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文档简介

基因工程制药实例一、干扰素的介绍组成：是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），根据结构可分为α、β、γ、ω等四种类型。作用：是一种广谱抗病毒剂，具有抗病毒、抑制细胞增殖、调节免疫及抗肿瘤作用。特点：具有高度的种属特异性。二、干扰素的生产方法1、血液制取产量极低、价格昂贵，无法普及推广。2、基因工程菌发酵生产利用重组大肠杆菌进行发酵，实现大规模生产。三、干扰素发酵工艺过程1、菌种制备取零下70℃下保存的甘油管菌种，接种于摇瓶，培养温度30℃，pH值7.0，250rpm活化培养18±2h后，进行吸光值测定和杂菌检查。2、种子罐培养将活化菌种接入种子罐，接种量10%，培养温度30℃，pH值7.0，调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧为30%，培养3-4小时，当OD值达到4.0以上时，转入发酵罐，进行二级放大培养，同时注意杂菌检查。3、发酵罐培养将种子液接入发酵罐中，接种量10%，培养温度30℃，pH值7.0。调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧为30%，培养4h。然后控制培养温度20℃，pH值6.0，溶解氧为60%，继续培养5~6.5h，当菌体OD值达到9.0±1.0后，用冷水快速降温至15度以下，以减缓细胞衰老，或者将发酵液转入收集罐，加入冰块，使温度迅速将至10℃以下。4、菌体收集将已降温至20℃以下的发酵液转入离心机，1600r/min离心收集。进行干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体干燥、质粒结构一致性、质粒稳定性等项目的检测。菌体于-20℃保存时不能超过12个月，每保存13个月，检查一次活性。四、干扰素分离纯化工艺1、菌体裂解用纯化水配置裂解缓冲液，降温至2~10℃。将-20℃雷动的菌体破碎，加入裂解缓冲液（pH7.0）中，2-10℃搅拌2h，利用冷冻复融分散，将细胞完全破碎，释放干扰素蛋白。2、沉淀向裂解液中加入聚乙烯亚胺。2~10℃下气动搅拌45min，对菌体碎片进行絮凝。然后向裂解液中加入醋酸钙溶液，2~10℃下气动搅拌15min，对菌体碎片、DNA等进行沉淀。3、离心在2~10℃下，将悬浮液在连续流离心机上于16000r/min离心。收集含有目标蛋白的上清液，细胞壁等杂质沉淀在121℃蒸汽30min后焚烧处理。4、盐析将收集的上清液用4mol/l硫酸铵进行盐析，2~10℃搅拌静置过夜。5、离心与储存将盐析液在连续流离心机上于16000r/min离心，沉淀即为粗干扰素，放入聚乙烯瓶中，于4℃冰箱保存，不能超过3个月。灭菌灭菌配置培养基离心与储存离心盐析生产菌接种菌种活化种子培养发酵培养

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