高效液相色谱法测定氧化型谷胱甘肽二钠

高效液相色谱法测定氧化型谷胱甘肽二钠

氧化二钠注射液由pharmabam公司生产，现在仅在俄罗斯上市，并在美国进行了三次临床试验。这种同类药物也是意大利上市的。是一种丙烯药物（顺铂、环磷酰胺、亚胺、浓缩物和博来霉素）的辅助药物。它可以减少化疗的损伤，对愈合的影响也可以增加化疗的剂量。氧化二甲苯乙烯醚是其替代药物，主要用于治疗小细胞肺癌、肝炎和化疗。广东省中药研究所科研人员自主开发出注射用氧化型谷胱甘肽二钠注射液原料氧化型谷胱甘肽二钠盐,参考还原性谷胱甘肽的有关文献,建立了一种HPLC的有关物质测定方法,可同时检测有关物质和含量,该法专属性好,灵敏度高,可作为氧化型谷胱甘肽二钠注射液的质量控制方法。1实验部分1.1氧化型谷胱甘肽二钠原料Waters2695型系列高效液相色谱仪(HPLC)(包括:PDA2996Empower数据处理软件),Waters公司。氧化型谷胱甘肽二钠注射液(批号:02172008),俄罗斯PharmBAM;氧化型谷胱甘肽二钠原料(批号:080512、080515、080518),广东省中药研究所;对照品(纯度99.8%,HPLC面积归一化法测定批号080510),自制;对照品:甘氨酸,谷氨酸,半胱氨酸,还原型谷胱甘肽,均购自Sigma公司。0.006mol/L辛烷磺酸钠溶液:称取辛烷磺酸钠1.3g,加水溶解成1L,加三乙胺10mL,磷酸调节pH3.0,经0.45μm的微孔滤膜滤过,即得。1.2辛烷磺酸钠+甲醇法反相色谱柱ZorbaxXB-C18(4.6mm×250mm,5μm);以V(0.006mol/L辛烷磺酸钠)+V(甲醇)=95+5为流动相,检测波长为210nm,柱温30℃。理论板数应不低于2500。对照品色谱图上各色谱峰的分离度应符合要求。1.3对照品溶液的制备取氧化型谷胱甘肽二钠原料加流动相配置成每1mL含氧化型谷胱甘肽二钠2mg的溶液。对照液制备:精密量取供试品溶液1mL,置100mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。取对照溶液10μL注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～25%,再分别量取供试品溶液与对照溶液各10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍。2结果与讨论2.1方法的特异性研究2.1.1有关物质分离在“2.1”项色谱条件下,称取有关物质对照品适量用流动相溶解并量稀释成有关物质的对照混合溶液,将氧化型谷胱甘肽二钠加入有关物质对照品混合溶液中,进样10μL,结果见图1和图2,表明各有关物质的分离结果符合规定。2.1.2响应值和检测限调节检测器的灵敏度测得噪音值,取氧化型谷胱甘肽二钠对照品适量不断溶解,测得供试品的响应值约为基线噪音的3倍高,本品的检测限约0.08μg。2.2线性关系研究和方法与法律2.2.1峰面积测定取氧化型谷胱甘肽二钠对照品50.0mg,精密称定,置50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为母液。精密量取母液0.5、1、2、5mL,置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为各质量浓度梯度的供试品溶液。精密量取供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。峰面积A与质量浓度x(mg/mL)的回归方程为A=69041x-10871;r=0.9999。结果表明,本品进样量在0.5～10μg范围内呈良好线性关系。2.2.2精密度测试取氧化型谷胱甘肽二钠对照品溶液,连续进样6次,记录峰面积,RSD=0.98%。2.2.3标准曲线及方法检出限取各批号氧化型谷胱甘肽二钠供试品20mg,配置成每1mL含氧化型谷胱甘肽二钠0.2mg的溶液,精密量取供试品溶液及对照品溶液10μL,注入色谱仪,供试品按照0,1,2,4,6,8h进样,记录色谱图,RSD=0.37。2.2.4溶液制备及色谱分析取自研样品6份,加入流动相配置成每1mL含氧化型谷胱甘肽二钠0.2mg的溶液10μL,注入色谱仪,记录色谱图,RSD=0.34。2.3测量结果2.3.1测定结果80525、4005183批供试品(批号:080512、080515、080518)含量测定结果分别为99.13%,98.92%,99.32%,结果符合要求。2.3.2有关氧化二钠氧化二钠原料的测定供试品溶液如有杂质峰,检测并分析出4种杂质,其中峰5为氧化型谷胱甘肽二钠,结果见表1和图1、图2。3氧化型谷胱甘肽二钠/水溶液质量检测目前国内尚未发现有氧化型谷胱甘肽二钠