微胶囊粉末油脂产品中可溶性膳食纤维的测定

微胶囊粉末油脂产品中可溶性膳食纤维的测定

食品中的纤维测定有很多，目前主要包括粗纤维、中性纤维纤维、酸性纤维、englyst方法和酶重量法。微胶囊粉末油脂产品近年来在食品工业中的发展方兴未艾,但是有关微胶囊粉末油脂产品中可溶性膳食纤维(SDF)的测定方法尚未见报道。本试验根据微胶囊粉末油脂产品的具体特点,针对性地研究了微胶囊粉末油脂产品中SDF的分离方法,应用Englyst法测定原理,采用酸水解后测出单糖含量,继而计算出微胶囊粉末油脂产品中SDF含量,取得令人满意的结果。1材料和方法1.1各化合物ar的合成自制月见草油微胶囊粉末油脂,高温-淀粉酶(Novozymes公司提供),DextrozymeDX(复合糖化酶,Novozymes公司提供),无水甲醇(AR),无水乙醇(AR),氨水(AR),乙醚(AR),石油醚(30～60℃沸程AR),HCl(AR),咔唑(AR),半乳糖醛酸(AR),精制乙醇,三氯醋酸(AR),三氯化铁(AR),二羟基甲苯(苔黑酚,AR),核糖(AR),重蒸苯酚,葡萄糖(AR),H2SO4(AR),H2SO4(GR)。1.2仪器和检测方法RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂),GKC可控硅恒温水浴锅(上海锦屏仪器仪表有限公司),pHS-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂),SHB-3循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂),FA1604电子分析天平(上海精天电子仪器厂),ZK025B型真空干燥箱(上海实验仪器厂),UV-754分光光度计(上海分析仪器总厂),TDL-40B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。1.3实验方法1.3.1豆渣可溶性膳食纤维分离提取月见草油微胶囊粉末油脂中添加了30%自制的豆渣可溶性膳食纤维制品作为壁材之一,对自制的豆渣可溶性膳食纤维制品进行分离提取,步骤如下:豆渣可溶性膳食纤维(自制)→α-淀粉酶水解→80%乙醇沉淀及洗涤→离心分离→沉淀用0.5mol/L硫酸回流→中和水解液→测定己糖、戊糖、糖醛酸1.3.2麦芽糊精在80%乙醇中的沉淀率测定粉末油脂产品中的常用壁材之一为麦芽糊精,为了解麦芽糊精在80%乙醇中的溶解沉淀情况,精确称取1g左右麦芽糊精3份,分别加入20mL80%乙醇,搅拌后静置,离心分离,所得沉淀在105℃烘2h,在干燥器中冷却至室温,称重,同时测定麦芽糊精的水分含量,计算麦芽糊精在80%乙醇中的沉淀率。另精确称取1g左右麦芽糊精3份,分别加水10mL,加1滴DextrozymeDX,60℃水解4h,浓缩水解液,冷却后加入4倍体积乙醇,再加80%乙醇至20mL,搅拌后静置,离心,如有沉淀在105℃烘2h,在干燥器中冷却到室温,称重,计算麦芽糊精糖化酶解后在80%乙醇中的沉淀率。1.3.3月见草油微胶囊约束干酵母粉添加量的测定以自制的月见草油微胶囊粉末油脂产品作为试验材料,样品中SDF的分离提取步骤如下:月见草油微胶囊粉末油脂→碱性乙醚法提油→糖化酶水解麦芽糊精→80%乙醇沉淀→离心分离→沉淀热水抽提→浓缩抽提液→80%乙醇沉淀及洗涤→沉淀用0.5mol/LH2SO4回流→中和水解液→测定己糖、戊糖、糖醛酸1.3.4可溶性膳食纤维含量测定膳食纤维的测定,应用目前公认的准确度高、重现性好的Englyst法的基本原理,将样品中的非淀粉性多糖(NSP)作为膳食纤维测定指标。把1.3.1、1.3.3中所得中和水解液用分光光度法分别测定己糖、戊糖、糖醛酸含量,通过转换系数得到非淀粉性多糖(NSP)即可溶性膳食纤维含量。其中:己糖的测定,苯酚硫酸法;戊糖的测定,苔黑酚比色法;糖醛酸的测定,咔唑硫酸比色法。根据己糖、戊糖、糖醛酸含量可计算出水溶性膳食纤维含量。计算公式如下:SDF含量=己糖含量×0.9+戊糖含量×0.88+糖醛酸含量×0.812结果与讨论2.1sdf分离和沉淀从豆渣可溶性膳食纤维制品中提取SDF,首先加α-淀粉酶98℃水解1h,样品中的淀粉水解成葡萄糖及低聚糖,水解液中加入4倍体积的乙醇,可溶性膳食纤维的全部成分即水溶性非消化性多糖均沉淀,而葡萄糖和低聚糖仍留在溶液中,用80%乙醇洗涤沉淀,离心分离,进一步除去淀粉水解物,所得沉淀中包含了SDF的全部成分。沉淀用0.5mol/L的硫酸回流,则水溶性非消化多糖水解成单糖,离心分离,中和水解液。2.2sdf的干扰麦芽糊精在80%乙醇中沉淀情况见表1。表1的结果说明,麦芽糊精的存在会严重干扰可溶性膳食纤维的测定,在测定微胶囊粉末油脂产品中SDF时一定要消除其干扰。麦芽糊精经糖化酶水解后,在80%乙醇中无沉淀产生,说明经过糖化酶水解后可以很好地消除麦芽糊精在测定粉末油脂产品中SDF时的干扰。2.3麦芽糊精的制备微胶囊粉末油脂产品中SDF的分离提取不同于一般样品,原因是粉末油脂产品中油脂含量很高,一般达30%～50%,用甲醇提取效果不佳。采用碱性乙醚法提取样品中的脂肪,油脂的提取率几乎是100%,可以最大限度消除干扰。具体步骤为:精确称取1g左右样品于分液漏斗中,加60℃热水10mL,1.25mL氨水,混合后加10mL乙醇,混均,再加25mL无过氧化物的乙醚,塞好塞子,振摇1min,小心开塞,放出气体,冷却,再加入25mL沸程为30～60℃石油醚,再振摇,放出气体后,将漏斗置于漏斗架上,静置半小时,使其分层,上层液中包含了全部油脂和油溶性物质,将下层液全部放出到小烧杯中。麦芽糊精在80%乙醇中大部分会沉淀下来,严重干扰测定,必须除去,方法是利用糖化酶将其水解成葡萄糖和低聚糖,而水溶性非消化多糖不会水解。具体步骤为:小烧杯中加糖化酶,60℃水解4h,冷却后水解液中加入4倍体积的乙醇,离心分离,除去糊精水解物,沉淀用热水抽提(由于粉末油脂产品中含有蛋白质,蛋白质在80%乙醇中也会沉淀,用热水抽提后蛋白质不溶,而SDF溶解),过滤后,滤液浓缩后加入4倍体积乙醇,则水溶性膳食纤维全部沉淀析出,离心分离,用80%乙醇洗涤,所得沉淀用0.5mol/L的H2SO4回流,水溶性非消化多糖水解成单糖,过滤后,中和水解液。2.4可溶性食品纤维sdf的含量测定2.4.1糖酸含量测定苯酚硫酸法测定己糖含量,用葡萄糖作为标样,λ=490nm处测定吸光度,根据葡萄糖标准溶液的浓度和吸光度值得到线性回归方程为:A=0.01380×C+0.00572r=0.9993式中:A为吸光度值,C为葡萄糖标准溶液,μg/mL。苔黑酚比色法测戊糖含量,用核糖作为标样,λ=650nm处测定吸光度,根据核糖标准溶液的浓度和吸光度值得到线性回归方程为:A=0.04129×C-0.08725r=0.9952式中:A为吸光度值,C为戊糖标准溶液浓度,μg/mL。咔唑硫酸比色法测定糖醛酸含量,用半乳糖醛酸作为标样,λ=530nm处测定吸光度,根据半乳糖醛酸标准溶液的浓度和吸光度值得到线性回归方程为:A=0.005449×C-0.005714r=0.9988式中:A为吸光度值,C为半乳糖醛酸标准溶液浓度,μg/mL。利用以上3个回归方程,可以分别求出样品中己糖、戊糖、糖醛酸的含量,从而计算出样品中可溶性膳食纤维的含量。2.4.2豆渣可溶性膳食纤维制品sdf含量测定2.1中得到的中和水解液中己糖、戊糖、糖醛酸含量,根据各回归方程、样品吸光度值和稀释倍数计算出豆渣可溶性膳食纤维制品中SDF含量,结果见表2。从表2的结果来看,用酶法水解豆渣制得的可溶性膳食纤维制品中SDF的平均含量为80.07%,置信区间为80.07%±0.85%(α=5%),RSD值为0.426%,说明测定的精密度很好。2.4.3测定含量的测定测定2.3中得到的中和水解液中己糖、戊糖、糖醛酸含量,根据各样品吸光度值、回归方程和稀释倍数计算出月见草油微胶囊粉末油脂中SDF含量,结果见表3。由于可溶性膳食纤维的添加量为30%,再由其含量80.07%可以计算出月见草油微胶囊粉末油脂中可溶性膳食纤维的含量应为24.02%,从表3中数据可以看出,实际测得平均值为23.29,置信区间为23.31%±0.70%(α=5%),平均回收率为96.96%,方法的精密度高,RSD值为1.21%,说明微胶囊粉末油脂用本试验的分离和测定方法得到的可溶性膳食纤维数据准确可靠。3样品处理方法可行性验证首次建立了测定微胶囊粉末油脂产品中可溶性膳食纤维(SDF)的方法。先采用碱性乙醚法将样品中的油脂及脂溶性物质除去,再用糖化酶将样品中的糊精(月见草油微胶囊粉末油脂中含有25.5%的麦芽糊精)水解成葡萄糖及