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第十一章生物性检材的个人识别思考题1、什么是生物性检材的个人识别?2、生物性检材的主要特点是什么?3、血痕检验一般遵守的程序是什么?4、血痕检验需解决的问题有哪些?5、确证精斑有哪些方法?6、为什么毛发是重要的检材?第一节概述在法医学实践中,分析生物性检材以揭示个体身份的工作称为个人识别。这里所称生物性检材包括人体组织、器官与体液、分泌物、排泄物及由它们形成的斑迹。一、个人识别的意义刑事犯罪,“每一次接触都会留下痕迹”。遇到身份不明的尸体或活体为侦查提供线索,为审判提供证据。对于医生、司法人员和律师,必须知道生物性检材个人识别的潜力和限度,必须知道法医学实验室能为他们提供的服务以及怎样在案件调查中和法庭审判中更好地利用这些服务。二、生物性检材的特点生物性检材的主要特点在于环境条件的作用使它具有某些不确定性。生物性检材的个人识别即使对一个非常有经验的法医鉴定人,也是一个严峻的挑战。三、分析生物性检材的策略形态观察化学分析免疫学分析生物化学与分子生物学实验针对检材的特点,由简单到复杂,逐步排除,逐步缩小范围的实验分析策略减少不确定性。四、检材的发现、采集、包装和送检(一)检材的发现和采集现场勘查过程中,全面仔细搜寻检材非常重要。发现检材,第一时间原位拍照或拍摄录像资料,结合测量、绘图等手段详细记录现场原始状态。在进行详细记录后,方可移动和提取检材。应力求做到全面、充分和仔细。要注意改善照明条件,仔细观察拐角、缝隙等隐蔽部位。1、血痕对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着疑有血痕的小件物品要整件提取。附有血痕又可剪切的大件物品,如地毯、被褥、床单等,可将血痕连同其周边的部分一起剪下;衣柜、墙壁、地面等不能移动的物件上附着的血迹,可刮取或用生理盐水浸湿的纱布提取,血痕量少时,应用少量的棉纱线提取,以尽量提高棉纱线上血痕的浓度。血痕检材分别用纸袋包装,不能用塑料袋包装或放入密封容器内。2、精斑提取阴道内容物,应用棉签在阴道穹窿部提取,至少提取3支以上,并标明提取序号,分别晾干、分开包装。怀疑有性侵害的尸体,必要时还应注意会阴、下腹、口腔等部位有无精斑,并分别提取。怀疑有性侵害的现场,必须提取怀疑有精斑的所有检材,如床单、被褥、卫生纸、避孕套、内裤、衣物等。应该分别提取、分别晾干、分开包装。3、毛发毛发要用镊子夹取,每一根或一组毛发应分别用纸折叠后置纸袋内送检。4、唾液斑唾液斑检材如烟头、果核、香口胶同样要用镊子夹取,分别包装。(二)包装和送检尽速送检、低温保存、晾干保存1、按检材性质和特点,洁净包装2、注明物品名称、来源、数量、日期等3、附送对照4、委托书1、核对2、制定检验方案和步骤3、防止污染4、检验完毕提交鉴定书剩余的检材应妥善保管,或退还委托单位。五、生物性检材的检验程序和要求黄静案黄静生前所穿的内衣裤物证检材应依法进行提取、保存与送检。姜俊武所穿的内裤应进行细胞学等检查,并对该内衣裤物证检材依法进行提取、保存与送检。中华人民共和国公共安全行业标准GA/T169—1997《法医学物证检材的提取、保存与送检》本标准适用于公安、检察、法院、司法及院校系统的法医物证检验。Simpson案受害人衬衣胸前提取的毛发女受害人家床上毛毯用于覆盖尸体Simpson杀人被告可能在毛毯上坐过被告毛发附在毛毯上被告毛发转移到受害人身上受害人衬衣胸前提取的毛发可能来自污染无效一致控方辩方Simpson案现场血迹Simpson汽车内血迹采样违反规定未及时送物证库存放现场血痕含抗凝剂种族歧视现场血痕警察“栽赃”无效时机证据动机DNA一致DNA一致辩方
第二节血痕检验(BloodstainsTest)血痕检验的目的:
1.是否血痕2.是人血还是动物血3.血痕的个人识别4.与案情有关的其他问题血痕检验的程序:
1.肉眼检验2.预试验3.确证试验
4.种属鉴定5.遗传标记测定6.其他检验肉眼检验预试验阴性不是血痕或被坏阳性可能是血痕确证试验(有时可省)阴性不是血痕或量太少或被破坏
阳性肯定是血痕种属试验阴性不是人血或量太少或被破坏
阳性肯定是人血痕各种动物血鉴定个人识别非遗传标记测定出血部位出血时间出血量出血者年龄出血性别一人血或多人血遗传标记测定红细胞血型血清型红细胞酶型HLADNA多态性ABOMNPRhHpGcTfGmPGMEsDGLOIEAP
ABDRDQ
DNA指纹VNTRSTRRAPD一、肉眼检验(一)血痕的部位(二)血痕的颜色(三)血痕的形状和范围
1.滴状2.流注状3.擦拭状4.喷溅状5.血印痕6.血泊7.血水8.隐性血痕9.其他二、预试验(PreliminaryTest)预试验即筛选试验,要求:1.是血痕一定呈阳性反应,预试验阴性即可认定不是血痕或血痕已被破坏。2.所需的检材量少,灵敏度高,即使肉眼看不见,也呈阳性反应。3.操作简便快速。
血痕Hb或正铁血红素过氧化物酶活性过氧化氢水新生态氧无色化学物质有色物质氧化血痕预试验的基本原理:三、确证试验(ConclusiveTest)
血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物,确证试验阳性,表明检材中含有血红蛋白或其衍生物,可以判定为血痕。确证试验灵敏度一般不太高。常用方法:1结晶试验2显微分光镜检查:光谱检查(一)血色原结晶试验1原理:血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白,在还原剂作用下,正铁血红素还原为血红素,后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物(如吡啶烟碱)等,结合,形成血色原结晶。2试剂:高山氏试剂10%NaOH3ml混合置棕色瓶中30%葡萄糖10ml吡啶3ml试剂配置好第二日天使用较好,久置则反应缓慢,甚,至失效。3操作4结果桃红色的星状菊花状或针状结晶(二)显微分光镜检查1原理:有色物质能吸收一定波长的光,当日光通过有色物质时,再经过分光镜时,因其中某些波长的光被吸收,便会在光谱上相应波长区域内出现黑色吸收线。血红蛋白及其衍生物均系有色物质,具很强的选择性吸收光线的性质,再分光镜下检查是否有特定的吸收线,可确定是否是血痕。2方法
四、种属鉴定(SpeciesIdentification)种属鉴定
环状沉淀反应沉淀反应免疫扩散试验血清学方法对流电泳抗球蛋白消耗试验酶联免疫吸附试验细胞学方法生化方法血红蛋白等电聚焦分子生物学方法ALU序列五、血痕的血型测定(一)血痕的红细胞血型测定血痕的ABO血型测定
A.B.H血型物质是一种多糖体,对干燥和高温有较强的抵抗力,当红细胞变形或细胞膜碎裂,其上血型物质仍能保持与相应凝集素特异结合的能力。应此,
A.B.H血型物质的检测就成为血痕ABO血型鉴定的重点。
吸收试验原理:血痕中的血型物质可以从抗血清中吸收相应的凝集素,如A型物质可以吸收A凝集素,B型物质可以吸收B凝集素。将被检血痕分别与已知效价的抗血清进行反应,血痕中的血型物质与相应的凝集素特异性结合,使抗血清中该凝集素效价减低或消失。吸收后再用相应红细胞测定其效价,看其效价的变化,便可判断血痕的血型。
各种各样的生物检材分泌物获得检材中细胞经物理化学作用释放DNA经过一系列实验操作及仪器分析得到分型结果应用PCR反应的对DNA进行几何级数放大统计学计算得出结论(二)DNA多态性分析(三)性别鉴定检测X、Y染色质鉴定性别、检测性激素鉴定性别、检测H-Y抗原鉴定性别,及DNA水平的性别鉴定等。PCR扩增amelogenin基因X-Y染色体同源特异片段鉴定性别较常用。DNA分型的应用
以物找人发现证实犯罪的物证在先,获取犯罪嫌疑人再后。以人找物发现犯罪嫌疑人在先,获取证实及犯罪事实的物证再后。以物找物对发生在不同时间、不同地点的案件所获取的犯罪物证进行串并。(如精斑、血迹、毛发等检材的串并)以人找人尸源的寻找与认定。(如无名尸、碎尸、空难、焚尸等的认定)
六、其他检验有时需进行出血量、出血时间、及出血部位推测等。第三节精斑检验
SEMINALSTAINTEST需解决问题:1、可疑斑痕是否为精斑。2、是人精斑还是动物精斑。3、是何人的精斑。精子在女性生殖道的检测时限性交后阴道内3-8H,宫颈2-5天,子宫、输卵管1-10天可检活精子。阴道内3-9天,宫颈17天可检见死精子。精子检出时限与被害人的体位、活动情况有关。精子检出率的高低与阴道内容物的提取部位有关,宫颈刮片和阴道后穹隆擦拭物的精子检出率较高。四、精斑检验一)肉眼检查
二)预实验三)确证实验四)血型测定
一)肉眼检查
颜色形态数量分布陈旧度二)精斑预试验1.紫外线检查原理:紫外线黄素银白色荧光
400-500nm方法及结果特点:简单、快速,不破坏检材;确定精斑的分布,范围。特异性差。2.Acp实验原理
Acp
磷酸苯二钠萘酚
+
氨基安替比林结果铁氰化钾红色醌类三、精斑的确证实验一)形态学检查精子的检出二)免疫学检验抗人精沉淀实验抗P30沉淀实验其他三)生化检验LDH—X
四、种属鉴定抗人精血清沉淀反应抗P30血清沉淀实验五、个人识别
ABO血型酶型等
DNADNA分型混合斑(精子、阴道上皮细胞)
SDS、蛋白酶K完整精子DNA(阴道上皮细胞)
DTT二次消化SDS、蛋白酶DNA(精子)案例案情摘要××××年×月×日傍晚,××县××村学生××(女,15岁)在放学回家路上被犯罪分子拦路强奸。现提取受害者当时所穿内裤1条,以及受害人血液、唾液和犯罪嫌疑人血液要求检验:①内裤上是否有精斑?②精斑血型与犯罪嫌疑人血型是否一致?检验结果1.一般检查:受害人所穿内裤为淡黄色三角内裤,在其上发现大小分别为4×3、3×2.5两块可疑斑痕。2.精斑检查:1紫外线检查,可疑斑痕呈阳性反应。2酸性磷酸酶试验:可疑斑痕呈阳性反应,对照准确。3藻红染色找精子:取可疑斑痕,经藻红染色,显微镜下找精子,其内裤检标兵上找出完整精子细胞。4抗人精液沉淀反应:抗人精液血清效价1:10,000。可疑斑痕制备浸液做抗人精液沉淀反应,结果阳性。已知对照准确,基质对照准确。3.精斑及受害人、嫌疑人分泌型测定:中和试验,受害者所穿内裤含精斑部位检出B、H血型物质;受害人唾液检出A、H血型物质,嫌疑人唾液检出B、H血型物质。4.精斑及受害人、嫌疑人血液DNA遗传标记检测。第四节其他生物性斑迹分析唾液(含有核细胞)尿液排泄物指甲屑烟蒂邮票信封封口头皮屑指印…第五节毛发检验毛发也是重要的检材1、毛发易脱落,留在作案现场及有关物体上。2、毛发的主要成分是角蛋白,理化性质较稳定,不易腐败变质。3、交通事故中,肇事车辆上常常留有死者或伤者的毛发。4、毛发可进行个人识别。需解决问题:1、区分检材是毛发还
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