第十四章 农药、兽药与霉菌毒素残留量的测定

第十四章农药、兽药与霉菌毒素残留量的测定主要内容食品中农药残留量的常规测定方法食品中农药残留的快速检测方法食品中兽药残留检测方法霉菌毒素残留分析第一节.食品中农药残留量的常规测定方法

一、概述：农药残留是指由于存留在农产品、或食品药材等产品中的农药及其降解代谢产物,还包括环境背景中存有的农药污染物或持久性农药的残留物再次在产品中形成的残留。一般来说,农药残留量是指农药本体及其代谢物的残留量的总和,表示单位为mg/kg。1.色谱技术1）薄层色谱法（TLC)2）纸色谱3）气相色谱法（GC）4）高效液相色谱法（HPLC）5）色—质联用技术2.电化学方法二、食品中有机氯农药残留量的测定一）气相色谱法（GB5009.19-2003）操作方法（1）提取粮食：称取样品→石油醚提取→过滤到分液漏斗→定至约100ml

蔬菜：称取样品→捣碎→取匀浆→丙酮提取→过滤到分液漏斗→石油醚提取→加硫酸钠溶液→分离→石油醚层过滤至分液漏斗→定至约100ml

肉类及动物组织：称取绞碎样品→加硫酸钠研磨→加石油醚提取→浓缩至约100ml（2）净化

3）测定①色谱条件电子捕获检测器（ECD）气化室温度：190℃（215℃）色谱柱温度：160℃（195℃）检测器温度：165℃（225℃）载气流速：60ml/min（90ml/min）色谱柱：固定液1.5%OV-17和2%QF-1，担体白色硅藻土（80~100目），3~4mm×2m②标准曲线制备3）测定

③样品测定

第四节食品中有机磷农药残留量测定一、有机磷农药的结构与性质有机磷农药是指在组成上含有磷的有机杀虫剂、杀菌剂等。主要类型有：磷酸酯型，如久效磷、磷胺等；二硫代磷酸酯型，如马拉硫磷、乐果、甲拌磷、亚胺硫磷等；硫酮磷酸酯型，如对硫磷、甲基对硫磷、内吸磷、杀螟松等；硫醇磷酸酯型，如氧化乐果、伏地松；磷酰胺型，如甲胺磷、乙酰甲胺磷；膦酸酯型，如敌百虫、苯脯磷有机磷农药种类很多，按毒性分为高毒（剧毒）、中毒、低毒三类；溶解性：多数难溶于水，可溶于有机溶剂水解性：在碱性介质中易水解氧化性：硫代磷酸酯类在溴、紫外线等作用下其中的S可被O取代。酶抑制活性：可抑制羧酸酯酶、胆碱酯酶的活性第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法本标准规定了水果、蔬菜、谷类中敌敌畏、速灭磷、久效磷、甲拌磷、巴胺磷、二嗪农、乙嘧硫磷、甲基嘧啶硫磷、甲基对硫磷、稻瘟净、水胺硫磷、氧化喹硫磷、稻丰散、甲喹硫磷、克线磷、乙硫磷、乐果、喹硫磷、对硫磷、杀螟硫磷的残留量分析方法。1.1原理样品经提取、净化后注入气相色谱仪测定。含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以HPO*碎片的形式，放射出波长526nm的特征光；这种光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后被记录下来。样品的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法

1.2试剂、仪器1.3试样的制备

取粮食样品经粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非可食部分后制成待分析试样。1.4分析步骤

1.4.1提取

水果、蔬菜称取50.00g试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮(提取液总体积为150mL)，用组织捣碎机提取1~2min。匀浆液经铺有二层滤纸和约10gCelite545的布氏漏斗减压抽滤。从滤液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。

谷物称取25.00g试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮，以下步骤同上。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法

1.4分析步骤

1.4.2净化

向滤液中加入10~15g氯化钠使溶液处于饱和状态。猛烈振摇2~3min，静置10min，使丙酮从水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再静置分层。

将丙酮与二氯甲烷提取液合并，经装有20~30g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水滤入250mL圆底烧瓶中，再以约40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水硫酸钠。洗涤液也并入烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至约2mL，浓缩液定量转移至5~25mL容量瓶中，加二氯甲烷定容至刻度。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法

1.4分析步骤

1.4.3气相色谱测定

色谱参考条件

色谱柱:a.玻璃柱2.6m×3mm(i.d)，填装涂有4.5%(m/m)DC200＋2.5%(m/m)OV-17的ChromosorbW/AW/DMCS(80~100目)的担体。

b.玻璃柱2.6m×3mm(i.d)，填装涂有1.5%(m/m)DCOE-1的ChromosorbW/AWDMCS(60~80目)。

气体速度氮气(N2)50mL/min、氢气(H2)100mL/min、空气50mL/min。

温度：柱箱240℃、汽化室260℃、检测器270℃。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）1.水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法

1.4分析步骤

1.4.4测定吸取2~5μL混合标准液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与标准比较定量。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）2.粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法本标准规定了粮、菜、油等食品中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、杀螟硫磷、倍硫磷、虫螨磷的测定方法。

原理、试剂、仪器同1.水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法分析步骤

2.1提取与净化

蔬菜：将蔬菜切碎混匀。称取10.00g混匀的样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加30～100g无水硫酸钠(根据蔬菜含水量)脱水，加0.2~0.8g活性炭(根据蔬菜色素含量)脱色。加70mL二氯甲烷，在振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤。量取35mL滤液，在通风柜中室温下自然挥至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入10mL(或5mL)具塞刻度试管中，并定容至2.0mL，备用。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）2.粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法分析步骤

2.1提取与净化稻谷：脱壳、磨粉、过20目筛、混匀。称取10.00g，置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。如农药残留量过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液浓缩并定容至2.0mL进样。小麦、玉米：将样品磨碎过20目筛、混匀。称取10.00g置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝、0.2g活性炭及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。如农药残留量过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液浓缩，并定容至2mL进样。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）2.粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法分析步骤

2.1提取与净化植物油第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）2.粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法分析步骤2.2气相色谱测定

色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长1.5～2.0m。

分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱柱。a.内装涂以2.5%(m/m)SE-30和3%(m/m)QF-混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。b.内装涂以1.5%(m/m)OV-7和2%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。c.或内装涂以2%(m/m)OV-101和2%(m/m)QF-混合固定液的60～80目ChromosorbWAWDMCS。

分离测定甲拌磷、虫螨磷、稻瘟净、倍硫磷和杀螟硫磷的色谱柱。a.内装涂以3%(m/m)PE-GA和5%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。b.内装涂以2%(m/m)NPGA和3%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）2.粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法分析步骤2.2气相色谱测定

气流速度：载气为氮气80mL/min；空气50mL/min；氢气180mL/min(氮气、空气和氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件)。

温度：进样口为220℃；检测器为240℃；柱温为180℃，(测定敌敌畏为130℃)第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）2.粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法分析步骤2.2气相色谱测定将混合农药标准使用液2~5μL分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高。分别绘制有机磷标准曲线。同时取样品溶液2~5μL注入气相色谱仪中，测得的峰高从标准曲线图中查出相应的含量。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）3.肉类、鱼类中有机磷农药残留量的测定方法

本标准适用于肉类、鱼类中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷农药的残留分析。敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷最低检出量为0.6，0.3，0.3，0.15ng，当进样量相当于0.002g时，最低检出浓度分别为0.03，0.015，0.015，0.008mg/kg。

原理、试剂、仪器同前。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）3.肉类、鱼类中有机磷农药残留量的测定方法分析步骤

提取净化：将有代表性的肉、鱼样品切碎混匀，称取20.00g于250mL具塞锥瓶中，加60mL丙酮，于振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤，取滤液30mL于125mL分液漏斗中，加60mL硫酸钠溶液(20g/L)和30mL二氯甲烷，振摇提取2min后，静置分层，将下层提取液放入另一个125mL分液漏斗中，再用20mL二氯甲烷于丙酮水溶液中同样提取后，合并二次提取液，在二氯甲烷提取液中加1g中性氧化铝(如为鱼肉加5.5g)，轻摇数次，加20g无水硫酸钠。振摇脱水，过滤于蒸发皿中，用20mL二氯甲烷分二次洗涤分液漏斗，倒入蒸发皿中，在55℃水浴上蒸发浓缩至1mL左右，用丙酮少量多次将残液洗入具塞刻度小试管中，定容至2~5mL，如溶液含少量水，可在蒸发皿中加少量无水硫酸钠后，再用丙酮洗入具塞刻度小试管中，定容。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）3.肉类、鱼类中有机磷农药残留量的测定方法分析步骤

色谱条件

色谱柱：内径3.2mm，长1.6m玻璃柱，内装涂以OV-17(1.5%m/m)和QF-1(2%m/m)的混合固定液的80~100目ChromosorbWAWDMCS。

流量：氮气60mL/min；氢气0.7kg/cm2；空气0.5kg/cm2。

温度：检测器250℃，进样口250℃，柱温220℃(测定敌敌畏时为190℃)。如同时测定四种农药可用程序升温。

第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.20-2003）3.肉类、鱼类中有机磷农药残留量的测定方法分析步骤

测定：将标准使用液或样品液进样1~3μＬ，以保留时间定性；测量峰高，与标准比较进行定量。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（二）气相色谱法【GB/T5009.145-2003】食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定

本标准规定了粮食、蔬菜中敌敌畏、乙酰甲胺磷、甲基内吸磷、甲拌磷、久效磷、乐果、甲基对硫磷、马拉氧磷、毒死蜱、虫螨磷、倍硫磷、马拉硫磷、对硫磷、杀扑磷、克线磷、乙硫磷、速灭威、异丙威、仲丁威、甲萘威等农药残留量的测定方法。

1.原理

样品中有机磷和氨基甲酸酯农药用有机溶剂提取，再经液液分配、微型柱净化等步骤除去干扰物质，用氮磷检测器(FTD)检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（二）气相色谱法【GB/T5009.145-2003】食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定

2.分析步骤2.1试样的制备

取粮食样品以粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样。蔬菜擦去表层泥水，取可食部分匀浆制成分析试样。2.2提取

(1)蔬菜

方法一：称取10g试样于三角瓶中，加入与样品含水量之和为10g的水和20mL丙酮。振荡30min，抽滤，取20mL滤液于分液漏斗中。

方法二：称取5g试样(视样品中农药残留量而定)，置于50mL离心管中，加入与样品含水量之和为5g的水和10mL丙酮。置于超声波清洗器中，超声提取10min。在5000r/min离心转速下离心使蔬菜沉降，用移液管吸出上清液10mL至分液漏斗中。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（二）气相色谱法【GB/T5009.145-2003】食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定

2.分析步骤2.2提取

(2)粮食

称取20g样品于三角瓶中，加入5g无水硫酸钠和100mL丙酮，振荡提取30min，过滤后取50mL滤液于分液漏斗中。2.3净化

向方法一分液漏斗中分别加入40mL凝结液和1g助滤剂celite545，或方法二的分液漏斗中分别加入20mL凝结液和1g助滤剂celite545，轻摇后放置5min，经两层滤纸的布氏漏斗抽滤，并用少量凝结液洗涤分液漏斗和布氏漏斗。将滤液转移至分液漏斗中，加入3g氯化钠，依次用50，50，30mL二氯甲烷提取，合并三次二氯甲烷提取液，经无水硫酸钠漏斗过滤至浓缩瓶中，在35℃水浴的旋转蒸发仪上浓缩至少量，用氮气吹干。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（二）气相色谱法【GB/T5009.145-2003】食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定

2.分析步骤2.2提取

2.3净化

取下浓缩瓶，加入少量正己烷。以少许棉花塞住5mL医用注射器出口，1g硅胶以正己烷湿法装柱，敲实，将浓缩瓶中液体倒入，再以少量正己烷：二氯甲烷(9+1)洗涤浓缩瓶，倒入柱中。依次以4mL正己烷：丙酮(7+3)，4mL乙酸乙酯，8mL丙酮：乙酸乙酯(1+1)，4mL丙酮:甲醇(1+1)洗柱，汇集全部滤液经旋转蒸发仪45℃水浴浓缩近干，定容至1mL。向粮食提取的分液漏斗中加入50mL5%氯化钠溶液，再以50mL，50mL，30mL二氯甲烷提取三次，合并二氯甲烷层经无水硫酸钠过滤后，在旋转蒸发仪40℃水浴上浓缩近干，定容至1mL。第四节食品中有机磷农药残留量测定二、测定方法（二）气相色谱法【GB/T5009.145-2003】食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定

2.分析步骤2.4测定(1)气相色谱参考条件

色谱柱：BP5或OV-10125m×0.32mm(内径)石英弹性毛细管柱。

气体流速：氮气50mL/min；尾吹气(氮气)30mL/min；氢气0.5kg/cm2；空气0.3kg/cm2

温度：柱温采用程序升温方式

检测器：氮磷检测器(FTD)。

(2)色谱分析

量取1μL混合标准溶液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。

2有机磷农药残留量的测定

2.1定性检验－刚果红法和纸上斑点法2.1.1刚果红法

2.1.1.1原理利用样液中的有机磷农药经溴氧化后，与刚果红作用，生成蓝色化合物，来鉴别样品是否存在有有机磷农药。2.1.1.2操作步骤

取经粉碎的样品用苯浸泡、振摇，用滤纸过滤，取滤液于蒸发皿上，加入100g／L甘油甲醇溶液1滴，沥干，加1mL水混匀。将样液滴于定性滤纸上，挥发干。将滤纸置于溴蒸气上熏5min，取出，在通气处将溴挥发尽。滴人5g／L刚果红乙醇溶液，置于滤纸的点样处，如果滤纸显示出蓝紫色则表示样品中有有机磷存在。呈粉红色者则为溴的色泽。2.1.2纸上斑点法2.1.2.1原理样液中的硫代磷酸酯类有机磷与2，6一二溴苯醌氯酰亚胺，在溴蒸气作用下，形成各种有颜色的化合物，用以鉴定是否存在有机磷及是哪一种有机磷。2.1.2.2操作步骤(1)2，6一二溴苯醌氯酰亚胺试纸称取0．05g2，6一二溴苯醌氯酰亚胺，溶于10mL95%(体积分数)乙醇中，将定性滤纸浸湿，晾干备用。(2)检验

吸取按刚果红法制备的样液滴，于2，6一二溴苯醌氯酰亚胺试纸上，稍干，置于溴蒸气上蒸熏片刻，呈现出不同颜色的斑点，根据所显示斑点的颜色鉴别属于哪种有机磷农药。试验时，为防止色素干扰，试纸要临时配制。有机磷农药呈色反应如表6-1所示。

表6一l有机磷农药的呈色反应

农药种类反应颜色反应时间3911鲜黄，周围较深5s-3min1605淡黄→紫红30s-3min1059鲜黄→暗黄30s-3min4049黄→黄棕30s-5min乐果黄→橙黄20s-5minM-74淡土黄→暗紫红30s-5min三硫磷土黄→杏红15s-5min1240鲜黄→暗黄30s-3min2.2有机磷农药残留量的定量检测2.2.1原理

气相色谱法－将样品的峰高或峰面积与标准品相比较做定量分析。本法适用于水果、蔬菜、谷类的检测。最低检出量为0.1－0.25ng,2.2.2仪器和试剂(1)仪器组织捣碎机，粉碎机，旋转蒸发器，气相色谱仪：附有火焰光度检测器(FPD)。(2)试剂

丙酮，二氯甲烷，助滤剂Celiee545，农药标准品：敌敌畏99％，速灭磷顺式60%,久效磷99%，甲拌磷98％，巴胺磷99％，二嗪农98％.

2.2.3操作步骤

(1)标准溶液的配制

分别准确称取标准品，用二氯甲烷为溶剂，分别配制成1.0mg／mL的标准储备液，储于冰箱(4℃)中。使用时用二氯甲烷分别稀释成1.0ug／mL的标准使用液。

(2)试样制备取粮食样品粉碎，过20目筛制成粮食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非可食部分后制成待测试样。(3)提取①称取50.00g水果、蔬菜试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮(总体积150mL)。用组织捣碎机捣1～2min。匀浆液经铺有两层滤纸和约10gCellte545的布氏漏斗，减压抽滤。从滤液中分取l00mL，移至500mL分液漏斗中。

②称取25.00g谷物试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮，以下同上一步骤。(4)净化向以上两种滤液中，加人10～15g氯化钠，使呈饱和状态。猛烈振摇2～3min，静置10min，使丙酮从水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再静置分层。将丙酮与二氯甲烷提取液合并，并经装有20～30g