷酸缓冲液的配制方法介绍缓冲液是一种可以抵抗溶液中因加入少量酸、碱而产生的pH变化的液体。一般由弱酸及其弱酸盐或者弱碱及其弱碱盐配制而成。生物的生化反应，很多都需要一个稳定pH环境才能发生，比如血液就是一种缓冲体系。除了pH会影响生化反应效率外，缓冲液中的某些离子也可能会产生一些不必要的反应，妨碍目标实验的正常进行。因此在生命科学领域的实验中，研究者们需要慎重地选择缓冲体系。本期就为大家整理一些常用缓冲液的配制方法。磷酸缓冲液（PBS）PBS的缓冲pH值范围非常广，可配置各种pH值的酸、碱、中性缓冲液，是最常见的缓冲体系之一。配制酸性磷酸缓冲液可直接用NaH₂PO₄或KH₂PO₄，pH范围在1-5；碱性缓冲液可直接用Na₂HPO₄或K₂HPO₄，pH范围在9-12；中性缓冲液则用等浓度的NaH₂PO₄和Na₂HPO₄或者等浓度的NaH₂PO₄和Na₂HPO₄溶液混合，pH在5.5-8.5。PBS的缓冲能力强，应用范围广，但也有缺点：①易与常见的钙离子Ca²⁺、镁离子Mg²⁺等重金属离子结合形成沉淀。②会抑制某些反应，比如抑制某些酶的催化作用。以0.2mol/L中性磷酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（缓冲液的摩尔浓度指的是磷酸根的浓度，所以若稀释后pH值有微小变化需要调整，不要用带有磷酸根的溶液）：磷酸氢二钠（Na₂HPO₄*，0.2mol/L）：28.39g/L；磷酸二氢钠（NaH₂PO₄*，0.2mol/L）：24g/L*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。不同pH的PBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制100mLPBS缓冲液所用量如下图所示：硼酸缓冲液（BBS）BBS一般由硼砂和硼酸配制，是碱性范围内常用缓冲液。BBS的缺点是能和很多代谢产物生成络合物，比如和糖反应形成稳定的复合物而导致缓冲能力下降。以0.2mol/L硼酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（如需后续调整pH，同磷酸缓冲液一样，不要用含有硼酸根的溶液）：硼砂（Na₂B₄O₇·10H₂O*，0.2mol/L）：76.27g/L；硼酸（H₂BO₃*，0.2mol/L）：12.37g/L*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。不同pH的BBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制10mLBBS缓冲液所用量如下图所示：需要注意的是：硼砂易失去结晶水，必须保存在带塞子的瓶中。碳酸缓冲液（CBS）CBS一般由碳酸和碳酸氢钠配制，多为碱性。以0.2mol/L碳酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（pH调整，同上）：碳酸钠（Na₂CO₃*，0.2mol/L）：21.2g/L；碳酸氢钠（NaHCO₃*，0.2mol/L）：16.8g/L*注意是否为水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。不同pH的CBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制50mLCBS缓冲液所用量如下图所示：柠檬酸缓冲液（CPBS）CPBS一般由碳酸和碳酸氢钠配制，常用于分子实验的杂交处理液和细胞实验中的抗原修复、暴露等。柠檬酸容易与钙离子结合产生沉淀，反应中应避免钙离子混入。以0.2mol/L柠檬酸缓冲液为例，不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可（pH调整同上）：柠檬酸（C₆H₈O₇*，0.2mol/L）：38.4g/L；柠檬酸钠（C₆H₅Na₃O₇*，0.2mol/L）：51.6g/L*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。不同pH的CPBS可由不同比例的上述溶液混合而成。配制20mLCPBS缓冲液所用量如下图所示：Good's缓冲液Good's缓冲液又称为两性离子缓冲液。由于不干扰生物化学反应过程，对酶反应等也无抑制作用，所以非常适合于对易变性或者pH敏感型蛋白的研究和实验。常用的Good's缓冲液有20多种，这里只简述在生命科学实验中最常见的三种。1.MES缓冲液MES可固体按照摩尔浓度计算用量，配成液体后，通过氢氧化钠来调整PH。以0.2mol/LMES缓冲液为例：MES（C₆H₁₃NO₄S*，0.2mol/L）：39.05g/L；*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量。常用有效缓冲范围为pH5.5-7.7。2.Tris缓冲液①

Tris-HCl缓冲液Tris固体按照摩尔浓度计算用量，配成液体后，通过HCl来调整pH。以0.2mol/LTris-HCl缓冲液为例：MES（C₄H₁₁NO₃*，0.2mol/L）：24.2g/L；*注意是否是水合物，水合物需根据含水量重新计算固体用量②

Tris-EDTA缓冲液常用于分子生物学实验研究，用于DNA的溶解和保存等。以1×TE缓冲液(pH8.0)为例：●1MTris-HCl（pH8.0）：称取Tris12.12g，加纯化水80mL溶解，滴加浓HCl调整pH至8.0，后定容至100mL。●1MEDTA（pH8.0）：称取EDTA-Na₂·H₂O18.6g，加纯化水40mL，剧烈搅拌，滴加NaOH溶液调整pH至8.0，固体物质充分溶解后，定容至50mL（EDTA-Na₂需在pH8.0时才会溶解）。●1×TE（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0）：量取10mL1MTris-HCl，1mL1MEDTA溶液，充分混匀后，定容至1L③TAE缓冲液将上述Tris-EDTA缓冲液调整pH的盐酸换成冰乙酸，即是TAE缓冲液。注意：1.Tris溶液会吸收空气中的二氧化碳，所以应保存在使用塞子的瓶中。2.Tris缓冲液在不同温度下，呈现的pH是不同的，配置时应考虑使用环境，最好在使用环境温度条件下进行配制。3.HEPES缓冲液缓冲范围在中性附近。由于可以在敞开式容器中保持稳定的pH，所以常用于细胞培养，或者诊断试剂的保存溶液。以1M，pH7.0的HEPES溶液为例：HEPES称取119.15g，溶解在400mL纯化水中，用NaOH溶液调整pH至7.0，后定容至500mL。Tips缓冲液是弱酸及其弱酸盐或弱碱及其弱碱盐形成的共轭体。其对pH变化的缓冲能力，和酸碱的比例、解离常数等有关。酸碱的摩尔比越接近1:1，缓冲能力越大。在pH=pKa±1的范围