液相色谱-串联质谱联用在体内药物分析中的应用

液相色谱-串联质谱联用在体内药物分析中的应用

对于具有相同或一致质量分析的液相铬ct质量分析（lc-ms），是在液相铬ct质量分析的基础上发展起来的。对分离对象化合物进行层析成像，然后对分离成分的质量分析进行多层面质量分析。它集液相色谱的高分离效能与质谱的高鉴定性能于一体,对研究对象有足够的灵敏度、选择性,分析快速且方便,具有其他分析方法所不能比拟的优点。LC-MS/MS可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物和大分子化合物,分析范围广,样品前处理简便,是目前最重要的分离分析方法之一,在药学研究方面的应用越来越广泛。美国的JemalM综述了其在药物研究中进行高通量生物分析的发展,LC-MS/MS在国内的应用亦得到了飞速发展,本资料对2008-2009年的国内应用报道进行综述。1阿奇毒素的药动学近年来LC-MS/MS已较广泛地用于血药浓度测定、药动学和生物利用度研究。潘杰等建立了适用于药动学及生物等效性研究的头孢拉定血浆浓度LC-MS/MS快速分析方法,头孢拉定和内标阿昔洛韦的保留时间分别为1.03,1.04min,分析时间仅需2min。头孢拉定的血浆质量浓度在0.1～30.0mg·L-1范围内线性良好,定量下限为0.1mg·L-1,日内RSD小于3.90%,日间RSD小于14.90%,方法回收率在107.60%～108.70%。赵曦等报道了LC-MS/MS测定人血浆中头孢克洛的方法。血浆样品经沉淀蛋白处理后,用AllureC18柱(50mm×416mm,5μm)分离,乙腈-1%甲酸(20∶80)为流动相;采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源,以正离子多反应监测方式进行定量分析。血浆中头孢克洛的线性范围为0.01～10.00mg·L-1,定量下限为0.01mg·L-1,回收率为79.6%～83.2%,日内、日间RSD均小于3.5%。所建方法快速(分析用时2min)、专属、灵敏、准确,适用于头孢克洛药动学的研究。刘茜等建立了测定人体内阿奇霉素血药浓度的HPLC-MS/MS方法,用于研究阿奇霉素分散片人体药动学。在选定的HPLC-MS/MS条件下阿奇霉素与内标及血浆杂质分离良好,在1.0～1000μg·L-1的范围内线性良好,回收率为88.7%～113.2%,日内和日间RSD均小于15%。李鹏飞等建立了快速、灵敏、专属性强的LC-MS/MS法测定全血中他克莫司(FK506)的浓度。由于大环内酯类新型免疫抑制剂他克莫司的治疗窗窄,患者个体间和个体自身药动学的差异大,临床应用时需要进行严密监测。该方法选用Shim-packVP-ODS色谱柱(150mm×416mm,5μm),以乙腈-10mmol·L-1醋酸铵为流动相,采用梯度洗脱进行分离。样品用乙腈进行蛋白沉淀后进样,选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式检测。FK506的线性范围为0.1～25.0μg·L-1,定量下限和最低检测限分别为0.1和0.05μg·L-1,方法日间、日内RSD均小于15%,方法提取回收率均接近100.0%,稳定性较好,研究者已成功运用于对中国健康受试者生物等效性研究。徐晓燕等采用HPLC-MS/MS法测定人血浆中色甘酸钠浓度,进行其滴鼻液和鼻用喷雾剂的药动学研究并评价其生物等效性。采用高效液相分离系统,流动相为醋酸铵-甲醇(含50%乙腈)(15∶85),固定相为AGTVenusilXBPC18(250mm×416mm,5μm)色谱柱。在0.3～20μg·L-1色甘酸钠血药浓度呈线性关系,定量限为0.3μg·L-1,回收率在94.1%以上,日内、日间的RSD均小于14.3%。单剂量给药色甘酸钠鼻用喷雾剂或滴鼻液,其药动学参数t1/2分别为(1.82±0.54)和(1.59±0.52)h;tmax分别为(0.47±0.12)和(0.44±0.15)h;Cmax分别为(9.79±4.66)和(10.88±4.05)μg·L-1,AUC0-5h分别为(11.52±3.46)和(12.63±4.23)ng·mL-1·h。色甘酸钠鼻用喷雾剂相对生物利用度Fr为(93.6±13.8)%。2008年以来国内采用电喷雾离子化(ESI)和选择反应监测(SRM)或多重反应监测(MRM)方式进行体液中药物定量监测,见表1。2阴道检测方法滥用的药物通常包括麻醉性镇痛药、精神兴奋剂和镇静催眠药等。由于滥用药物的危害极大,目前已得到了国际社会广泛的关注和高度重视,相关的滥用药物分析测定技术亦进行了深入的研究和开发,LC-MS/MS在滥用药物的检测中同样具有广阔的应用前景。卓先义等采用LC-MS/MS同时检测吸食大麻者尿液中四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、大麻酚(CBN)和四氢大麻酸(THC-COOH)的含量。大麻中的化学成分多且复杂,THC、CBD和CBN是其主要成分,其中THC是最主要的精神活性成分,在动物和人体中都显示较强的生理活性作用。THC-COOH是THC的主要体内代谢物,在体内大部分迅速形成葡萄糖结合物。尿液中THC-COOH的检测是目前确证吸食大麻的主要证据,同时分析大麻酚类和THC-COOH更可帮助判断吸食时间,完善分析结果的推断与解释。文献报道的该方法延长尿液中THC-COOH的检测时限,具有特异性强、灵敏度高的优点,分析范围广,前处理简便,无需衍生化,已应用于实际案件。闫志伟等采用OASISMCX固相萃取柱进行提取,应用LC-MS/MS方法进行检测,运用保留时间和MRM方式对尿液中吗啡类药物及其代谢物进行定性定量分析。吗啡类药物主要包括吗啡、可待因、海洛因及其代谢物单乙酰吗啡(MAM)、葡萄糖醛酸吗啡(M3G)等。结果在磷酸盐缓冲液pH4.0时,海洛因、MAM、可待因、吗啡、M3G的固相萃取回收率分别达64.33%～70.21%,96.95%～117.57%,83.60%～123.63%,68.82%～91.03%,94.64%～107.33%;线性范围0.005～10g·L-1;相关系数分别为0.9998,0.9958,0.9992,0.9994,0.9997。贾晶莹等建立了一种可同时测定目前临床和实际刑事案例中经常遇到的19种滥用药物尿样中浓度的LC-MS/MS法,最低检出限(LOD)在1～100μg·L-1范围,其中84.21%目标物的LOD≤50μg·L-1,52.63%目标物的LOD≤10μg·L-1,应用该方法,成功对141例药物依赖性患者的尿样中滥用药物进行了定量检测。3溴敌隆的hplc-ms/ms法毒性中药(马钱子碱、乌头碱等)、杀鼠药、有机磷农药和镇静安眠药等药物中毒多见于自杀、谋杀和临床用药过量,快速、灵敏、特异地定量分析生物检材中中毒药物含量对于临床抢救和法庭调查中的死因判断均非常重要。王朝虹等建立定量分析人全血中马钱子碱的LC-MS/MS法。实验应用OasisMCX小柱进行固相萃取法提取,XTerraRP18色谱柱分离,在该条件下,人血中马钱子碱的线性范围为0.01～5.0mg·L-1,LOD为0.2μg·L-1。赵海雨等建立了全血中测定第一代羟基香豆素类抗凝血杀鼠剂溴敌隆的HPLC-ESI-MS/MS法。血液样品经乙醚提取后,采用UltraC18柱(150mm×2.1mm,5μm)流动相:甲醇;流速:200μL·min-1;在负离子模式下,通过电喷雾电离(ESI),多反应监测(MRM)测定,外标法定量分析溴敌隆。在0.1～50μg·L-1范围内呈良好的线性关系。溴敌隆的回收率为94.34%(RSD为7.3%),定量检出限为0.028ng。王贤亲等建立了能同时测定血浆中氯氮平、奥氮平和米氮平的LC-MS/MS方法。血浆中的氯氮平、奥氮平、米氮平用乙醚液-液萃取,采用AgilentZorbaxSB-C18柱(2.1mm×150mm,5μm),电喷雾离子源,正离子检测,多反应监测方式进行定量分析,卡马西平作为内标。结果氯氮平、奥氮平和米氮平的检测限分别为0.45,0.92,0.41μg·L-1,质量浓度在10.0～2000.0μg·L-1范围内线性良好(r≥0.9924),平均萃取回收率在65.7%～94.2%,日内、日间精密度RSD≤6%。作者还分别报道了同时测定人血浆中5种有机磷的含量和同时测定人血浆中的7种苯二氮芯卓类药物的LC-MS/MS方法。在一般液相色谱的情况下,样品没有得到完全分离,无法进行定量,可在LC-MS/MS的情况下,选择不同的离子通道进行二级质谱分析,则可对保留时间接近的物质分别进行定量,目标物的特征碎片区别明显,同时测定多种目标物是LC-MS/MS高选择性的典型示例。报道的这些方法均适用于法庭与临床毒物分析。4lc-ms/ms分析从所整理的文献可以看出,LC-MS/MS的检测水平基本上都在ng·mL-1,灵敏度较传统的HPLC-UV高3～4个数量级。常规的HPLC分析时,被测药物与内源性等物质在色谱保留上达到完全分离,一个样品分析时间通常为10～30min,而LC-MS/MS采用选择反应监测(SRM)或多反应监测(MRM)技术选择与待测组分相