一测多评法在中药化学成分含量测定中的应用

一测多评法在中药化学成分含量测定中的应用

中药及其制剂包含许多组件，具有化学成分多样性和复杂性的特点。这也是中医具有各种功能和多种药理基础的基本原因。因此，在研究中药及其制剂的有效性和安全性时，我们不仅要选择单一成分的含量测定来表达中药的质量，还要选择不同成分的含量测定来对影响的化学指标进行综合评价。近年来,各种新的分析技术和方法在中药质量控制中不断出现,王智民等提出了一测多评法(quantitativeanalysisofmulti-componentsbysinglemarker,QAMS),即利用中药有效成分内在的函数关系和比例关系,只测定一个成分(对照品易得者),来实现多个成分(对照品难以得到或难供应)的同步测定。中国药典2010年版中,已经收录利用该方法测定黄连小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱等成分的含量。本文主要探讨目前一测多评法在中药化学成分含量测定中的应用进展,为进一步推广一测多评法在中药质量控制模式中的应用提供数据参考。1类多成分同时测定时样品、分析方法及结果一测多评法是通过只测定某个代表性成分,来计算出其他待测有效成分的含量,使其计算值与实测值符合定量方法学的要求。主要适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多成分同时测定。因此在使用该方法时,首先应选择适当的检测指标,收集研究样品,并制备对照品溶液,进行HPLC分析条件的确定。参照药典附录ⅩⅧA要求完成多成分同时测定的方法学考察,并利用对照品溶液和确定的分析条件,建立内参物与待测成分之间的相对校正因子(RCF),同时进行待测成分的色谱峰定位。然后按常规方法测定待测成分的含量,同时利用RCF计算待测成分的含量,并将实测值与计算值进行分析比较,以验证QAMS的合理性和可行性。2中药中n类、类、苯丙素类等3种分类含量测定,能够检测香豆素、及其他类目前,一测多评法已在中药多种化学成分的含量测定中得到广泛应用,如中药苷类、醌类中的蒽醌类和菲醌类、苯丙素中的香豆素类和木脂素类、黄酮类、挥发油类、三萜类、生物碱类、鞣质类等成分的含量测定。2.1朝激励因子确定李发美等以淫羊藿药材为研究对象,以药材中4种主要成分为指标成分,分别建立了淫羊藿苷与朝藿定A、B、C的相对校正因子,计算朝藿定A、B、C的含量(计算值),实现一测多评;同时采用外标法测定药材中4种指标成分的含量(实测值),并比较计算值与实测值的差异,结果显示一测多评法和外标法所得的含量结果无显著性差异。2.2大黄素甲醚与参与物的相对校正因子孟繁颖等以复方黄白胶囊为研究对象,以大黄酚为内参物,计算大黄酸、大黄素和大黄素甲醚与大黄酚的相对校正因子;分别采用一测多评法和外标法测定复方黄白胶囊中4种大黄蒽醌类成分的含量,结果表明相对校正因子的重现性良好,且采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著性差异。王钰莹等以三黄片为研究对象,建立了大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚与内参物大黄素之间的相对校正因子,分别采用外标法和一测多评法测定三黄片中4种蒽醌类成分的含量,并将一测多评法的计算值与外标法的实测值用相对误差进行评价,结果表明两者差异无统计学意义,实验所得的相对校正因子可信,表明该法具有合理性、可行性和可重复性。范玲等以虎杖为研究对象,选取大黄素为内标物,分别建立了大黄素与虎杖苷、白藜芦醇和大黄素甲醚的相对校正因子,并用该校正因子进行虎杖苷、白藜芦醇、大黄素甲醚的含量计算,实现一测多评,同时采用外标法测定饮片中大黄素、虎杖苷、白藜芦醇和大黄素甲醚的含量,比较计算值与实测值的差异,结果表明11批虎杖饮片中3种成分含量的计算值与实测值的RSD<3%,表明两者无显著性差异。李倩等以丹参药材为研究对象,药材中4个有效成分为指标成分,分别建立丹参酮ⅡA与二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮,丹参酮Ⅰ的相对校正因子,计算二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的含量,同时采用外标法测定药材中4个指标性成分的含量,比较计算值与实测值的差异,结果显示16批丹参中4个指标成分含量的计算值与实测值之间无显著性差异。2.3药物中香豆素含量测定结果杨芳等采用一测多评法测定川白芷药材中3种香豆素成分的含量,实验以欧前胡素对照品为内参物,在线性范围内采用HPLC-DAD建立其与异欧前胡素、氧化前胡素的相对校正因子,并用该校正因子进行异欧前胡素、氧化前胡素的含量计算实现“一测多评”,同时采用外标法测定药材中这3种香豆素的含量,并比较计算值与实测值的差异,结果显示20批药材中3种香豆素含量的计算值与实测值无显著性差异(RSD<5%)。丁黎艳等以补骨脂药材为研究对象,选取补骨脂素为指标,确定该成分与其他药效成分——异补骨脂素、补骨脂甲素(补骨脂二氢黄酮)、补骨脂乙素(异补骨脂査儿酮)间的校正因子,考察一测多评法和外标法测得结果的差异性,并研究了不同仪器及色谱柱对相对校正因子的影响,结果表明一测多评法和外标法测得的数据RSD均<3%,且不同仪器及色谱柱所得相对校正因子无显著性差异。贺凤成等建立了五味子中4个木脂素类化合物一测多评方法学考察模式,实验以五味子醇甲为内参物,建立五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素与五味子醇甲的相对校正因子,并进行含量计算,同时采用外标法测定13批五味子药材中4个成分的含量。结果表明建立的校正因子重现性良好,同时采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著性差异,表明该方法准确可行。2.4不同类型的著性差异杨菲等以银黄制剂为研究对象,建立汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素与黄芩苷间的相对校正因子,分别采用外标法和一测多评法测定银黄制剂中4种黄酮类成分的含量,并将一测多评法的计算值与外标法实测值用相对误差进行比较,结果表明一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著性差异。徐娜等以芹菜籽原料药中主要成分芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床内酯为指标,在一定范围内,建立芹菜甲素与芹菜乙素、新蛇床内酯的校正因子,用该校正因子测定芹菜乙素和新蛇床内酯的含量,同时采用外标法测定6批不同批次中3个成分的含量,结果显示建立的校正因子重现性良好,原料药中采用校正因子计算的值与外标法实测值间没有显著性差异。另有张坤等建立以木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷为对照品的校正因子方法,测定苦碟子提取物中咖啡酸、菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(1→6)-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷与木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷5种主要成分的含量,同时采用外标法测定苦碟子提取物中5种成分含量,并将校正因子法与外标法的测定结果进行比较,经t检验,P>0.05,表明这2种方法的测定结果无显著性差异。2.5与现行标准的比较付滢舟等采用一测多评法测定速效救心丸中冰片的含量,实验以正十四烷为内标物,以右旋龙脑为参照物建立其与异龙脑、左旋龙脑的相对校正因子进行含量测定,同时与现行标准的测定结果进行比较,结果表明采用一测多评法的测定结果与现行标准测定结果基本一致。2.6相对校正因子的测定宋永贵等采用一测多评法同时测定预知子中4种三萜皂苷成分,以常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷PD)为内标物考察在不同色谱柱、流动相系统、HPLC仪器条件下,皂苷PD与常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷X)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷B)、常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷A)之间的相对校正因子,并利用该校正因子计算皂苷X、皂苷B和皂苷A的含量。采用外标法同时测定药材中该4种成分的量,将测定值与计算值进行多种统计学检验,结果表明,在不同的条件下相对校正因子重现性良好,10批预知子中皂苷X、皂苷B及皂苷A的计算值与外标法实测值相比没有显著性差异。张勇等建立一测多评法同时测定木瓜中齐墩果酸和熊果酸2种三萜酸成分。实验以齐墩果酸为内参物,考察了HPLC和UPLC2种色谱体系,建立相对校正因子计算熊果酸的量,并与外标法进行比较,结果表明,在不同的色谱分析体系中,熊果酸相对校正因子及保留时间的重现性良好,且计算值与实测值偏差范围较小。2.7外标法测样品中的化合物测定刘永利等以咳喘宁片为研究对象,以吗啡为对照,建立吗啡与磷酸可待因、盐酸罂粟碱、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的校正因子,并利用校正因子计算磷酸可待因、盐酸罂粟碱、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量,同时利用外标法测定这4种成分的含量,结果显示采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间没有明显差异,表明该法的准确性和科学性。陈晓斌等以热痹消颗粒为研究对象,建立小檗碱与黄柏碱、药根碱、巴马汀的相对校正因子,并将该因子用于这4种生物碱的含量测定,同时采用外标法测定4种生物碱的含量。结果表明一测多评法对不同的色谱柱和仪器的计算值与外标法实测值之间没有明显差异。2.8相对校正因子的计算林永强等采用一测多评法同步测定银黄片中6种咖啡酰奎宁酸,实验以绿原酸(5-O-咖啡酰奎宁酸)为指标,建立该成分与3-O-咖啡酰奎宁酸、4-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸的相对校正因子,用相对校正因子计算各成分的量,同时对13批银黄片一测多评的计算结果与外标实测值进行比较,并考察了不同品牌仪器和不同厂家色谱柱进行考察。方法准确性评价结果表明利用一测多评法在不同色谱柱的计算值与外标实测值之间没有显著性差异。3样点测定结果目前一测多评法中校正因子的计算,文献[11，21]普遍采用多点校正后求平均值的方法。但如果其中2个点前后偏差较大时,便直接影响整个平均值,导致计算值出现一定的偏差。另外,色谱峰的准确定位是一测多评法技术的应用前提,一般采用保留时间差或相对保留值等参数结合色谱图整体特征,以及每个峰的紫外吸收特征来定位其余待测成分的色谱峰。但由于不同实验仪器及色谱柱的差异较大,保留时间出现漂移,导致有些结果可能出现较大偏差。何兵等以双黄连口服液为研究对象,采用3种校正方法(多点校正、斜率校正、定量因子校正)建立双黄连口服液中绿原酸与11个活性成分(新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷A、野黄芩苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、连翘苷及汉黄芩苷)之间的相对校正因子,同时采用线性回归法定位色谱峰,实现只用一个对照品测定双黄连口服液中12个成分的含量。结果表明在一定线性范围内,以3种校正方式所得校正因子计算结果与外标法或线性回归法并无显著性差异,且该法更简便快捷、结果准确可靠、具有良好的重现性,而线性回归法定位色谱峰比文献采用相对保留时间更准确。可见采用标准曲线斜率之比计算校正因子,即使有几个点存在较大偏差,其对整个标准曲线斜率影响不大,相对多点校正更科学合理。而且斜率校正无需逐个浓度计算校正因子求平均值,直接以标准曲线斜率计算,相对更快捷。此外,通过线性回归法推导出相应的校正方程,并用该方程快速推测各成分理论出峰时间,若该色谱峰临近还有其他色谱峰,再根据紫外吸收光谱、整体峰形或峰面积比,即能在一定程度上准确定位色谱峰。4测多评法的原则中药化学成分的研究是一项复杂庞大的工程,涉及众多学科的交叉结合。一测多评法的提出,解决了部分因对照品价格昂贵或难供应成分指标检测的难题,实现了多指标成分同时检测,也为中药质量新的评价模式提供了更好的分