月季组培实验报告

月季快速繁殖实验报告月季介绍月季花(学名:RosachinensisJacq.)被称为花中皇后，又称“月月红”,是常绿、半常绿低矮灌木，四季开花.-般为红色.或粉色、偶有白色和黄色.可作为观赏植物，也可作为药用植物，亦称月季。有三个自然变种,当代月季花型多样,有单瓣和重瓣，尚有高心卷边等优美花型;其色彩艳丽、丰富,不仅有红、粉黄、白等单色，尚有混色、银边等品种;多数品种有芳香。月季的品种繁多，世界上已有近万种，中国也有千种以上。一、实验目的1.掌握月季快繁体系:①母株的选择②外植体消毒与接种③诱导培养④生根培养⑤.驯化移栽的操作流程2.掌握无菌操作的植物组织培养办法;3.通过配备ms培养基母液，掌握母液的配备和保存办法;4.理解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最后长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。二、实验原理(一)植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至，单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成--完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织构造的细胞团,即愈伤组织。这-过程称为"脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。(二)植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都含有该植物的全套遗传基因,在一定培养条件下每个细胞都可发育成一种与母体一-样的植株。(三)组织的分化外植体诱导出愈伤组织后，通过继代培养，能够在愈伤组织内部形成一类分生组织即含有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些状况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。(四)培养基的构成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近,似成功地使用该培养基进行组织培养的重要条件。营养培养基-般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素(生长调节剂)和涉及有机氮、酸和复杂物质的添加剂构成。(1)诱导培养:MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。(2)增殖培养:MS+6-BA1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。(3)生根培养:1/4MS+IBA0.05mg/L+2.5g/L活性炭+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。三、实验器材:高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、酒精灯、喷雾器等。四、实验材料:月季五、实验药品:药品、70%酒精、0.1%升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、84消毒液、蔗糖、琼脂等。六、实验环节.(一)母株的选择月季组培外植体普通采用带芽茎段。枝条中部的腋芽萌发较顶部和基部时间早，且中部的腋芽长势好，增殖系数高，另首先是基部，再次是顶部。另外，天气晴好时取材初代培养的成功率要比阴雨天要高。(二)外植体解决(1)采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗衣粉水认真刷洗，再用自来水冲洗，帥擦干后，放置在小木板上,用刀切成2-3厘米-段,每段最少-个侧芽,装入烧杯中流水冲洗30min后，放在超净工作台上.(2)70%酒精30s-0.1%升汞6min-无菌水2min(3次)（三）培养基母液的配制(四)培养基的配制以配制1L的ms培养基为例进行以下操作:(1)取1|的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾;(2)分别取(三)中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌;(3)称取30g蔗糖加入，边加边搅拌;(4)称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解;(5)定容至1|,加入激素母液，用naoh调ph6.0左右;(6)将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用绳子扎紧;(7)放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右;(8)灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台.上令其冷却凝固。(五)高压蒸汽灭菌锅的使用办法具体操作环节:(1)高压锅放水至平把架;(2)把包扎好的培养基装入高压锅;(3)盖上热压锅盖,.上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关.上气阀和安全阀;(4)然后接通电源;(5)压力计升至0.05mpa时，打开放气阀,排除泠空气(此步很重要);.(6)排除冷空气后，关闭放气阀，待压力升到0.11mpa位置时，开始计算灭菌时间,具体办法:当压力锅指针升至0.12mpa时,关闭电源，待指针下降至0.11mpa时接通电源，不停重复此操作过程，维持20分钟;(7)灭菌时间达成20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐步放气)（六)接种①取材:将采集的月季茎段冲洗干净，分装到烧杯中，放入超净工作台;先用70%酒精浸没并轻摇15s进行欲消毒;倒出酒精，加入0.1%二氯化汞浸没;倒净二氯化汞。用无菌水冲洗3次，将废液倒弃备用。②解下培养瓶.上包头纸的线绳，并将培养瓶整洁地排列在接种台的左侧，然后用70%的酒精棉球从内向外擦接种台面。③在酒精灯下用用镊子在消毒瓶内取.出材料置于培养皿内的无菌滤纸上吸干水分，右手持镊子左手拿灭过菌的解剖刀快速地将茎段切成剪成每段2~3cm最少有1个侧芽，用镊子将外植体快速地在酒精上接入培养瓶内。系好线绳，移出净化台或接种箱,写好标签，外植体的名称、种类、接种日期、接种人等，移入培养室进行培养。七、实验成果1.诱导培养诱导培养:MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。诱导芽的分化添加不同浓度的BA和NAA的MS培养基上进行起始培养，增加适量NAA有利离体侧芽分化，但浓度过高会仅诱导大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长。因此要选择适宜的浓度比例进行培养,让芽更加好的分化。10月26号11月02号失败因素分析：取材母株瘦弱应根据培养目的适宜选用材料,选择原则:易于诱导、带菌少。要选用植物组织内部无菌的材料。这首先要从强健的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另首先要在晴天，最佳是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。由于强健的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有本身消毒作用，这种组织普通是无菌的。培养材料的消毒从外界或室内选用的植物材料，都不同程度地带有多个微生物。这些污染源一-旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此,植物材料必须经严格的表面灭菌解决，再.经无菌操作手续接到培养基上。重新取材重复以上实验诱导芽的分化添加不同浓度的BA和NAA的MS培养基上进行起始培养，增加适量NAA有利离体侧芽分化，但浓度过高会仅诱导大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长。因此要选择适宜的浓度比例进行培养,让芽更加好的分化。11月16日11月23日继代增殖将诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加6-BA、NAA等激素的MS培养基中，进行增殖继代。低浓度的6一BA有助于不定芽的增殖，浓度过高则克制不定芽增殖，适量NA.A有助于芽和叶生长,但浓度过高诱导产生大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长。在NAA浓度相似而BA浓度不同的培养基中，随BA浓度的升高，芽苗的增殖系数也对应提高。在BA浓度相似而NAA浓度不同的培养基中，随NAA浓度升高,小芽生长速度加紧，继代所需时间对增殖系数也有一定的影响。12月03号12月15日培养物的壮苗生根与试管苗移栽诱导外植体获得的芽需要进一步培养增殖，才干发挥快速繁殖的优势。当材料增殖到一定数量后，还需要进行壮苗与生根。生根培养生根要将原来培养基中的大量元素减半(既1/2MS)，并去除BA进行根的诱导,多数实验采用的培养基为1/2MS(大量元素减半)。由于无菌芽苗在分化与增殖培养基中只诱导地上部分，既不停地分枝增殖，曾多次出现现蕾、开花现象，但均不，易生根。生根时，只需用生长素IBA即可,IBA浓度为0.5mg/L对生根是较为适宜的浓度，而不必向在诱导植物芽的分化时必须按一定比例配比细胞分裂素与生长素混合使用移栽生根苗移栽时间的选择很重要，过早或过晚都不利于再生苗的成活。锻炼时间与移栽成活率有关，炼苗7d以上，成活率达成95%。影响移栽成活率的重要因素有3个:湿度、温度以及基质种类和带菌量移栽迈进行短期的开瓶炼苗，能够增加幼苗对外界环境的适应能力，但在开瓶期间往往容易滋生杂菌，反而不利于幼苗的生长。采用将再生苗直接移栽入栽培基质的办法，获得了较好的效果。这样操作，不仅省去炼苗的麻烦，并且减少了污染，提高了成活率。八、注意事项配制母液1、配制母液时注意药品只能出不能进。2、制作标签时只能能用铅笔写，避免油性笔笔迹在高压灭菌后含糊不清。培养基的制备与灭菌1、配制培养基前先大致预计一下药品数量，不够时提前配制。2、三角瓶灭菌时注意要放干净冷空气。3、加的药品种类较多，切忌加错。4、注意把三角瓶用密封完好。5、灭完菌的三角瓶勿动，等待培养基冷却凝固。6、琼脂不可加太快，以防加太快琼脂结块。无菌植株的建立1升汞有剧毒，操作要小心。2接种时瓶口一-定要在酒精灯火焰上方，瓶口要朝下以减少污染率。注意:实验人员进入接种室接种之前，应先接种前一定要用新洁尔灭等消毒水擦拭，70%~75%酒精进行喷洒杀菌降尘，另首先一盏酒精灯也是必不可少的，不管是开母苗之前还是接种过程或是开关子瓶培养基,都应当在酒精灯上操作。操作过程中全部的动作都应尽量的小幅度，特别是不能横扫全部灭过菌的东西，如:消过毒的镊子、手术刀、培养皿等;接苗是手指不能接触到瓶口，如果镊子不小心碰到瓶口或台面那就不要犹豫，直接换掉;分切的整个过程动作要快，时间越长越容易污染。九、实验成果分析在含有营养物质及植物生长物质的培养液中，培养离体植物组织(器官或细胞)并诱导使其长成完整植株的技术。植物的组织培养是根据植物细胞含有全能性这个理，论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产含有经济价值的其它产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再通过再分化形成再生植物。植物组织培养不仅仅局限于培养基的培养，还包含有试管苗的移栽技术。通过组织培养得到的植物体的特点:组织培养得到的植物体的遗