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食品中大肠菌群的检验与分析GB4789．3-2016第二法大肠菌群计数法大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征

典型菌落为紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为0.5mm或更大。试验流程1、样品的稀释（1）液体样品以无菌吸管吸取25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分棍匀，制成1:10

的样品匀液。（2）样品匀液的pH值应在6.5-7.5

之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCI）调节。（3）用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10

样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100

的样品匀液。

（4）、根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min

。2、平板计数（1）选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1mL。同时分别取1mL生理盐水加入两个无菌平皿作空白对照。（2）及时将15mL-20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL-4mLVRBA

覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±l℃培养18h-24h。

（3）平板菌落数的选择选取菌落数在15-150

之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。

结晶紫中性胆盐琼脂

（4）、证实试验

从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB

肉汤管内，36℃±1℃培养24h-48h

，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。

2、平板计数

（5）大肠菌群平板计数的报告

经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以（3）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×10

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