谷胱甘肽硫转移酶-在肝癌患者血清中的含量检测及其临床应用

谷胱甘肽硫转移酶-在肝癌患者血清中的含量检测及其临床应用

谷冈甘醇硫转移酶（gsts）是一套具有解毒和结合蛋白质功能的联合酶。按其等电点的不同分为碱性(α)、中性(μ)和酸性(π,又称胎盘型)三类。近年来人们研究发现,GSTs在多种内胚层来源器官的癌前病变及癌组织中有异常表达,与癌的发生、发展以及耐药性的产生密切相关,有可能成为一种新的肿瘤标志物。有报道,大鼠酸性GST(GST-P)可见于由化学所致的大鼠肝肿瘤或癌前期(增生小结),在正常肝脏中则见不到,而GST-π亦可存在于人肝肿瘤中。我们采用酶联免疫吸附测定法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)研究GST-π在肝癌患者血清中的含量及其与肝癌临床分化的相互关系,探讨GST-π作为肝癌标志物的应用价值。1对象和方法1.1手术及化疗史原发性肝癌患者53例,转移性肝癌患者10例,其中男44例,女19例。年龄39～74岁,平均57岁,除13例晚期肝癌外,其余病例均经手术或病理证实。所有患者采血前均无放疗、化疗史。晨起各抽取全部患者(3例手术患者于术前1天晨及术后第12天、35天晨各采血一次)空腹静脉血3ml置于塑料试管中,室温下静置2h,以3000r/min,离心10min,吸取血清置于eppendorf管中,-20℃冰箱中保存待测。溶血标本不得使用。同时抽取34名健康查体正常者的空腹静脉血,同法制备血清样品。1.2血清gst-含量采用酶联免疫吸附测定法检测肝癌患者术前及术后血清样品GST-π含量,并同时检测作为对照组的正常人血清。GST-π检测试剂盒购自Sigma公司。1.3统计处理采用χ2检验、线性回归、相关分析等进行统计学处理。2结果2.1肺癌患者血清gst-含量比较ELISA测定法是一种较为敏感的检测方法。结果显示,肝癌患者血清GST-π含量平均值显著高于正常对照组的血清GST-π含量平均值(P<0.01),见表1。2.2核电站癌患者的血清gst-i含量与肿瘤细胞的程度和临床待遇之间的关系2.2.1gst-的变化情况将40例有完整病理资料的原发性肝癌按其肿瘤细胞的分化程度分为3组,结果高分化组GST-π上升程度显著高于低分化、中分化组(P<0.01),而高分化组与中分化组、中分化组与低分化组间,GST-π的阳性率无显著性差异(P>0.05)。2.2.2gst-的阳性率必须与临床分期无关按1977年全国肝癌防治研究协会拟订的原发性肝癌临床分型标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期,结果示不同分期的原发性肝癌中,GST-π的阳性率相近,差异无显著性,即GST-π阳性率与临床分期无关(P>0.05),见表2。2.3gst的出现与肝肿瘤患者的临床关系GST-π的表达与肝癌患者的年龄、性别、临床症状、肿瘤家族史、饮食习惯、居住地理位置及手术切除性质等无关。2.4血清gst-变化观察了3例血清GST-π增高的原发性肝癌患者在外科根治切除术后血清GST-π含量的变化(图1)。血清GST-π在术后2周已开始下降,约4周已降至正常。术后两次血清GST-π含量平均值低于术前血清GST-π含量平均值,但只有术后第35天与术前血清GST-π含量之间的差异具有显著性(P<0.05)。3gst-在肺癌细胞肿瘤中的表达GST-π是一种酸性GST,等电点为pH4.8,分子量约47000道尔顿。有两个相同的亚基组成。根据非种属依赖性分类法,与大鼠胎盘型GST同属Pi类GST。许多学者提出,GST-π可作为人类组织各种肿瘤发生的一种标志物。这种想法最初是基于观察到两种现象:一是人类GST-π的酶学和免疫学特性与大鼠的GST-P相似,GST-P含量在化学致癌物诱导的大鼠肝癌增加较正常肝组织增加30～50倍,因此被认为是实验性肝癌前病变的新标志:二是GST-π在人类癌前病变和癌变的组织中表达增加。研究发现,在各种人类肿瘤包括肝癌的外科切除病理标本中,GST-π的活性和表达增加。1987年丸山等首先建立了血清GST-π放射免疫分析法,发现原发性肝癌、转移性肝癌患者血清GST-π含量较正常显著增高,阳性率为100%。Niitsu等(1989)作了类似报道。3.1血清gst-变化我们采用ELISA方法,重复性好,灵敏度高,共检测63例肝癌患者血清GST-π含量,对照检测34例正常健康人血清GST-π含量。原发性肝癌和转移性肝癌患者血清GST-π平均含量均显著高于对照组(P<0.01,P<0.01),阳性率分别达到90.6%和90.0%;3例血清GST-π增高的原发性肝癌患者在外科根治切除术后血清GST-π含量下降,约4周降至正常范围,间接说明血清GST-π来源于肿瘤细胞的合成与分泌。以上结果与Niitsu等报道的结果基本一致,说明GST-π在肝癌表达增多,可以作为肝癌的肿瘤标志物。监测血清GST-π浓度,对估计手术切除效果和预后可能有所帮助,而复发时GST-π是否再度升高,尚需进一步观察。GST-π在癌变过程中具有解毒功能,通过酶促与非酶促反应,解除化学诱变剂、促癌剂以及脂质和DNA氢过氧化物的毒性,保护正常细胞免受启动和促癌因素的影响。GST-π阴性对肝癌治疗效果和预后是否有关也需要进一步研究。3例原发性肝癌患者术后12天血清GST-π含量较术前有所降低,但不显著。可能与血清抽取时间偏早有关。因为患者经历了全身麻醉及较大的手术创伤、术中输血、机体内环境及全身代谢均发生一系列变化,另外术后应用抗生素和营养支持药物,肝肾负担加重,可能影响GST-π的代谢。3.2gst-是肺癌早期疗效良好的物种大鼠化学致癌物诱发实验性肝癌模型,免疫组织化学方法发现GST-π阳性单个细胞和/或微小病灶是最早出现的癌前期病变,GST-P阳性细胞可能是肝癌的起始细胞。对本实验40例有完整病理资料的原发性肝癌病例进行分析,结果显示,高分化组GST-π上升程度显著高于低分化、中分化组(P<0.01),而高分化组与中分化组、中分化组与低分化组间,GST-π的阳性率无显著性差异(P<0.05)。说明GST-π在较接近正常分化的肝癌组织的表达高于明显异常分化的肝癌组织,支持GST-π可能是肝癌癌变前期一个早期标志物的观点。本组3例肿瘤小于3.0cm的小肝癌其血清GST-π均有中等程度的提高,提示GST-π有可能成为新的原发性肝癌早期诊断的肿瘤标志物。GST-π的表达与肝癌的临床TNM分期无显著相关性(P>0.05),这些与其他学者的结果一致。GST-π表达增高的机制尚不清楚,一般认为,GST-π受基因控制,当致癌物作用与机体细胞引起细胞变异时,同时GST-π基因表达。