药学研究申报资料

目录1品种概述12变更事项及变更因素12.1变更事项12.2变更内容及变更理由12.3变更的合理性评价和风险分析23变更前后辅料有关状况及其质量原则24制剂处方研究34.1湿法制粒处方研究34.1.1采用清膏湿法制粒34.1.2采用喷雾粉湿法制粒44.2流化床一步制粒成型研究104.2.1喷雾速率考察104.2.2雾化压力考察114.2.3小试样品的制备115生产工艺研究与验证125.1湿法制粒工艺研究125.2流化床一步制粒工艺研究与验证135.2.1变更后XXXX工艺流程图135.2.2中试工艺验证样品生产工艺145.2.33批中试工艺验证生产信息155.2.4重要的生产设备165.2.5各工序质量控制点165.2.6中间产品的控制175.2.7三批中实验证成果和评价175.3变更前后的制备办法比较186包装材料187XXXX质量研究197.1性状197.2鉴别197.2.1仪器与试药197.2.2丹参薄层鉴别207.2.3川芎薄层鉴别247.2.4葛根素薄层鉴别287.3检查327.3.1水分327.3.2溶化性337.3.3粒度337.3.4微生物程度检查337.4含量测定357.4.1仪器与试药357.4.2丹参含量测定办法学验证357.4.3葛根含量测定办法学验证447.4.4XXXX(未添加蔗糖)含量测定538变更后持续3批样品的检查报告书548.1样品信息548.2检查成果549稳定性研究559.1实验仪器559.2对照品和对照药材559.3实验样品569.4研究内容569.5研究结论579.6稳定性数据589.6.1加速实验589.6.2长久实验621、品种概述1.1药品名称药品名称：XXXX1.2规格：每袋装10g1.3同意文号：国药准字Z62041.4同意时间：7月101.5执行原则国家药品原则1.6使用期：36个月1.7历次补充申请及近来一次再注册的状况：补充申请：9月5日：公司名称由“XXXX特种药材饮片生产有限公司”变更为“XXXX药业有限公司”，生产地址不变。再注册状况：7月24日，获得甘肃省食品药品监督管理局“药品再注册批件（批件号：）”，药品同意文号使用期：7月23日。2、变更事项及变更因素2.1变更事项本次XXXX补充申请为“变更药品处方中已有药用规定的辅料”，即辅料由“蔗糖”变更为“糊精、甜菊素”。涉及到的关联变更涉及：增加药品规格，即在原规格“每袋装10g”基础上，增加“每袋装6g（未添加蔗糖）”。2.2变更内容及变更理由本品变更前后的重要变化涉及：批量、辅料种类及用量。生产设备、制备办法、工艺参数等均未变化。XXXX变更前、后重要变化及因素变更内容变更前变更后因素批量8万袋1万袋变更研究阶段的批量较小，生产所使用的设备能满足该批量规定。辅料种类及用量蔗糖（适量）制得1000g糊精（适量）、甜菊素（2.4g），制得600g根据临床需求，由“有糖颗粒”变更为“无糖颗粒”，通过处方研究，拟定了变更后的辅粒用量和种类。规格每袋装10g每袋装6g变更前后辅料用量不同，规格发生了变更，但每袋所含生药量没有变化。2.3变更的合理性评价和风险分析XXXX（添加蔗糖）的辅料为蔗糖，因药品的异味和苦味，其中蔗糖用量大，易吸潮，不适宜用于老年人、糖尿病人等禁糖患者，临床应用局限。为克服中药颗粒剂因含糖而致的多种弊病，可对制剂进行改善，替代辅料蔗糖，研发为中药无糖颗粒剂。其一，解除了糖尿病患者、肥胖的群体或潜在的代谢综合征患者等人群的用药限制，制剂得以更广泛的应用于各领域，并更加好的服务与患者；其二，解决了颗粒中蔗糖易吸潮、软化的问题，无糖颗粒剂使药品更利于保存。传统含糖颗粒改制为无糖剂型后的优良特点，使无糖颗粒剂受到市场及临床的青睐。本品变更的辅料为惯用辅料（糊精、甜菊素），含有法定原则，符合辅料管理规定，且辅料变更幅度符合各辅料允许使用范畴。这类变更不会引发药用物质基础的变化，对药品的吸取、运用不会产生明显影响，不会引发安全性、有效性的明显变化。根据《已上市中药变更研究技术指导原则（一）》，本次变更属Ⅰ类变更。经检索国家药品监督管理局网站国产药品数据库，XXXX有“不含蔗糖”的同意文号，如：北京亚东生物制药（安国）有限公司，规格：8g；河南兴源制药有限公司，规格：5g；哈尔滨大洋制药股份有限公司，规格：6g。通过对变更前后产品的质量和稳定性研究比较，变更后的产品与变更前产品质量无明显差别。总而言之，本次辅料的变更是合理可行，对本品的产品有效性、安全性不会产生影响。3.变更前后辅料有关状况及其质量原则原辅料来源、同意文号及执行原则辅料生产商同意文号执行原则产品登记号变更前蔗糖湖南九典宏阳制药股份有限公司湘食药辅准字F0025ChP四部/变更后糊精辽宁东源药业有限公司/ChP四部F甜菊素曲阜圣仁制药有限公司/ChP四部F糊精、甜菊素辅料资质文献见附件。4、制剂处方研究根据国家食品药品监督管理局《药品注册管理措施》及《已上市中药变更研究的技术指导原则（一）》中有关规定，在原XXXX的煎煮、浓缩、干燥等工艺不变的基础上，通过一系列优选实验，筛选辅料的种类和用量，拟定XXXX（未添加蔗糖）的制剂处方。在制剂处方研究过程中，采用颗粒剂惯用的湿法制粒和流化床一步制粒2种方式进行研究。4.1湿法制粒处方研究选择颗粒剂惯用辅料糊精和可溶性淀粉，设计不同的成型处方进行辅料筛选。4.1.1采用清膏湿法制粒取处方量的药材，加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.08，趁热滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30（80℃）和1.35（80℃）的清膏。分别取不同相对密度（1.30、1.35）的XXXX清膏适量，加入不同比例的糊精，混匀，并加入适量乙醇，14目筛制粒，成果以下：糊精用量筛选实验成果清膏相对密度清膏：糊精清膏用量（g）糊精用量（g）乙醇用量（ml）制粒成果1.301:1.050.5550.621软材较黏，不能制粒1:1.250.7861.042软材较黏，制粒困难1:1.451.1071.582软材较黏，制粒困难1:1.650.3380.553软材黏，颗粒形状普通1:1.854.0997.373软材握之成团，触之即散，颗粒形状较好1.351:1.240.6048.712软材较粘，制粒困难1:1.641.0965.882软材软材握之成团，触之即散，颗粒形状较好1:1.840.0572.112软材较松散，颗粒细粉较多结论：根据初步实验探索，清膏相对密度在1.30时，清膏：糊精（1:1.8）较适宜，制成的颗粒形状较好，经折算XXXX的规格相称于每袋8g；清膏相对密度在1.35时，清膏：糊精（1:1.6）较适宜，制成的颗粒形状较好，经折算XXXX的规格相称于每袋7g，均未达成拟定的规格规定（不大于6g/袋）。4.1.2采用喷雾粉湿法制粒①制剂规格的拟定按5g/袋规格设计的初步研究称取XXXX喷雾粉（批号0103，喷雾干燥制得，干膏率15.6%）23.4g，分别与26.6g糊精或可溶性淀粉混匀，以不同浓度的乙醇为润湿剂制粒，观察制粒的难易程度，成果以下：辅料筛选实验成果（规格：5g/袋）序号喷雾粉（g）糊精（g）可溶性淀粉（g）乙醇浓度（%）制粒状况123.4526.68/55软材较黏，制粒困难223.44/26.61软材较黏，制粒困难323.5126.71/60软材较黏，制粒困难423.48/26.66软材较黏，制粒困难523.4026.66/65软材较黏，制粒困难623.49/26.65软材较黏，制粒困难723.5226.61/70软材较黏，制粒困难823.55/26.60软材较黏，制粒困难923.4126.65/75软材结小团块，制粒困难1023.42/26.67软材结小团块，制粒困难结论：按5g/袋设计成型处方，以糊精或可溶性淀粉为辅料，用不同浓度的乙醇为润湿剂制软材，均结团发黏，难以制粒，故本品不适合制备5g/袋的规格。按6g/袋规格设计的初步研究按6g/袋规格设计成型处方实验，称取XXXX喷雾粉（批号0103，干膏率15.6%）23.4g，与36.6g糊精或可溶性淀粉制粒，观察制粒的难易程度，成果以下：辅料筛选实验成果（规格：6g/袋）序号喷雾粉（g）糊精（g）可溶性淀粉（g）乙醇浓度（%）制粒状况123.4736.62/50软材黏，制粒困难223.50/36.65软材黏，制粒困难323.4236.63/55软材较黏，制粒困难423.46/36.69软材较黏，制粒困难523.5136.60/60软材握之成团，触之即散，颗粒形状较好623.41/36.68软材握之成团，触之即散，颗粒形状较好723.4036.61/65软材较松散，颗粒细粉较多823.42/36.66软材较松散，颗粒细粉较多923.5536.62/70软材松散，颗粒细粉多1023.43/36.61软材松散，颗粒细粉多结论：以糊精或可溶性淀粉为辅料，使用60%的乙醇适量制粒，颗粒形状较好，XXXX（未添加蔗糖）能够制成6g/袋的规格。②不同处方配比（糊精和可溶性淀粉）辅料筛选根据上述6g/袋规格的处方预实验状况，考察喷雾粉和不同比例的糊精和可溶性淀粉混匀，以60%的乙醇为润湿剂制粒，以制粒状况、溶化性、成型性、流动性、吸湿性为指标进行综合评价。制粒状况：以“揉之成团，触之即散”为软材的原则，以大小均匀为湿颗粒的指标。溶化性：按ChP四部通则0104“颗粒剂”项下溶化性检查办法：取供试品10g，加热水200ml，搅拌5分钟，立刻观察，应全部溶化或轻微浑浊，均不得有焦屑等异物。成型性：用颗粒的成型率来测定，按ChP四部通则0982“粒度和粒度分布测定法”（第二法双筛分法）测定，收集能通过1号筛而不能通过5号筛的颗粒称重，按下式计算成型率，颗粒成型率=（过筛后颗粒重量/过筛前颗粒重量）×100%。流动性：颗粒流动性以休止角测定来衡量，休止角的测定采用固定漏斗法，即将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上适宜高度处，使漏斗下口距坐标纸的距离为H（1cm），小心地将样品沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中，直到最下面漏斗药粉的圆锥体尖端接触到漏斗口为止，此时由坐标纸测出圆锥体底部的直径R，计算出休止角（tanα=2H/R）。每个处方选用一种，测定三次，求其平均值。休止角应控制在40o下列可满足颗粒装量差别的规定。吸湿性实验：将称量瓶烘至恒重，冷却后精确称重，分别加入1.0g左右不同处方的颗粒，平铺于瓶底，精密称重后，放入有KNO3过饱和溶液的干燥器内(RH=92.5%)，将称量瓶打开，定时称重，按下式计算吸湿百分率，吸湿率=（吸湿后颗粒重量-吸湿前颗粒重量）/吸湿前颗粒重量×100%。按表7设计的不同制剂处方配比，以60%的乙醇适量制粒，干燥，整粒，每个处方进行3次实验，成果见表8、9、10。不同制剂处方配比处方号ABCDEF喷雾粉g23.423.423.423.423.423.4糊精g33.029.325.622.018.336.6可溶性淀粉g3.77.3211.014.618.3/不同处方配比的筛选实验成果（制粒状况、溶化性、成型率）处方号制粒状况溶化性成型率（%）平均成型率（%）A1软材适宜，颗粒形状好符合规定92.892.72软材适宜，颗粒形状好符合规定93.13软材适宜，颗粒形状好符合规定92.2B1软材适宜，颗粒形状好符合规定93.592.62软材适宜，颗粒形状好符合规定91.93软材适宜，颗粒形状好符合规定92.6C1软材适宜，颗粒形状好符合规定94.193.42软材适宜，颗粒形状好符合规定93.43软材适宜，颗粒形状好符合规定92.8D1软材适宜，颗粒形状好符合规定92.693.42软材适宜，颗粒形状好符合规定93.33软材适宜，颗粒形状好符合规定94.3E1软材适宜，颗粒形状好符合规定92.692.52软材适宜，颗粒形状好符合规定93.23软材适宜，颗粒形状好符合规定91.7F1软材适宜，颗粒形状好符合规定94.693.72软材适宜，颗粒形状好符合规定92.13软材适宜，颗粒形状好符合规定94.4不同处方配比的筛选实验成果（流动性）处方号直径R（cm）休止角（°）平均休止角（°）A13.033.733.423.232.032.934.6B13.132.832.323.132.833.331.2C12.934.634.022.934.633.132.8D13.132.832.323.331.233.132.8E13.232.032.123.430.533.033.7F12.934.632.923.331.233.132.8各制剂处方颗粒在RH=92.5%的环境中的吸湿百分率(%)处方号2h4h6h24h48hA1.622.643.6312.5817.47B1.582.843.9312.6217.53C1.682.813.9112.7117.91D1.872.753.8312.5817.74E1.822.853.9212.2017.92F1.842.813.8912.6417.27结论：不同处方配比辅料筛选成果表明，不同比例的糊精与可溶性淀粉混匀进行制粒，对XXXX（无糖型）的制备无明显影响，即：各实验组制备的软材适宜，颗粒形状较好；颗粒成型率良好；溶化性符合规定；颗粒流动性好（休止角不大于40°）；吸湿性差别不大。在确保制剂质量的前提下，应尽量减少辅料种类及用量，以减少成本，减少服用量。糊精价格较低，且颗粒成型性好，成品颗粒水溶性好，因此，拟定本品选用糊精为制剂成型辅料。③矫味剂的筛选XXXX喷雾粉苦口难咽，为提高病人服药的顺应性，需在成型处方中加入一定量的矫味剂。甜菊素甜度是蔗糖的200～300倍，价格是蔗糖的30倍，是惯用的无糖颗粒矫味剂，己载入ChP，其安全性高、热量低、应用广泛，故选用甜菊素作为本品的矫味剂。矫味剂用量筛选实验：按优选的处方，称取喷雾粉54g，糊精约66g，分别按成型处方量的0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%加入甜菊素，混匀，用60%乙醇适量为润湿剂，14目筛制粒，干燥，整粒。取制得的颗粒6g，溶于100ml热水中，以口感为评价指标，筛选适宜的矫味剂用量。甜菊糖用量考察甜菊素用量0.1%0.2%0.3%0.4%0.5%0.6%口感状况苦微苦欠佳适宜，口感佳偏甜很甜结论：当甜菊素的用量占成型处方量的0.4％时，甜度适宜，口感佳，因此选择加入0.4％的甜菊素进行矫味。④临界相对湿度的测定(CRH)临界相对湿度测定：在已恒重的称量瓶底部放入厚约2mm的成品颗粒，105℃烘至恒重，精确称量后，分别置于盛有不同浓度硫酸或不同盐的过饱和溶液的干燥器内（称量瓶盖打开），于25℃恒温培养箱（HSW-250型）中保持96h后称量，计算吸湿率，以吸湿率（％）为纵坐标，相对湿度（％）为横坐标作图，曲线两端的切线交点对应的横坐标即为临界相对湿度。25℃条件下不同相对湿度的颗粒吸湿率溶液RH（%）吸湿百分率（%）平均吸湿百分率（%）54%硫酸溶液29.553.963.973.9948%硫酸溶液40.525.975.895.8144%硫酸溶液48.528.398.428.4439.5%硫酸溶液57.7012.4412.4412.43氯化钠过饱和溶液75.2823.9823.6023.23氯化钾过饱和溶液84.2632.1332.5232.91硝酸钾过饱和溶液92.4840.8740.8540.83图1.XXXX（未添加蔗糖）相对临界湿度图结论：由“XXXX相对临界湿度图”可见，XXXX的临界相对温度为61.0％，故在生产时，分装车间的相对湿度应控制在61.0％下列。4.2流化床一步制粒成型研究一步制粒机是一种将喷雾干燥技术和流化床技术结合为一体的新型制粒工艺设备。其原理是热空气从底部分布板进入流化床制粒室，将制粒室中的粉末鼓动悬浮成流化态，并发生混匀，粘合剂在压缩空气的作用下雾化成细小液滴，喷洒在流化床制粒室中呈流化状态的粉末上使之胶结成团进行制粒。与传统的颗粒制备工艺湿法制粒相比较，一步制粒技术集传统的制粒、干燥、混匀功效于一体，其优势在于该技术使得物料受热均匀，有效物质分散均匀，产品的产出率高。按“喷雾粉湿法制粒工艺（规格：6g/袋）”拟定的的辅料和用量，采用流化床一步制粒对XXXX成型制粒技术进行研究，以期获得工艺参数稳定、质量合格的产品。成型研究所使用的设备：重庆英格WBF-5C流化床制粒干燥机4.2.1喷雾速率考察根据变更前的XXXX的生产工艺规定，物料温度控制在55~65℃，研究中通过设立进风温度达成物料温度规定。喷雾速率考察实验：称取XXXX喷雾粉156g、糊精244g置于流化床中，用水作润湿剂，采用不同的喷雾速率制粒，待颗粒成型后，继续干燥20分钟。流化床参数设立以下：喷雾速率：15r/min、20r/min、25r/min、30r/min进风温度：90℃雾化压力：1.0kg/cm2流化床一步制粒喷雾速率考察成果喷雾速率（r/min）喷雾粉重量（g）糊精重量（g）颗粒总重（g）粒度不合格品重量（g）成型率（%）15156.27244.12371.4272.9380.3620156.83244.51379.0646.4887.7425156.02244.75373.8123.1093.8230156.19244.13385.1474.0580.77注：成型率=（颗粒总重-不合格品重量/颗粒重量）×100%结论：当喷雾速率在25r/min时，XXXX成品率较高，故选择以25r/min作为小试一步制粒研究的喷雾速率。4.2.2雾化压力考察雾化压力考察实验：称取处方量配比XXXX喷雾粉156g、糊精244g置于流化床中，用水作润湿剂，采用不同的雾化压力制粒，待颗粒成型后，继续干燥20分钟。流化床参数设立以下：雾化压力：0.75kg/cm2、1.2kg/cm2、1.4kg/cm2进风温度：90℃喷雾速率：25r/min流化床一步制粒雾化压力考察成果雾化压力（kg/cm2）喷雾粉重量（g）糊精用量（g）颗粒总重（g）粒度不合格品重量（g）成型率（%）0.75156.03244.51379.3875.7580.031.20156.44244.01368.8131.2391.531.40156.28244.72374.5263.9282.93结论：在雾化压力为1.20kg/cm2时，颗粒成型率较好，在0.75kg/cm2时，颗粒易结块，塌床，而1.40kg/cm2时，颗粒粉性较高，故以雾化压力为1.20kg/cm2作为XXXX的制备工艺参数。4.2.3小试样品的制备小试样品制备办法：称取处方量配比XXXX喷雾粉234g、糊精约364g、甜菊素约2.4g置于流化床中，用水作润湿剂，待颗粒成型后，继续干燥20分钟。按上述实验拟定的流化床参数设立：进风温度：90℃喷雾速率：25r/min雾化压力：1.20kg/cm2流化床一步制粒三批小试样品考察成果批号喷雾粉重量(g)糊精用量(g)甜菊素用量(g)颗粒总重(g)粒度不合格品重量(g)成型率（%）水分(%)休止角溶化性0308-1234.01363.692.51573.1744.6092.221.4729°符合规定0308-2234.24363.612.43581.0634.9393.991.6528°符合规定0308-3234.17363.642.49579.2236.3293.731.6029°符合规定结论：3批小试样品颗粒成型率良好；水分符合颗粒剂规定；溶化性均符合颗粒剂规定；休止角均在40°下列，流动性较好。实验成果表明：一步制粒能够满足制备XXXX（未添加蔗糖）的规定。5、生产工艺研究与验证按上述优选出的制备湿法制粒和流化床一步制粒办法进行中试生产，成果表明采用流化床一步制粒方式生产XXXX（未添加蔗糖），工艺设计合理，含有可重复性和易操作性，产品质量稳定可控，可将其作为本品的成型工艺。5.1湿法制粒工艺研究取XXXX喷雾粉（批号0103，干膏率15.6%）、糊精置槽形混合机（CH-200型）中，混匀，加入60%乙醇适量制成软材，制粒，于鼓风干燥箱55～65℃干燥，用振荡筛整粒。湿法制粒中试生产状况生产批号0401批量1万袋物料用量物料名称 物料编号/批号 配料量  通脉喷雾粉030425kg糊精F-0135kg60%乙醇/适量重要生产设备设备名称设备型号生产厂家槽形混合机CH-200常州品正干燥设备有限公司摇晃颗粒机LYK-160D重庆市科旭制药机械设备制造有限公司鼓风干燥机LGL-120重庆市科旭制药机械设备制造有限公司生产数据颗粒总重50.01kg合格颗粒重量（整粒后）41.04kg收率68.4%结论：在制粒过程中，软材搅拌时间稍长，软材会发粘，经摇晃式制粒机制粒困难，粘网，且干燥过程中存在粘连成饼的现象，成品颗粒收率低，因此，拟定本品成型工艺不采用湿法制粒。5.2流化床一步制粒工艺研究与验证按变更前XXXX成型工艺参数规定，拟定本品的流化床一步制粒工艺参数，变更前后未变化。5.2.1变更后XXXX工艺流程图 图2.XXXX（未添加蔗糖）工艺流程图5.2.2中试工艺验证样品生产工艺制粒：称取通脉喷雾粉、糊精、甜菊素，加入一步制粒机中，按《LGL-120流化床制粒干燥机原则操作及维护保养规程》JSSB01-046操作，设立进风温度90～120℃，控制物料温度在55～65℃，风机频率控制在25～50HZ；喷液速度控制在5～40rpm，将纯化水通过喷枪喷入沸腾床，使物料形成均匀的颗粒并干燥，取出，整粒，包装。整粒：按《漩涡振荡筛原则操作及维护保养规程》JSSB01-019操作，将干颗粒进行整粒，上层过10目筛，下层过80目筛，使其不能通过的颗粒总和不得过14%。混合：整粒后的颗粒按批量进行混合，操作时用真空上料机吸入三维混合机中，按《三维混合机原则操作及维护保养规程》JSSB01-016操作，混合15分钟。内包装：按《DXDK40IV型自动颗粒包装机的操作与维护保养规程》JSSB01-101操作，启动自动颗粒包装机，包装成6g/袋。5.2.33批中试工艺验证生产信息三批中实验证生产信息批号040204030404批量1万袋1万袋1万袋生产日期.4.10.4.11.4.11生产地点XXXX药业有限公司固体制剂车间物料用量物料名称编码/批号用量（kg）编码/批号用量（kg）编码/批号用量（kg）喷雾粉030425.01030526.50030626.51糊精F-0134.75F-0133.26F-0133.25甜菊素F-010.24F-010.24F-010.24复合膜B-0112.30B-0111.90B-0111.77生产数据颗粒总重（kg）59.4260.8260.00合格颗粒重量（整粒后）（kg）57.3558.8558.78总混后颗粒重（kg）57.0057.5358.325.2.4重要的生产设备重要的生产设备工序设备名称规格型号数量生产能力生产厂家制粒流化床制粒干燥机LGC-1201台60-140kg/批重庆市科旭制药机械设备制造有限公司整粒旋涡振荡筛ZK-6501台180-kg/h江苏瑰宝集团有限公司总混三维混合机SBH-8001台750L/380kg内包装自动颗粒包装机DXDK-40VI1台50-110袋/分钟天津市三桥包装机械有限责任公司5.2.5各工序质量控制点各工序质量控制点质量监控点控制项目监控原则喷雾粉、辅料外观、品名、批次、合格状态标志应无肉眼可见异物；有检查报告书，核对品名、批次、合格状态标志投料品名、使用期、批号、数量不得有差错制粒干燥水分≤7%流化床干燥温度90~120℃整粒筛网上层筛为10目，下层筛为80目混合时间15分钟装量、封口核对品名、批次、数量、状态标记不得有差错装量差别6g±5%封口封口牢固，无脱膜、漏气现象袋身产品批号、生产日期、使用期至5.2.6中间产品的控制本品中间产品检查办法与程度见表20；三批中实验证样品中间体检测成果见表21。中间产品的质量原则中间体名称检测项目内控原则待包装品性状本品为棕黄色至棕褐色的颗粒；气微，味甜、微苦粒度照粒度测定法（ChP四部通则0982）测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和，不得过14%溶化性取本品6g，加热水200ml，搅拌5分钟，立刻观察，应全部溶化或轻微浑浊。（ChP四部通则0104）水分照水分测定法（ChP四部通则0832）测定，不得过7.0%。含量本品每6g含葛根以葛根素(C21H20O9)计，不少于50mg，含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不少于30mg三批中实验证样品中间体检测成果项目040204030404性状本品为棕黄色颗粒；微苦本品为棕黄色颗粒；微苦本品为棕黄色颗粒；微苦粒度8%10%5%溶化性颗粒全部溶化颗粒全部溶化颗粒全部溶化水分1.3%1.3%1.3%含量葛根素/袋84.6mg79.8mg85.8mg丹酚酸B/袋43.2mg57.6mg48.6mg5.2.7三批中实验证成果和评价工艺验证成果汇总表工序验证成果制粒工序经验证，制粒工序物料温度、雾化压力、喷雾速率、筛网目数均符合工艺规定范畴。总混工序经验证，总混工序混合时间、混合均匀度均符合工艺规定范畴。包装工序经验证，包装工序装量差别、设定纵封温度、横封温度均符合工艺规定范畴。5.3变更前后的制备办法比较通脉胶囊变更前后制备办法中，除辅料种类、用量以及制成总量发生变化外，其它制备过程均未变化，变更前后的制备办法比较以下：变更前后的制备办法比较处方丹参500g川芎500g葛根500g变更前制备办法以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.08（80℃），趁热滤过，滤液浓缩至适量，加入蔗糖粉适量，制成颗粒，低温干燥，制成1000g；或喷雾干燥，加入蔗糖粉适量，混匀，制成颗粒1000g，即得。变更后制备办法以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.08（80℃），趁热滤过，滤液浓缩至适量，喷雾干燥，加入糊精适量，甜菊素2.4g，混匀，制成颗粒600g，即得。6、包装材料变更前后的包装材料未发生变化，包材的类型、来源及有关证明文献以下：包材类型、来源及有关证明文献项目包装材料包材类型聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜包材生产商徐州龙润医药包装有限公司包材注册证号国药包字0283包材注册证使用期03月14日包材质量原则编号YBB0017-药品审评中心备案登记号B附件：徐州龙润医药包装有限公司营业执照附件：聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜注册证附件：聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜质量原则和检查报告7、XXXX质量研究按照通脉胶囊的质量原则（WS3-B-0824-91-）对变更后样品的质量原则进行了研究，对薄层鉴别（丹参、川芎、葛根）、含量测定（丹酚酸B、葛根素）办法学进行了考察，通过办法学考察，拟定仍采用原质量原则对本品进行控制（鉴别、含量测定项下的样品取样量因规格的变化作了对应的调节）。拟定的XXXX(未添加蔗糖)的质量原则草案见附件7.1性状根据三批XXXX(未添加蔗糖)性状成果，暂定本品性状为：棕黄色至棕褐色的颗粒；气微，味甜、微苦。变更前后XXXX性状比较批号性状变更前0309为棕褐色的颗粒；气微，味甜、微苦。0310为棕褐色的颗粒；气微，味甜、微苦。0311为棕褐色的颗粒；气微，味甜、微苦。变更后0402为棕褐色的颗粒；气微，微苦。0403为棕褐色的颗粒；气微，微苦。0404为棕褐色的颗粒；气微，微苦。7.2鉴别7.2.1仪器与试药（1）仪器ME204E万分之一电子天平（梅特勒·托利多）、ZF-2三用紫外仪（上海安亭科学仪器厂）、KQ-500DB超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、展开缸、硅胶G薄层板。（2）试药XXXX(未添加蔗糖)（批号：0309、0310、0311）XXXX(未添加蔗糖)（批号：0402、0403、0404）；川芎对照药材（批号：12；购于中国食品药品检定研究院）；丹参对照药材（批号：12；购于中国食品药品检定研究院）；葛根素对照品（批号：11；购于中国食品药品检定研究院）；乙醇、氯仿、甲醇、盐酸、乙酸乙酯、甲苯、甲酸、乙醚、正己烷均为分析纯；水为自制纯化水。7.2.2丹参薄层鉴别薄层办法学考察项目涉及：不同温度考察、不同湿度考察、不同薄层板考察。鉴别办法：取本品6g，研细，加乙醇50m1，超声解决25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20m1使溶解，加盐酸2滴，加乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，低温蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材2g，加水30ml煎煮30分钟，滤过，滤液加盐酸2滴，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典四部通则0502)实验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸（24:20:10:6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱对应的位置上，显相似颜色的主斑点。（1）办法学验证研究①不同厂家薄层板及专属性考察分别采用不同厂家的硅胶薄层板（青岛海洋化工、乳山上邦新、烟台新诺薄层板）上，按上述薄层色谱条件展开、取出、晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，置日光下检视。123123A(青岛海洋化工硅胶G板)B（烟台新诺硅胶G板）1.丹参对照药材2.供试品3.缺丹参阴性图3.不同厂家薄层板及专属性考察成果成果分析：通过比较不同厂家生产的硅胶G薄层板，XXXX(未添加蔗糖)在与丹参对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的主斑点，色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，不同厂家薄层板对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。②不同湿度考察分别吸取丹参对照药材溶液、供试品溶液（批号：0402）、缺丹参供试品溶液点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在低湿（25%）和高湿(65%)条件下展开、取出、晾干，置日光下检视。1212A(低湿25%)B（高湿65%）1.丹参对照药材2.供试品图4.不同湿度考察成果成果分析：在低湿和高湿条件下，XXXX(未添加蔗糖)在与丹参对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的主斑点，且色谱斑点分离效果都较好，实验成果表明，湿度对XXXX(未添加蔗糖)提取物薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。③不同温度考察分别吸取丹参对照药材溶液、供试品溶液（批号：0402）、缺丹参供试品溶液点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在室温（25℃）和高温(40℃)条件下展开、取出、晾干，置日光下检视。1212A(室温25℃)B（高温40℃）丹参对照药材2.供试品图5.不同温度考察成果成果分析：在室温和高温条件下，XXXX(未添加蔗糖)在与丹参对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的主斑点，且色谱斑点分离效果都较好，实验成果表明，湿度对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。（2）样品检查XXXX变更前3批样品（批号：0309、0310、0311）、变更后3批样品（批号：0402、0403、0404）丹参薄层鉴别成果以下：123415671.丹参对照药材（3μL）2.供试品（0402批）3.供试品（0403批）4.供试品（0404批）5.供试品（0309批）6.供试品（0310批）7.供试品（0311批）图6.三批中试样品考察成果结论：XXXX变更前后各3批样品的丹参薄层鉴别，供试品色谱中，在与丹参对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的主斑点，均符合规定。7.2.3川芎薄层鉴别川芎薄层鉴别办法学考察项目：不同温度考察、不同湿度考察、不同薄层板考察。鉴别办法：取本品3.6g，加水30ml，微热使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，加乙醚60ml，加饱和氯化钠溶液2ml，轻轻振摇，静置，分取乙醚液（如果乳化，分取乳化层，加无水乙醇1ml，摇匀，分取乙醚液），水层继续用乙醚60ml提取，合并乙醚液，低温蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材2g，加水40ml，煎煮15分钟，滤过，放冷，转移至分液漏斗中，加乙醚60ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典四部通则0502)实验，分别吸取供试品溶液5ul，对照药材溶液8ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-正己烷（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱对应的位置上，显相似颜色的荧光斑点。（1）办法学验证研究①不同厂家薄层板及专属性考察分别吸取川芎对照药材溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)（0402）供试品溶液3μL、XXXX(未添加蔗糖)缺丹参供试品溶液3μL点于不同厂家的硅胶薄层板（青岛海洋化工、乳山上邦新、烟台新诺薄层板）上，按上述薄层色谱条件展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。123123123A(青岛海洋化工硅胶G板)B（烟台新诺硅胶G板）C(乳山上邦新硅胶G板)1.川芎对照药材（2μL）2.供试品3.缺川芎阴性图7.不同厂家薄层板及专属性考察成果成果分析：通过比较不同厂家生产的硅胶G薄层板，XXXX(未添加蔗糖)在与川芎对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的荧光主斑点，色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，不同厂家薄层板对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。②不同湿度考察分别吸取川芎对照药材溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)（0402）供试品溶液3μL、XXXX(未添加蔗糖)缺川芎供试品溶液3μL点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在低湿（25%）和高湿(65%)条件下展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。123123A(低湿25%)B（高湿65%）1.缺丹参阴性（3μL）2.供试品3.川芎对照药材图8.不同湿度考察成果成果分析：在低湿和高湿条件下，XXXX(未添加蔗糖)在与川芎对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的荧光主斑点，且色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，湿度对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。③不同温度考察分别吸取川芎对照药材溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)（0402）供试品溶液3μL、XXXX(未添加蔗糖)缺川芎供试品溶液3μL点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在室温（25℃）和高温(40℃)条件下展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。123123A(室温25℃)B（高温40℃）1.川芎对照药材2.供试品3.缺川芎阴性图9.不同温度考察成果结论：在室温和高温条件下，XXXX(未添加蔗糖)在与川芎对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的荧光主斑点，且色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，湿度对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。（2）样品检测XXXX变更前3批样品（批号：0309、0310、0311）、变更后3批样品（批号：0402、0403、0404）川芎薄层鉴别成果以下：123415671.川芎对照药材（2μL）2.供试品（0402批）3.供试品（0403）4.供试品（0404批）5.供试品（0309批）6.供试品（0310批）7.供试品（0311批）图10.三批中试样品考察成果结论：XXXX变更前后各3批样品的川芎薄层鉴别，供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的主斑点，均符合规定。7.2.4葛根素薄层鉴别取鉴别（1）项下的供试品溶液，作为供试品溶液，再取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)实验，吸取上述二种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:2.5:0.25)为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，至紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在.与对照品色谱对应的位置上，显相似颜色的荧光斑点。办法学考察项目：不同点样量考察、不同温度考察、不同湿度考察、不同薄层板考察。（1）办法学验证研究①不同厂家薄层板及专属性考察分别吸取葛根素对照品溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)（0402）供试品溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)缺丹参供试品溶液2μL点于不同厂家的硅胶薄层板（青岛海洋化工、乳山上邦新、烟台新诺薄层板）上，按上述薄层色谱条件展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。123123123A(青岛海洋化工硅胶G板)B（烟台新诺硅胶G板）C(乳山上邦新硅胶G板)1.葛根素对照品（2μL）2.XXXX(未添加蔗糖)（2μL）3.XXXX(未添加蔗糖)缺葛根阴性（2μL）图11.不同厂家薄层板及专属性考察成果结论：通过比较不同厂家生产的硅胶G薄层板，XXXX(未添加蔗糖)在与葛根素对照品色谱对应的位置上显相似颜色的荧光斑点，色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，不同厂家薄层板对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。②不同湿度考察分别吸取葛根素对照品溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)（0402）供试品溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)缺葛根供试品溶液2μL点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在低湿（25%）和高湿(65%)条件下展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。1212A(低湿25%)B（高湿65%）1.葛根素对照品（2μL）2.XXXX(未添加蔗糖)（2μL）图12.不同湿度考察成果结论：在低湿和高湿条件下，XXXX(未添加蔗糖)在与葛根素对照品色谱对应的位置上显相似颜色的荧光斑点，且色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，湿度对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。③不同温度考察分别吸取葛根素对照品溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)（0402）供试品溶液2μL、XXXX(未添加蔗糖)缺葛根供试品溶液2μL点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件，分别在室温（25℃）和高温(40℃)条件下展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。1212A(室温25℃)B（高温40℃）葛根素对照品（2μL）2.XXXX(未添加蔗糖)（2μL）图13.不同温度考察成果结论：在室温和高温条件下，XXXX(未添加蔗糖)在与葛根素对照品色谱对应的位置上显相似颜色的荧光斑点，且色谱斑点分离效果都较好，阴性无干扰，专属性强，实验成果表明，湿度对XXXX(未添加蔗糖)薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别办法的耐用性良好。（2）样品检测XXXX变更前3批样品（批号：0309、0310、0311）、变更后3批样品（批号：0402、0403、0404）葛根素薄层鉴别成果以下：123415671.葛根素对照品2.供试品（0402批）3.供试品（0403）4.供试品（0404批）5.供试品（0309批）6.供试品（0310批）7.供试品（0311批）图14.三批中试样品考察成果结论：XXXX变更前后各3批样品的葛根素薄层鉴别，供试品色谱中，在与葛根素对照药材色谱对应的位置上显相似颜色的主斑点，均符合规定。7.3检查应符合颗粒剂项下有关的各项规定(通则0104)。7.3.1水分中药颗粒剂照水分测定法（通则0832)第二法（烘干法）测定，除另有规定外，水分不得超出8.0%。水分检查办法：取供试品2～5g，精密称定，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超出5mm；疏松供试品不超出10mm，精密称定，启动瓶盖在105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至持续两次称重的差别不超出5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。XXXX变更前后各3批样品检查成果以下：变更前后XXXX水分测定成果批号变更前变更后030903100311040204030404水分（%）3.243.183.111.391.291.35结论：XXXX变更前后各3批样品水分检测成果均未超出8.0%，符合规定。7.3.2溶化性除另有规定外，颗粒剂照下述办法检查，溶化性应符合规定。溶化性检查：取供试品10g(中药单剂量包装取1袋），加热水200ml，搅拌5分钟，立刻观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，均不得有焦屑等异物。变更前后XXXX溶化性测定成果批号变更前变更后030903100311040204030404溶化性符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定结论：XXXX变更前后各3批样品溶化性检查成果均符合规定。7.3.3粒度除另有规定外，照粒度和粒度分布测定法（通则0982第二法双筛分法)测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超出15%。粒度检查：取单剂量包装的5袋（瓶）或多剂量包装的1袋（瓶），称定重量，置该剂型或品种项下规定的上层(孔径大的）药筛中（下层的筛下配有密合的接受容器），保持水平状态过筛，左右来回，边筛动边拍打3分钟。取不能通过大孔径筛和能通过小孔径筛的颗粒及粉末，称定重量，计算其所占比例（％)。变更前后XXXX粒度测定成果批号变更前变更后030903100311040204030404粒度（%）7.697.587.661.151.271.16结论：XXXX变更前后各3批样品粒度检查成果均未超出15%，符合规定。7.3.4微生物程度检查建立XXXX（未添加蔗糖)微生物程度检查办法。按照ChP四部通则1105、1106进行验证，确认对供试品进行微生物程度检查时，所采用的需氧菌、霉菌、酵母菌计数办法和控制菌检查办法适合于该药品的微生物程度检查。XXXX（未添加蔗糖)微生物程度检查办法合用性见附件。微生物验证成果验证项目验证成果需氧菌、霉菌及酵母菌计数办法合用性实验铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌回收率均在50-200%之间，能够确认采用稀释法，通过平皿倾注法培养，适合于XXXX的需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数的测定。控制菌大肠埃希菌检查办法合用性实验本品大肠埃希菌采用常规法进行控制菌检查，阳性菌生长良好，阴性对照组无菌生长，表明该控制菌检查办法专属性好。XXXX（未添加蔗糖）根据ChP微生物程度检测法，通过验证，能够得出以下办法进行微生物程度检测：需氧菌总数：供试品10g加到灭菌的三角瓶中，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，溶解、混匀，制成1:10供试液，取1:10供试液1ml置直径90mm的无菌平皿中，注2个平皿，注入20ml温度不超出45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，培养、计数，测定菌数。霉菌及酵母菌总数：取1:10供试液1ml置直径90mm的无菌平皿中，注2个平皿，注入20ml温度不超出45℃的溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，培养、计数，测定菌数。大肠埃希菌：取1:10供试液10ml至100ml胰酪大豆胨液体培养基增菌培养后，按常规法进行检测。程度：需氧菌总数不得过103cfu/g，霉菌和酵母菌数不得过102cfu/g，不得检出大肠埃希菌(1g)。变更前后XXXX微生物程度检查成果批号变更前变更后030903100311040204030404需氧菌总数（cfu/g）600500100600500550霉菌、酵母菌（cfu/g）＜20＜20＜20＜20＜20＜20大肠埃希菌/g未检出未检出未检出未检出未检出未检出7.4、含量测定照高效液相色谱法（《中国药典》四部通则0512）测定。参考XXXX(添加蔗糖)含量测定项测定办法中色谱条件和办法，建立XXXX(未添加蔗糖)的含量测定，并根据《中国药典》（四部通则9101）“药品质量原则分析办法验证指导原则”，对建立的XXXX(未添加蔗糖)含量测定办法进行办法学验证，办法学研究成果表明该办法符合含量测定的规定，可用于测定XXXX(未添加蔗糖)中丹酚酸B、葛根素含量的测定。7.4.1仪器与试药（1）仪器设备：色谱仪1:岛津LC-2040C3D色谱系统色谱仪2：岛津LC-20A色谱系统，涉及LC-20AT输液泵、SIL-20AC自动进样器、CTO-20AC色谱柱温箱、SPD-M20A紫外检测器。电子天平：ME204E（梅特勒·托利多）、AG135（十万分之一）、XP6（百万分之一）。超声仪：昆山市超声仪器有限公司。（2）色谱柱信息以下：色谱柱1：依利特SupersilODS25µm4.6mm×250mm柱号：E2916630色谱柱2：岛津InertsilODS-35µm4.6mm×250mmS/N.1A7184412（3）试剂乙腈（Adamas-beta，色谱纯），水为纯化水，甲醇（北京百灵威科技有限公司，色谱纯），磷酸等其它试剂均为分析纯。（4）试药丹酚酸B对照品（中国食品药品检定研究院批号：11，含量94.1%）；葛根素对照品（中国食品药品检定研究院批号：11，含量95.4%）；葛根素对照品（中国食品药品检定研究院批号：11，含量95.4%）；XXXX(未添加蔗糖)（0402、0403、0404）7.4.2丹参含量测定办法学验证丹酚酸B含量测定办法：色谱条件与系统合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙晴-0.1%磷酸溶液（22:78）为流动相；检测波长266nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差别项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，精密加入75%甲醇50ml，称定重量，超声解决（功率300W，频率40Hz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20µL，注入液相色谱仪，测定，即得。丹酚酸B含量测定办法验证成果项目可接受原则验证成果专属性缺丹参供试品阴性实验不干扰本品含量测定阴性实验不干扰本品含量测定，本办法专属性良好。线性以丹酚酸B对照品的浓度（mg/ml）为横坐标，色谱峰面积（A）为纵坐标，作线性回归得回归方程，回归线的有关系数（r）不得不大于0.999。丹酚酸B在9.37～187.48µg/ml浓度范畴内呈线性，线性方程为y=26947.5829x-5161.5311，有关系数r=1.0000，阐明在此浓度范畴内峰面积与浓度呈良好的线性关系。精密度重复性6份供试品溶液，含量测定成果的相对原则偏差不不不大于2.0%。本品6份供试品溶液，丹酚酸B含量均值为7.91mg/g，RSD为1.24%，不大于2.0%，表明本办法重复性良好。中间精密度由另一名分析人员使用不同的仪器进行测试，测试6份，与重复性样品进行比较，所得12份供试品溶液，丹酚酸B含量测定成果的RSD应不不不大于4.0%。两名分析人员使用不同的仪器进行测试，所得12份供试品溶液，丹酚酸B含量均值为8.04mg/g，RSD为2.18%，不大于4.0%，表明本此办法中间精密度良好。回收率各浓度样品的回收率均应在92.0%~105.0%之间，且6次测得成果间RSD不不不大于2.0%。6份供试品溶液的回收率在100.00~102.37%范畴内，均在92.0%~105.0%之间，且6次测得成果的RSD为0.91%，不大于2.0%，表明本办法回收率良好。溶液稳定性对照品及供试品溶液中丹酚酸B保存时间、峰面积的相对原则偏差不不不大于2.0%。对照品溶液于室温条件放置24h，丹酚酸B保存时间的RSD值为0.61%，峰面积RSD值为1.28%，供试品溶液于室温条件放置24h，丹酚酸B保存时间的RSD值为0.72%，峰面积RSD值为1.61%，均不大于2.0%；可认为对照品溶液和供试品溶液室温条件放置24h内稳定性良好。耐用性通过微小变化波长、流速、柱温、流动相比例及更换不同色谱柱等色谱条件参数，考察测定成果不受影响的程度。规定在各变动参数下，丹酚酸B含量的RSD<4.0%；可认为本办法对此色谱条件耐用性良好。微调波长(±2nm)、流速(±0.02ml/min)、柱温(±1℃)、流动相比例（乙腈-0.1%磷酸（21:79)和乙腈-0.1%磷酸（23:77））及更换不同型号、不同品牌色谱柱（依利特SupersilODS2C185μm(4.6*250mm)和岛津InertsilODS3C185μm(4.6*250mm)），在各色谱条件下，丹酚酸B含量与正常条件相比较，RSD均不大于4.0%，可认为微小变动上述色谱条件，对本品含量测定成果无影响。表明本法耐用性良好。（1）专属性考察按照供试品溶液制备办法依法制备缺丹参供试品溶液，精密吸取20µL，注入液相色谱仪，统计色谱图，成果阴性实验无干扰。见附图图15.丹酚酸B对照品色谱图图16.XXXX(未添加蔗糖)供试品色谱图图17.XXXX(未添加蔗糖)缺丹参色谱图（2）线性考察精密称取丹酚酸B对照品4.981mg，置25ml量瓶中，加75%甲醇振摇使溶解并定容至刻度，作为对照品储备液。再分别精密量取对照品储备液1.0ml→20ml、1.0ml→10ml、2.0ml→10ml、3.0ml→10ml、5.0ml→10ml、10.0ml→10ml，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，统计色谱图（见附件-图），以对照品浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），进行线性回归分析，绘制原则曲线。回归方程：y=26947.5829x-5161.5311，r=1.0000。丹酚酸B线性关系考察成果浓度（µg/ml）9.3718.7537.5056.2593.74187.48峰面积2490425016651004936150690725207845047998回归方程y==26947.5829x-5161.5311有关系数r=1.0000线性关系图结论：线性考察成果表明，丹酚酸B在9.37～187.48µg/ml范畴内线性关系良好。（3）精密度考察①重复性考察取同一批（0402）XXXX(未添加蔗糖)6份，按供试品溶液的制备办法制备成供试品溶液，照上述色谱条件进行测定并计算含量成果RSD。重复性实验成果分析员：实验员A高效液相色谱仪：岛津LC-2040C3D序号123456含量(mg/g)7.767.947.848.007.928.02平均含量(mg/g)7.91RSD(%)1.24结论：本品6份供试品溶液，丹酚酸B含量均值为7.91mg/g，RSD为1.24%，不大于2.0%，表明本办法重复性良好。②中间精密度考察由另一人，取同一批（0402）XXXX(未添加蔗糖)6份，按供试品溶液的制备办法制备成供试品溶液，在另一台仪器，照上述色谱条件进行测定并计算含量成果RSD%。成果见下表，成果RSD为0.51%，表明该办法中间精密度良好。中间精密度实验成果分析员：实验员B高效液相色谱仪：岛津LC-20A高效液相供试品123456均值(mg/g)RSD（%）含量(mg/g)8.148.138.118.228.208.178.160.5112次含量检测成果平均值：8.04mg/g12次检测成果RSD：2.18%结论：两名分析人员使用不同的仪器进行测试，所得12份供试品溶液，丹酚酸B含量均值为8.04mg/g，RSD为2.18%，不大于4.0%，表明本此办法中间精密度良好。（4）精确度考察精密称取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖）6份样品(丹酚酸B含量为7.72mg/g)约0.25g，分别置于50ml量瓶中，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液（浓度1.882mg/mL）1mL，按供试品制备办法解决，即得加样回收样品溶液；进行含量测定。测定上述溶液及对照品溶液峰面积，计算丹酚酸B加样回收率。成果表明，平均回收率为101.19%。实验成果表明办法精确性良好。精确度实验成果名称样品取样量(mg)样品含量(mg/g)加入对照品量(mg)样品含量(mg)测得总含量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD（%）10.28517.721.8822.2014.1089101.39101.190.9120.28452.1964.1170102.0630.29632.2874.2139102.3740.27982.1604.0419100.0050.27472.1214.0118100.5060.28252.1814.0776100.79成果及分析：经实验考察，丹酚酸B的平均加样回收率为101.19%，RSD%为0.91，表明该办法良好。（5）溶液稳定性考察精密称取丹酚酸B对照品2.215mg，按对照品溶液制备办法制备对照品溶液。另精密称取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖），按供试品制备办法，制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24小时进样，测定峰面积，考察丹酚酸B对照品及供试品溶液的稳定性。实验成果见下表：丹酚酸B对照品溶液稳定性测定成果时间（h）保存时间（min）峰面积022.5702220499222.7082212039422.8322189166822.48721756671222.47521480242422.6152163151RSD%0.611.28供试品溶液稳定性测定成果时间（h）保存时间（min）峰面积022.7211933031222.7621929638422.9311993194822.47819750001222.53019785532422.664509RSD%0.721.61结论：经稳定性24小时考察，丹酚酸B对照品及XXXX（未添加蔗糖）溶液的RSD均不大于2%，表明丹酚酸B对照品及供试品溶液在24小时内基本稳定，能够满足测定需要。（6）耐用性考察①不同波长考察取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖），按“供试品制备办法”制备供试品溶液，分别在不同波长284nm、286nm、288nm下进行实验，测定丹酚酸B的含量。不同波长测定成果波长含量（mg/g）均值（mg/g）相对原则偏差（%）284nm7.747.610.837.48286nm7.737.727.71288nm7.737.727.70结论：成果表明不同波长对丹酚酸B的含量测定影响较小。②不同流速考察:取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖），按供试品制备办法，制备成供试品溶液，分别在不同流速0.98mL/min、1.0mL/min、1.02mL/min下进行实验，测定丹酚酸B的含量。不同流速测定成果流速含量（mg/g）均值（mg/g）相对平均偏差/%0.98mL/min7.787.751.467.721.0mL/min7.737.727.711.02mL/min8.017.937.85结论：成果表明变化微小条件（流速±0.02ml/min），不同流速对丹酚酸B的含量测定影响较小。③不同柱温的考察：取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖），按“供试品制备办法”制备供试品溶液，分别在不同柱温24℃、25℃、26℃下进行实验，测定丹酚酸B的含量。不同柱温测定成果柱温含量（mg/g）均值（mg/g）相对平均偏差/%24℃7.547.671.077.7925℃7.737.727.7126℃7.987.567.89成果及分析：成果表明变化微小条件（柱温±1℃），不同柱温对丹酚酸B的含量测定影响较小。④不同色谱柱的考察：取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖），按“供试品制备办法”制备供试品溶液，分别在不同色谱柱AgilentHCC18、DiamonsilC18、岛津Shim-PackVP-ODSC18、岛津InertsilODS3C18下进行实验，测定丹酚酸B的含量。不同色谱柱的测定成果色谱柱含量（mg/g）均值（mg/g）相对平均偏差/%依利特SupersilODS2C187.737.721.457.71岛津InertsilODS3C187.897.887.87结论：在进行不同色谱柱考察时，AgilentHCC18、DiamonsilC18、岛津Shim-PackVP-ODSC18均不合用，而岛津InertsilODS3C18色谱柱对丹酚酸B的含量影响较小。⑤不同流动相比例的考察：取同一批号（0402）XXXX（未添加蔗糖），按“供试品制备办法”制备供试品溶液，分别在不同流动相比例乙腈-0.1%磷酸（21:79）、乙腈-0.1%磷酸（22:78）、乙腈-0.1%磷酸（23:77）下实验，测定丹酚酸B的含量。不同流动相比例的测定成果流动相比例含量（mg/g）均值（mg/g）相对平均偏差/%乙腈-0.1%磷酸（21:79）7.757.802.337.85乙腈-0.1%磷酸（22:78）7.737.727.71乙腈-0.1%磷酸（23:77）8.028.078.12结论：成果表明不同流动相比例对丹酚酸B的含量测定影响较小。7.4.3葛根含量测定办法学验证葛根素含量测定办法：色谱条件与系统合用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙晴-水（10:90）为流动相；检测波长250nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差别项下的本品，研细，取约0.12g，精密称定，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，超声解决（功率300W，频率40Hz）30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。葛根素含量测定办法验证成果项目可接受原则验证成果专属性缺葛根供试品阴性实验不干扰本品含量测定阴性实验不干扰本品含量测定，本办法专属性良好。线性以葛根素对照品的浓度（mg/ml）为横坐标，色谱峰面积（A）为纵坐标，作线性回归得回归方程，回归线的有关系数（r）不得不大于0.999。葛根素在7.03～140.58µg/ml浓度范畴内呈线性，线性方程为y=45869.7695x-4682.8040，有关系数r=1.0000，阐明在此浓度范畴内峰面积与浓度呈良好的线性关系。精密度重复性6份供试品溶液，含量测定成果的相对原则偏差不不不大于2.0%。本品6份供试品溶液，葛根素含量均值为13.10mg/g，RSD为0.56%，不大于2.0%，表明本办法重复性良好。中间精密度由另一名分析人员使用不同的仪器进行测试，测试6份，与重复性样品进行比较，所得12份供试品溶液，丹酚酸B含量测定成果的RSD应不不不大于4.0%。两名分析人员使用不同的仪器进行测试，所得12份供试品溶液，葛根素含量均值为13.01mg/g，RSD为1.03%，不大于4.0%，表明本此办法中间精密度良好。回收率各浓度样品的回收率均应在92.0%~105.0%之间，且6次测得成果间RSD不不不大于2.0%。6份供试品溶液的回收率在97.64~99.75%范畴内，均在92.0%~105.0%之间，且6次测得成果的RSD为0.74%，不大于2.0%，表明本办法回收率良好。溶液稳定性对照品及供试品溶液中葛根素保存时间、峰面积的相对原则偏差不不不大于2.0%。对照品溶液于室温条件放置48h，葛根素保存时间的RSD值为1.10%，峰面积RSD值为0.36%，供试品溶液于室温条件放置48h，葛根素保存时间的RSD值为0.78%，峰面积RSD值为0.21%，均不大于2.0%；可认为对照品溶液和供试品溶液室温条件放置48h内稳定性良好。耐用性通过微小变化波长、流速、柱温、流动相比例及更换不同色谱柱等色谱条件参数，考察测定成果不受影响的程度。规定在各变动参数下，葛根素含量的RSD<4.0%；可认为本办法对此色谱条件耐用性良好。微调波长(±2nm)、流速(±0.05ml/min)、柱温(±2℃)、流动相比例（乙腈-水（9:91）和乙腈-水（11:89））及更换不同型号、不同品牌色谱柱（月旭WelchUltimateAQC185μm(4.6*250mm)、DiamonsilC185μm(4.6*250mm)和依利特SupersilODS2C185μm(4.6*250mm)），在各色谱条件下，葛根素含量与正常条件相比较，RSD均不大于4.0%，可认为微小变动上述色谱条件，对本品含量测定成果无影响。表明本法耐用性良好。（1）专属性考察按照供试品溶液制备办法依法制备缺葛根供试品溶液，按【含量测定】项下所述的色谱条件进行HPLC分析，统计色谱图，成果阴性实验无干扰。图18.葛根素对照品色谱图图19.XXXX(未添加蔗糖)供试品色谱图图20.XXXX(未添加蔗糖)缺葛根色谱图（2）线性考察精密称取葛根素对照品3.684mg，置25ml量瓶中，加30%乙醇醇振摇使溶解并定容至刻度，作为对照品储备液。再分别精密量取对照品储备液1.0ml→20ml、1.0ml→10ml、2.0ml→10ml、3.0ml→10ml、5.0ml→10ml、10.0ml→10ml，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，统计色谱图（见附件-图），以对照品浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），进行线性回归分析，绘制原则曲线。回归方程：y=45869.7695x-4682.8040，R²=1.0000。XXXX（未添加蔗糖）线性关系考察成果浓度（µg/ml）7.0314.0628.1242.1770.29140.58峰面积3164026456721285364192624732168146445542回归方程y=45869.7695x-4682.8040有关系数r=1.0000线性关系图成果及分析：经线性考察，成果表明葛根素浓度在7.03～140.58µg/ml范畴内线性关系良好。（3）精密度考察①重复性考察取同一批（0402）XXXX(未添加蔗糖)6份，按供试品溶液的制备办法制备成供试品溶液，照