茶多酚对常见微生物的抑菌效果研究

茶多酚对常见微生物的抑菌效果研究

防腐剂是杀死微生物或抑制生长和繁殖的药物，包括化学产品和生物代谢物。后者是天然活性剂。随着医学微生物的发展，人们逐渐注意到长期食用合成药物的化学防腐剂对人类健康的影响。因此，我们开始深入研究和开发天然食品腐食剂。茶多酚是提取自茶叶中的一种天然二酚类化合物。在这项工作中，我们主要讨论了茶多酚对一般微生物的抗菌效果和最低抗菌浓度。1材料和方法1.1培养基和微生物供试菌株:大肠杆菌(E.scherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、金黄色葡萄球菌(S.taphylococusaureus)、啤酒酵母(S.accharanycescerevisiae)和黑曲霉(A.spergillsniger).(以上菌种均由常熟理工学院微生物实验室提供).茶多酚:含量≥98.0%,干燥失重≤5.0%(宁波江东弘诺国际贸易有限公司).供试培养基:细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基,真菌采用PDA培养基.设备:电子天平(LP502B型,常熟市百灵天平仪器有限公司),冰箱(BCD-196KF,青岛海尔股份有限公司),真空封口机(DZ-350/2P型,上海青葩食品包装机械有限公司),全自动立式压力蒸汽灭菌锅(YXQ-LS-30SⅡ型,上海博讯实业有限公司),恒温培养箱(KBF115,上海简户仪器设备有限公司),电磁炉(MC-SH1612,广东美的生活电器制造有限公司),分光光度计、pH计、锥形瓶、移液管、培养皿等.1.2实验方法1.2.1不同浓度的茶多酚对微生物感染圈的影响1.2.1.培养基的制备配方:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,水1000mL,pH7.2-7.4.称取药品:按培养基配方称取各药品,取少于总量的水于烧杯中,将各培养基成分逐一加入水中待溶.加热溶解:将烧杯置石棉网上加热,不断搅拌促使各药品快速溶解,然后补足水分至1000mL.调节pH值:配好的牛肉膏蛋白胨培养液是微酸性的,需用1mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.2-7.4.分装:将配好的液体培养基分装于5个250mL的锥形瓶内,每瓶加入2%的剪碎的琼脂条.灭菌:将锥形瓶用牛皮纸包扎封口后,置压力蒸汽灭菌锅内,于121℃灭菌20min备用.1.2.1.马铃薯的制备除马铃薯的制备配方:马铃薯200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂20g,自来水1000mL.制法:马铃薯去皮后,切成小块,加水煮烂(煮沸20-30min,能被玻璃棒戳破即可),用四层纱布过滤,加糖和琼脂,待加热溶化后再补足水分至1000mL,121℃下灭菌20min.1.2.1.3.无菌生理盐水的制备称取0.85gNaCl至盛有100mL蒸馏水的锥形瓶中,加棉塞包牛皮纸后,置压力蒸汽灭菌锅内,121℃下灭菌20min.1.2.1.菌液的吸光度测定各种菌液浓度配成106-108个/mL,细菌采用平板计数法,真菌采用血细胞计数板,结果见表1、表2、表3.当所配浓度达到所需要求时,测定该菌液的吸光度,记录吸光度值,以此作为平行实验的参考标准.表4为在波长为500nm的可见光条件下测定的各菌液的吸光度值.分别取配置好浓度的各菌液0.2mL倒入相应的平板培养基中涂布均匀,用打孔器将滤纸打成直径为8mm的小圆纸片,分别投入到浓度为10g/L、40g/L和160g/L的茶多酚溶液中浸泡5min,取出沥去多余茶多酚溶液,分散平贴于平板培养基中,细菌置于37℃培养48h,真菌置于29℃培养48h,平行测三次取平行值1.2.2生长情况的观察配制浓度为10g/L、20g/L、40g/L、80g/L和160g/L的茶多酚溶液,分别取各浓度的茶多酚溶液0.2mL加入相应的培养基中,采用平板划线法将活化的菌种接种于相应的平板培养基中,观察各菌种生长情况.2结果与讨论2.1对细菌有一定的抑菌效果,自然条件原则对其它有机溶由表5可知,茶多酚对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长有一定的抑制效果,而对枯草芽孢杆菌和啤酒酵母来说,只有高浓度的茶多酚溶液才对其有一定的抑菌效果,对黑曲霉则没有抑菌效果.总之,茶多酚对细菌有一定的抑菌效果,对酵母菌抑菌效果较弱,对霉菌则没有抑菌效果.2.2最低抑制浓度由表6可知,茶多酚对大肠杆菌的最低抑制浓度是40g/L,对枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度是80g/L,对金黄色葡萄球菌的最低抑制浓度是160g/L;对啤酒酵母和黑曲霉在所设定的茶多酚浓度范围内没有抑菌效果.3茶多酚与蛋白质的相互作用通过分析不同浓度茶多酚影响微生物抑菌圈直径和茶多酚最低抑菌浓度的测定结果可知,茶多酚对细菌具有一定的抑制作用,与王岳飞通过试验发现茶多酚可明显抑制细菌的生长繁殖报道一致.而杨贤强报道发现,茶多酚可与蛋白质结合,减少微生物对蛋白的破坏;与细胞酶蛋白作用,降低生物酶活性;与膜蛋白结合,影响微生物对营养物质的吸收;与金属离子发生络合反应,导致微生物因某些必需元素的缺乏而使代谢受阻,甚至死亡.这些研究表明,茶多酚不仅仅是一种抗氧化剂,也可以作为一种防腐剂用于食品保藏.然而在应