中华乌塘不同生育期血清雌二醇、孕酮和睾酮的含量

中华乌塘不同生育期血清雌二醇、孕酮和睾酮的含量

鱼类类固醇激素的合成和分泌受外部环境因素（温度、光、水等）和神经分泌组织（脑垂体和骨盆）的双重调整，其含量与腺体发育密切相关，并呈现季节变化。中华乌塘鳢(Bostrichthyssinensis)栖息于海洋潮间带滩涂,营穴居生活,生殖季节性成熟雌雄鱼择偶配对进入洞穴内交配产卵,是我国东南沿海主要的海水养殖鱼类之一.国内学者对中华乌塘鳢的研究主要集中在人工繁殖和种苗培育、早期发育、成鱼养殖技术、染色体核型、精子的低温冷冻保存以及性信息素诱导产卵等方面.作者研究了中华乌塘鳢血清雌二醇(E2)、睾酮(T)和孕酮(P)含量与性腺发育的关系及其季节变化,以了解中华乌塘鳢生殖内分泌机理,充实其繁殖生物学资料并为其人工繁殖提供科学依据.1血清活性物质的测定方法中华乌塘鳢采自福建省九龙江口潮间带滩涂,体长12.6~25.0cm,体质量44.7~239.3g.参照大弹涂鱼性腺发育分期法,并辅以组织学方法,选取性腺发育为Ⅱ期(性未成熟期或产后恢复期)、Ⅲ期(开始性成熟期)、Ⅳ期(接近性成熟期)和Ⅴ期(性成熟期)的雌、雄鱼各6尾,用于研究血清性类固醇激素含量与性腺发育期的关系.分别于2003年1、3、6和10月随机取雌、雄鱼各10尾,用于测定血清性类固醇激素含量的季节变化.抽取心脏血液,离心5min(10000r/min),收集血清样品,保存于―82℃低温冰箱中待测.雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)3种试剂盒均购自天津德普(DPC)生物技术和医学产品有限公司.E2标准品浓度分别为0、20、50、150、500、1800和3600pg/mL;P标准品浓度分别为0、0.1、0.5、2.0、10.0、20.0和40.0ng/mL;T标准品浓度分别为0、0.2、1、4、8和16ng/mL.E2、P和T均以[125I]标记.试剂盒中所有组分在使用前均处于室温(25~27℃)下.应用放射免疫(RIA)方法测定血清中E2、P和T的含量.检测仪器为GC-1200γ放射免疫计数器(中国科技大学科技实业总公司产品).实验操作按照试剂盒中的说明进行.实验所得数据表示为平均值±标准差.经单因素方差分析,检验样品之间的差异显著性,当p<0.05时为差异性显著;当p<0.01时为差异性极显著.采用的分析软件为SPSS.2结果2.1性类固醇激素含量与腺体发育之间的关系2.1.1血清性下卵巢发育情况分别测定了中华乌塘鳢雌鱼Ⅱ期卵巢[GSI,(0.78±0.17)%]、Ⅲ期卵巢[GSI,(1.60±0.51)%]、Ⅳ期卵巢[GSI,(7.02±1.13)%]和Ⅴ期卵巢[GSI,(12.80±1.54)%]个体血清的雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)3种性类固醇激素含量.血清性类固醇激素含量变化与卵巢发育的关系见图1.在雌鱼性腺发育过程中,Ⅱ期卵巢个体血清的E2含量最低[(125.41±14.48)pg/mL];Ⅲ期卵巢个体的E2含量略有上升[(164.25±13.76)pg/mL];Ⅳ期卵巢个体的E2含量极显著(p<0.01)上升至(1836.33±495.52)pg/mL,达到最高峰;Ⅴ期卵巢个体的E2含量极显著(p<0.01)下降至(467.33±66.07)pg/mL.雌鱼血清P的含量随卵巢发育而上升,Ⅴ期卵巢P含量达到最大值[(790.00±241.38)pg/mL].雌鱼血清T含量的变化趋势与P的相似,随着卵巢发育而增加,Ⅳ期卵巢T的含量为(1029.93±174.91)pg/mL,Ⅴ期卵巢T的含量显著(p<0.05)上升至最高值[(2177.68±877.59)pg/mL)].2.1.2血清性藻类激素含量变化与精巢发育的关系分别测定了中华乌塘鳢雄鱼Ⅱ期精巢[GSI,(0.024±0.0089)%]、Ⅲ期精巢[(0.036±0.0089)%]、Ⅳ期精巢[(0.132±0.0164)%]和Ⅴ期精巢[(0.202±0.0396)%]个体血清雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)3种性类固醇激素含量.血清性类固醇激素含量变化与精巢发育的关系见图2.在雄鱼精巢发育过程中,血清E2的含量都比较低,Ⅱ期和Ⅲ期精巢E2含量分别为(15.11±1.48)pg/mL和(16.99±1.61)pg/mL;Ⅳ期精巢E2的含量极显著上升(p<0.01)至(38.90±12.16)pg/mL;Ⅴ期精巢E2的含量略下降至(31.60±9.53)pg/mL.雄鱼血清P的含量随精巢发育而上升.Ⅱ期精巢个体P的含量为(242.00±152.14)pg/mL;V期精巢个体P的含量达到最高值[(514.25±152.14)pg/mL].雄鱼血清T含量都比较高,而且随着精巢的发育而上升,Ⅴ期精巢个体T的含量达到最高值[(1697.43±445.41)pg/mL].2.2季节性变化对类固醇激素含量的影响2.2.1血清民法中的民法中性别含量的动物群落特点中华乌塘鳢雌鱼血清E2含量1月和3月分别为(142.1±15.4)pg/mL和(157.1±13.9)pg/mL,6月的含量最高[(1703.0±689.8)pg/mL],10月的含量次之[(464.0±129.3)pg/mL].中华乌塘鳢雄鱼血清E2含量的变化趋势与雌鱼相似,1月和3月分别为(15.1±1.5)pg/mL和(16.4±1.8)pg/mL,6月的含量最高[(42.6±18.4)pg/mL],10月的含量次之[(32.3±11.6)pg/mL].在相应的性腺发育期,中华乌塘鳢雌鱼血清E2的含量均极显著高于(p<0.01)雄鱼(图3).2.2.2大、小鼠、pg/ml,pg/mlp含量的比较中华乌塘鳢雌鱼和雄鱼血清P的含量1月和3月没有显著差异(p>0.05),变化范围在(146.7±11.5)~(180.0±28.3)pg/mL之间,6月两者P的含量分别达到最高值,雌鱼为(780.0±294.6)pg/mL,雄鱼为(533.3±180.4)pg/mL.雌鱼和雄鱼10月P的含量分别极显著(p<0.01)下降至(295.0±44.4)pg/mL和(256.7±50.3)pg/mL(图4).2.2.3成虫前、后克氏原螯虾t、t的含量中华乌塘鳢雌鱼和雄鱼血清T的含量变化趋势相似,1月的含量最低,3月含量上升,6月含量显著上升(p<0.05)至最高值,雌鱼和雄鱼T的含量分别达到(2177.7±877.6)pg/mL和(1600.5±491.1)pg/mL.雌鱼和雄鱼10月T的含量分别显著(p<0.05)下降至(1069.7±190.8)pg/mL和(1056.9±456.6)pg/mL.1月和3月雄鱼T的含量高于雌鱼,6月雌鱼T的含量高于雄鱼,10月雌鱼和雄鱼T的含量相似(图5).3做到峰期迟的原因在雌性中华乌塘鳢性腺发育过程中,血清E2含量的变化趋势与P和T不同,前者的最高值出现在第Ⅳ期卵巢,而后两者的最高值则出现在第Ⅴ期卵巢,提示在中华乌塘鳢不同卵巢发育期,不同种类的性类固醇激素具有不同的生理功能.E2诱导肝脏合成卵黄蛋白原,促进卵母细胞卵黄的积累;而P与卵母细胞成熟有关,它首先被转化为17α-羟孕酮(17α-P),后者再被转化为17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-P),17α,20β-P是卵母细胞最后成熟的诱导激素(MIH),能够促使卵母细胞成熟和排卵.因此,雌鱼血清E2高峰期比P高峰期早出现.性类固醇激素代谢过程中,T在芳构化酶的作用下转化为E2.中华乌塘雌鱼血清T高峰期比E2高峰期迟出现的原因可能是卵母细胞发育到卵黄积累末期,芳构化酶的活性减弱,使得T含量升高.据报道,雌性双棘黄姑鱼(Nibeadiacanthus)血清T的峰值出现在血清E2的峰值之后1个月.中华乌塘鳢雌鱼血清E2含量随性腺发育的变化与其他一些鱼类相似,如双棘黄姑鱼雌鱼血清E2的峰值出现在成熟产卵前一个月,卵母细胞最后成熟时下降.雄性中华乌塘鳢性腺发育过程中,其血清E2的含量极显著低于(p<0.01)雌鱼相应性腺发育期血清E2的含量(低8.3~47.2倍),提示E2与精巢发育的关系不密切,因为正常雄鱼不存在卵黄积累过程.生殖季节,雌性赤点石斑鱼(Epinephelusakaara)血清E2的含量高于雄性.中华乌塘鳢雄鱼血清P和T含量的变化趋势与雌鱼的相似,在精巢成熟时达到最高值.三刺鱼(Gasterosteusaculeatus)雄鱼在精子形成后和排精时,血清T和11-酮基睾酮(11-KT)的含量均达到高峰.双棘黄姑鱼雄鱼血清T的含量峰值出现在性腺发育成熟期.T和11-KT具有促进精子形成和排精的作用,维持血清较高水平的T和11-KT,对精子的最后成熟是必需的.据报道,中华乌塘鳢的繁殖期为5~10月,而5~6月和9~10月是其两个繁殖高峰期.本实验所检测的3种性类固醇激素含量的季节变化支持了这一观点.中华乌塘鳢雌鱼和雄鱼血清E2、P和T的含量高低均依次为6月>10月>3月>1月,因此可以认为5~6月是中华乌塘鳢繁殖的主高峰期,9~10月是繁殖的次高峰期,在5~6月开展中华乌塘鳢人工繁殖和育苗,可以获得最好的效果.1月由于水温低,中华乌塘鳢的摄食量少,性腺处于休止期,因此性类固醇激素含量最低;