药用植物蜘蛛香不同极性段的药效研究

药用植物蜘蛛香不同极性段的药效研究

蜘蛛香是科草科的一种蝴蝶香。首载于《本草纲目》,《滇南本草》中亦有记载,是云南地区常用的药物之一。性味辛、苦,温。具有消食散结,行气止痛,镇静安神,消炎止泻等功效。用于治疗胃肠道疾病有较好的疗效,如消化不良,呕吐腹泻,小儿疳积,腹胀,食少,胃气痛等。蜘蛛香的主要成分为挥发油,环烯醚萜类,黄酮类等。但是,现代对其药效学的研究主要在镇静方面,而其他作用罕见报道。故将蜘蛛香不同极性段的提取物做镇痛、镇静及对胃肠运动影响的实验研究,并与水煎液做比较,从而得知其活性部位在哪个极性段,为以后更好的开发、利用蜘蛛香提供实验依据。1实验材料1.1动物ICR小鼠,体重18~22g,雌雄兼用,由昆明医学院实验动物中心提供,实验动物生产许可证。SCXX(滇20060008)。1.2tamansiratche干燥培养胶囊蜘蛛香为败酱科缬草属植物蜘蛛香ValerianajatamansiJones的干燥根茎,购自省药材公司;元胡止痛胶囊(惠州九惠制药厂,产品批号20050602);香砂平胃颗粒(云南省腾冲制药厂,产品批号:060143)。1.3数字肌肉张力检测RB—200智能热板仪;SW-200光热尾痛测试仪;ZZ-6小鼠自主活动仪;HW-2000微循环数字恒温仪;HW400-S恒温平滑肌槽;JH-2型肌张力传感器;电子天平。所用试剂氯化钙、氯化钾、氯化钠、磷酸二氢钠、葡萄糖、碳酸氢钠、硫酸镁均为市售分析纯试剂。1.4确定中央细胞剂用量药液的配制:蜘蛛香药材先浸泡30min,再煎煮3次,每次30min,过滤合并3次药液,浓缩至2g/mL浓度。将此水煎浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇按极性递增法萃取,分别得到石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层和水层4个极性部分。回收溶剂,并挥尽溶剂后调正体积,灌封并冰箱保存供药理筛选用。临用时用37℃水浴加热摇匀。分组给药剂量:蜘蛛香水煎液组、水层组、正丁醇组、乙酸乙酯组均分为高、低剂量组。高剂量组均给予折合原生药25g/kg的剂量,低剂量组均给予折合原生药12.5g/kg的剂量。阳性药对照组,根据不同的实验指标分别为元胡止痛胶囊组(0.39g/kg)、香砂平胃颗粒组(14.29g/kg),空白对照组给等体积生理盐水。以上均灌胃给药,每日一次,每次0.02mL/g。2方法和结果实验结果的统计学处理:实验数据符合正态分布,方差齐者:用t检验;方差不齐者:用t′检验。实验数据如有偏态,则用参比差值法。2.1影响大鼠疼痛阈值的影响2.1.1前痛阈值检测按文献方法,取雌性小鼠,测定小鼠的痛阈(即痛反应潜伏期,指小鼠接触热板至舔后足的时间)。痛反应潜伏期在5~30sec内为合格鼠,取两次正常痛阈平均值,作为该鼠给药前痛阈值。将合格小鼠随机分为10组,每组10只。实验时以60sec为限,以免烫伤小鼠。连续灌胃6d,于末次给药后30min,60min,90min,120min,180min分别测量小鼠痛阈,结果见表1。结果表明:水煎液高剂量组对小鼠热刺激致痛有显著抑制作用,低剂量亦有显著抑制作用,但两组起效均比阳性对照组慢,其余几组作用均不显著。2.1.2给药后小鼠的痛阈变化选用18~22g小鼠,雌雄各半,每组12只,共10组,将动物置鼠筒中,尾自然下垂于筒外,以启动光热至鼠尾急速摆动的时间为甩尾潜伏期测痛阈,调整刺激强度使基础痛阈(给药前痛阈值)为3sec左右,给药后若药物使痛阈提高,则照射时间以6sec为限。小鼠连续灌胃7d,于末次给药后30min测其痛阈,用配对t值法检查差异显著性。结果见表2。结果表明:蜘蛛香水煎液高、低剂量组,水层高、低剂量组及正丁醇高剂量组对小鼠疼痛均有非常显著的抑制作用,正丁醇低剂量组及乙酸乙酯组高剂量组亦有显著的抑制作用,其余组作用不显著。2.2小鼠活动次数测定选用18~22g小鼠,雌雄不拘,随机分组,每组12只。给药前把小鼠放进活动箱中记录10min内的活动次数,灌胃给药8d后于末次给药30min后按同法测定小鼠活动次数,结果见表3。结果表明:水煎液高、低剂量组及水层高剂量组对小鼠自主活动均有非常显著的抑制作用,水层低剂量组、正丁醇高、低剂量组及乙酸乙酯高剂量组对小鼠站立活动有显著抑制作用,其余几组作用不显著。2.3炭末推进试验取小鼠120只,分成10组,连续灌胃9d,每天1次,每次0.02mL/g。末次给药加5%的炭末,于给药后10min把小鼠脱颈椎处死,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端至幽门、下端至回盲部的肠管,轻轻将小肠摆成直线,测量其全长及炭末推进的长度,用公式计算炭末推进百分率:炭末推进率(%)=炭末在肠内推进距离(cm)/小肠全长(cm)×100%结果见表4。结果表明:水煎液高剂量组有非常显著的增加炭末推进率的作用,水层高剂量组亦能显著增加炭末推进率,水煎液低剂量组仅有轻微作用,无统计意义,其余几组作用皆不显著。2.4阿托品对克氏原螯虾肠肌运动的影响家兔处死后立即解剖,将肠管放入常温的台氏液中清洗,排尽肠内容物。每次取长约1.5~2cm的肠管,一端固定在麦氏浴管上,恒温37℃,通空气,每min40~60个气泡,另一端连接在张力换能器上,负荷张力约1~2g。通过电生理数据采集处理系统记录肠管的收缩活动。待肠管收缩活动稳定后,描记一段正常收缩曲线。然后向浴槽内加入受试药液,观察药物的作用,描记曲线,测记曲线高度。各药物剂量均按前述高剂量加药。给药顺序为:给药—冲洗恢复—乙酰胆碱(1μmol/L)—给药。阿托品以同样方法给药。每组药用5只兔子共10个肠肌标本进行实验,结果见表5。结果表明:与空白组比较,蜘蛛香水煎液组及水层组对离体肠肌运动均有非常显著的增强作用。水煎液组、水层组、正丁醇组、乙酸乙酯组均有显著的对抗乙酰胆碱的作用;水煎液组、水层组、正丁醇组均能使阿托品引起的肠肌松弛有所缓解,提示蜘蛛香对肠肌运动可能有双向调节作用。其是兴奋或是抑制起决于肠肌的状态。3具体作用部位的探索从以上实验结果表明:蜘蛛香水提液组具有非常显著的镇痛、镇静、增加小肠炭末推进率作用,对家免离体肠肌亦有非常显著的兴奋作用。蜘蛛香萃取液母液对上述指标也有显著的作用,而正丁醇组作用较弱,乙酸乙酯组和石油醚组的作用不明显,或基本无作用。蜘蛛香是一味经中医临床长期应用证实疗效较好的中药之一,但长期以来对其具体作用部位的研究却甚少,因此,本次实验是