地榆、白芷、白对溃疡性结肠炎大鼠血清il-1、il-10及肠组织中nf-b表达的影响

地榆、白芷、白对溃疡性结肠炎大鼠血清il-1、il-10及肠组织中nf-b表达的影响

溃疡性胃炎（iu）是一种常见的非特异性肠炎，发病率和发病率日益增加。UC病变部位主要在结肠黏膜层。本病的病因与发病机制尚未完全明确,但研究表明发病机制与宿主遗传易感性、机体免疫应答及肠黏膜免疫识别失调密切相关。由于环境始发因素在一定程度上破坏了肠上皮屏障,可以导致体内细胞因子水平异常,炎性细胞活化数量增加,进而导致机体免疫系统的失调,释放更多的炎性因子,造成组织损伤。在细胞凋亡、肿瘤、炎症及自身免疫性疾病的发生过程中,核因子kB(NF-kB)作为调节基因表达的核转录因子参与了上述过程。有学者提出,NF-kB活化可以促进TNF-α、IL-1β等多种炎性细胞因子的基因转录过程,这种活化作用会在一定程度上影响UC的发生发展。本研究旨在探讨地榆、白芷、白蔹对慢性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中NF-KB及血清中IL-1β、IL-10含量的影响。1材料和方法1.1体质量,饲养成年雄性SD大鼠(购自江苏省实验动物中心)48只,体质量(250±50)g,常规饲养,自由饮水、饮食。随机分为正常组、模型组、地榆组、白芷组、白蔹组及巴柳氮钠组,每组各8只。1.2实验方法1.2.1大鼠麻醉前处理除正常组外,其余各组均参考文献方法建立结肠炎大鼠模型:d1,禁食24h;d2,4%的戊巴比妥钠1mL/100g腹腔注射麻醉,灌胃针插入大鼠肛门8cm处注入三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液;d4,正常组及模型组给予生理盐水2mL灌胃,地榆组、白芷组、白蔹组分别予以1g/mL的地榆、白芷、白蔹(4g/kg)灌胃;巴柳氮钠组给予巴柳氮钠水溶液(0.16g/kg)灌胃;d5～d10每日给药1次。1.2.2离心血样,取血液液相d15,将各组大鼠麻醉后,打开胸腔暴露心脏,剪开右心耳,一次性离心管取血5mL左右,1500r/min离心15min后取上清液,-20℃冰箱中保存。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-1β、IL-10浓度。具体方法及操作步骤按试剂盒说明书进行。1.2.3结肠典型损伤情况采血后打开大鼠腹腔,取远端结肠10cm左右,沿纵轴剪开肠管并用生理盐水冲洗干净,根据参考文献所述标准进行结肠大体形态损伤评分:0分,无损伤;1分,黏膜充血;2分,溃疡面积≤受损面积25%;3分,溃疡面积为受损面积25%～50%;4分,溃疡面积≥损面积50%。1.2.4苏木精-伊红染色h取大鼠病变结肠标本经4%多聚甲醛固定(4℃)4h以上,石蜡包埋切片,片厚3～5μm,进行HE染色,光镜下观察。1.2.5蛋白免疫印迹法检测鲜肠组织蛋白表达各组大鼠打开腹腔后,称取50mg新鲜肠组织放入匀浆器中,冰浴匀浆后,12000r/min离心10min,取上清液,蛋白免疫印迹法测定蛋白含量。1.3纳片、if-基于nf-基于pmb的药物地榆、白芷、白蔹为自燕兴中药饮片有限公司产品。巴柳氮钠纳片为山西安特生物制药股份有限公司产品。I抗NF-kBp65为美国Sigma公司产品;IL-1β、IL-10ELISA试剂盒由北京中山金桥试剂有限公司进口分装。2结果2.1各组大鼠肠道粘连、肠道水肿及体质量的比较造模后,大鼠均出现食量下降、稀便等消化系症状以及毛发无光泽、慵懒嗜睡、体重下降等改变,提示造模成功。地榆组、白芷组、白蔹组及巴柳氮钠组经治疗后上述表现明显好转。打开腹腔后,可见正常组大鼠结肠黏膜组织形态基本正常,无明显溃疡。模型组大鼠可见肠道粘连,局部充血、糜烂、溃疡等溃疡性结肠炎表现。地榆、巴柳氮钠组大鼠结肠病变明显减轻,仅局部见轻度充血水肿,未见明显溃疡。白芷组大鼠肠壁无明显增厚,皱褶较正常,但少数大鼠肠黏膜可见明显充血、水肿,其中1只大鼠结肠可见明显溃疡。白蔹组部分大鼠肠壁轻度增厚、皱褶部分消失,有1只大鼠可见肠组织小面积坏死,肠黏膜充血、水肿,溃疡面积较模型组有所缩小。由表1可见,与正常组比较,其余各组大鼠的体质量增加比均有不同程度的下降;经过药物治疗后,地榆组、白蔹组及巴柳氮钠组大鼠体质量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。大体形态评分显示,与模型组比较,地榆组、白芷组、白蔹组及巴柳氮钠组的病变程度明显减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。2.2各组大鼠肠黏膜组织的变化经HE染色,光镜下可见正常组大鼠结肠壁各层结构清晰,无水肿、糜烂及溃疡形成。模型组大鼠结肠黏膜组织可见黏膜层、黏膜下层广泛溃疡形成,大量炎性细胞浸润。经药物干预后,各治疗组大鼠结肠黏膜组织均有不同程度的修复。地榆组、巴柳氮钠组大鼠肠黏膜组织较模型组病变明显减轻,溃疡愈合,隐窝脓肿消失,黏膜表现为轻度慢性炎症,炎性细胞浸润明显减少。白芷组大鼠肠黏膜组织主要表现为中度慢性炎症,部分黏膜及黏膜下层仍有少量炎性细胞浸润,坏死的黏膜上皮基本修复,腺体杯状细胞增多,隐窝脓肿消失,1/10只仍有节段性溃疡存在,溃疡处黏膜上皮缺损,肉芽组织增生明显,较多的炎性细胞浸润,肌层水肿及炎性细胞浸润,浆膜层仍可见炎性细胞浸润。白蔹组少数大鼠结肠黏膜存在部分缺失,腺体部分不完整,杯状细胞中度变形,黏膜及黏膜下层有较多炎性细胞浸润,有1只大鼠肠组织仍可见明显溃疡,溃疡处黏膜上皮缺损,肉芽组织增生明显,有较多的炎性细胞浸润(图1)。2.3各组大鼠血清中il-10含量比较与模型组比较,地榆组、白芷组、巴柳氮钠组大鼠血清中IL-1β水平明显降低(P<0.01);地榆组、白芷组、白蔹组、巴柳氮钠氮组大鼠血清中IL-10含量显著升高(P<0.01)。与正常对照组相比,地榆组、白芷组、巴柳钠组大鼠血清中IL-10水平均明显升高(P<0.01)(表2)。2.4蛋白表达水平模型组与其余各组相比,肠组织中NF-κBp65蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与白蔹组相比,地榆组、巴柳氮钠组、白芷组下调NF-κBp65蛋白表达更明显(P<0.01),见表3,图2。3不同途径分离人体内il-1和nf-东南角,表达对资金、局部的作用溃疡性结肠炎是一种局限于结肠黏膜及黏膜下层的炎症过程。病变部位多位于乙状结肠和直肠,也可延伸至降结肠,甚至整个结肠。组织病理过程漫长,常反复发作,近几年为基础和临床研究的热点。溃疡性结肠炎的病因至今仍不明确。虽有多种学说,但目前还没有肯定的结论。研究发现,UC的一个重要发病机制源于各种细胞因子之间的相互作用,这种错综复杂的细胞因子间的网络作用能够在一定程度上促进炎症反应的发生发展,导致黏膜损伤。根据细胞因子在炎症发生中的作用效果,可以分为促炎细胞因子和抑炎细胞因子,这两者间的平衡失调也被认为是UC发病的重要机制之一。IL-1β能刺激其他细胞因子和炎性细胞产生大量的炎症递质,还可以在一定程度上诱发抗原呈递细胞(APC)表面免疫分子表达增加,还能促进血管内皮-白细胞黏附分子的表达,趋化炎性细胞进入肠道病变部位,引起一系列肠道炎症反应和组织破坏。IL-10可以在mRNA水平上抑制激活的免疫细胞,下调活化的单核细胞和巨噬细胞转录分泌相关细胞因子。本实验结果显示,在模型组中IL-1β的表达显著高于其他各组,而抑炎性细胞因子IL-10表达水平在模型组中明显降低。NF-KB作为调节细胞基因转录的关键因子,在机体免疫应答、炎症反应等方面发挥着重要作用。笔者在探讨溃疡性结肠炎大鼠血清中IL-1β、IL-10水平、肠组织中NE-KB蛋白表达情况