杨梅化学成分研究

杨梅化学成分研究

杨梅（李子）iieb。etzecc。该植物为多年生乔木，种植在多边木林中。分布于江苏省、浙江省、江西省、福建省、湖南省、广东省、广东省和台湾省、日本和朝鲜。杨梅树皮味苦、性温,具有散瘀止血、止痛之功效,民间用于治疗跌打损伤、骨折、痢疾、胃和十二指肠溃疡、牙痛等。杨梅树皮的化学成分已有报道,至今已从杨梅树皮中分离得到黄酮类、单宁类、三萜类和二芳基庚烷类等化合物。作者利用反复硅胶吸附柱色谱,从杨梅树皮中分离得到8个化合物。通过理化性质及NMR、MS等波谱手段进行了结构鉴定。1高效液相色谱法测定柱色谱试剂ARX-300核磁共振仪(TMS为内标,瑞士Bruker公司),MP-S3显微熔点测定仪(温度未校正,日本Yanaco公司),LC-MS质谱仪(美国Thermofinnigan公司)。薄层用硅胶GF254和柱色谱用硅胶(50～71μm,青岛海洋化工厂),HPD400大孔树脂(河北沧州宝恩化工有限公司),羟丙基葡聚糖凝胶LH-20(瑞士Pharmacia公司)。柱色谱所用的试剂(分析纯,市售),氘代试剂(美国CIL产品,北京汉威士波谱公司分装),常规试剂(天津康科德化工有限公司)。杨梅树皮购自宁波立华植物提取有限公司,由沈阳药科大学中药学院路金才副教授鉴定为杨梅(Myricaruba(Lour.)Sieb.etZucc.)的树皮。2化合物的分离取干燥杨梅树皮6kg,用体积分数70%的乙醇溶液回流提取3次,合并提取液,减压浓缩得浸膏640g;将浸膏混悬于适量的水中,分别用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。乙酸乙酯部分(64g)经硅胶柱色谱分离,用三氯甲烷-甲醇梯度洗脱,所得流分进行反复硅胶柱色谱分离,结合羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱分离和重结晶得到化合物1、3、5～8。正丁醇部分(240g)经硅胶柱色谱分离,用三氯甲烷-甲醇梯度洗脱,所得流分进行反复硅胶柱色谱分离,结合羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱分离和重结晶得到化合物2、4。3化合物3的理化性质和波谱表3化合物1:白色针状结晶(CHCl3-MeOH),mp207.0～208.0℃。溴甲酚氯反应阳性,提示结构中含有羧基;三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示结构中存在酚羟基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:9.24(1H,s,4-OH)、7.20(2H,s,H-2,6)、3.80(6H,s,3,5-OCH3)。13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:167.3(C=O)、147.5(C-3,5)、140.3(C-4)、120.5(C-1)、106.9(C-2,6)、56.1(3,5-OCH3)。化合物1的波谱数据与文献波谱数据基本一致,故确定化合物1为丁香酸(syringicacid)。化合物2:白色针晶(MeOH),mp152.0～153.0℃。1H-NMR(600MHz,C5D5N)谱中:δ0.81(3H,t,H-4)、1.35(2H,m,H-3)、1.54(2H,m,H-2)、3.70(2H,m,H-1)为正丁基脂肪链上质子信号;δ4.08、4.00(各1H,d,J=12.0Hz,H-1′)为果糖端基质子信号;δ4.88(1H,d,J=9.6Hz,H-3′),4.52(1H,dd,J=9.8、3.6Hz,H-4′),4.35(1H,brs,H-5′),4.19、4.34(各1H,d,H-6′)为果糖上其他质子信号。13C-NMR(150MHz,C5D5N)谱中:δ4.2(C-4)、19.9(C-3)、32.7(C-2)、60.7(C-1)为正丁基碳信号,δ64.3(C-1′)、101.1(C-2′)、70.6(C-3′)、72.4(C-4′)、71.4(C-5′)、65.0(C-6′)为β-D-吡喃果糖碳信号。将化合物2进行酸水解,薄层法检出有果糖,推测该化合物为正丁基-β-D-吡喃果糖苷。经与文献对照,数据基本一致,故确定化合物2为正丁基-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl-β-D-fructopyranoside)。化合物3:无色针状结晶(MeOH),mp159.0～160.0℃。溴甲酚氯反应阳性,提示结构中含有羧基;三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示结构中存在酚羟基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)谱中:δ7.77(1H,dd,J=1.4、7.8Hz,H-6)、7.43(1H,dt,J=1.4、9.0Hz,H-4)、6.88(1H,t,J=8.3Hz,H-5)、6.84(1H,d,J=7.5Hz,H-3)为邻取代苯环上6,4,3,5位氢质子信号。经与水杨酸标准品共薄层对照,Rf值相同,混合测定熔点不下降。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献对照,确定化合物3为水杨酸(salicylicacid)。化合物4:白色粉末(MeOH),mp244.0～254.0℃。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示结构中有酚羟基;盐酸-镁粉反应阳性,提示为黄酮类化合物。1H-NMR(600MHz,C5D5N)谱中:δ11.89、10.81、8.89、8.21为黄酮苯环上的酚羟基信号;δ6.40(2H,s)为B环2′,6′位氢质子信号;δ5.90(1H,d,J=1.6Hz)和δ5.86(1H,d,J=1.6Hz)为A环6,8位氢质子信号;将其核磁数据与化合物6(杨梅素)对照,发现高场区多了1组氢信号:δ4.90(1H,d,J=10.4Hz)和δ4.41(1H,d,J=10.4Hz),提示为C环2,3位氢质子信号。根据偶合常数确定H-2和H-3构成了反式二直立键系统,其余信号基本一致,表明该化合物为二氢黄酮类化合物。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献对照,确定化合物4为白蔹素(ampelopsin)。化合物5:无色针状结晶(MeOH),mp234.0～236.0℃。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,溴甲酚氯反应阳性,提示结构中存在酚羟基和羧基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.91(2H,s,H-2,6)。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献对照,确定化合物5为没食子酸(gallicacid)。化合物6:棕黄色针晶(MeOH),mp323.0～325.0℃。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示结构中有酚羟基存在;盐酸-镁粉反应阳性,提示为黄酮类化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)谱中:δ12.50、9.19为黄酮苯环上的酚羟基质子信号,δ7.25(2H,s)为黄酮B环2′,6′位的氢质子信号,δ6.37(1H,d,J=1.8Hz)和δ6.18(1H,d,J=1.8Hz)为黄酮A环6,8位的氢质子信号。因此推测该化合物可能为3,5,7,3′,4′,5′-六羟基黄酮。经与对照品杨梅素共薄层,在3种溶剂系统下其Rf值和斑点颜色均一致,混合测定熔点不下降。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献对照,确定化合物6为杨梅素(myricetin)。化合物7:黄色颗粒状结晶(MeOH),mp182.0～184.0℃。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示结构中有酚羟基;盐酸-镁粉反应阳性,Molish反应阳性,提示该化合物可能为黄酮苷类化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)谱中:δ12.67、9.23为黄酮苯环上的酚羟基质子信号,δ6.88(2H,s)为黄酮B环2′,6′位氢质子信号,δ6.36(1H,d,J=1.8Hz)和δ6.19(1H,d,J=1.8Hz)为黄酮A环6,8位的氢质子信号,δ5.19(1H,brs)为糖的端基氢质子信号,δ0.83(3H,d,J=6.3Hz)为鼠李糖6位甲基质子信号。将化合物7进行酸水解,薄层检出鼠李糖。将化合物7的波谱数据与化合物6(杨梅素)相比,除多了1组糖信号外,其余数据基本一致,表明化合物7与化合物6(杨梅素)具有相同的A、B结构,因此推测成苷位置在3位,即5,7,3′,4′,5′-五羟基黄酮-3-O-鼠李糖苷。经与对照品杨梅苷共薄层,在3种溶剂系统下其Rf值和斑点颜色均一致,混合测定熔点不下降。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献对照,确定化合物7为杨梅苷(myricitrin)。化合物8:红色无定形粉末(MeOH),mp208.0～210.0℃。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,提示结构中存在酚羟基。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)谱中:δ5.91(1H,brs)和δ5.81(1H,brs)为黄酮A环6,8位氢质子信号,δ6.38(2H,s)为黄酮B环2′,6′位氢质子信号,δ4.94(1H,brs)和δ5.34(1H,brs)为黄酮C环2,3位氢质子信号,δ2.91(1H,brs)和δ2.63(1H,brs)为黄酮C环4位上的亚甲基氢质子信号。以上数据提示化合物8具有黄烷类化合物的结构母核。δ6.80(2H,s)为没食子酰基的氢质子信号,将化合物8的核磁数据与化合物1(白蔹素)的对照,发现低场区的氢信号基本一致,提示化合物8与化合物1(白蔹素)具有相同的A、B环结构;而其3位氢信号较化合物1(白蔹素)向低场位移了0.93个化学位移单位,提示没食子酰基连于3位上。综合以上理化性质和波谱数据,并与文献对照,确定化合物8为儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate)。4不同种类的抗氧化药从杨梅树皮中分离得到8个化合物,分别为丁香酸(syringicacid,