罗汉松生药学研究

罗汉松生药学研究

罗汉松是罗汉松科植物的罗汉松。d.修剪树干，又名罗汉杉、长唐杉、土杉、金钱松、仙白、罗汉柏和江南白。这是一棵多年生的树。产于江苏、浙江、福建、安徽、江西、湖南、四川、云南、贵州、广西、广东等省区,日本也有分布。根皮能活血,止痛,杀虫,外用于风湿骨痛、跌打损伤、疥疮;叶子能止血,用于咳血、吐血、风湿跌打损伤;球果种子能补中益气,补肾益肺,用于心胃疼痛、血虚面色萎黄。在广东,罗汉松科植物罗汉松及其变种短叶罗汉松干燥叶或带叶的枝梢曾当做侧柏叶药材使用。广东省药材公司虽然在1966年下达文件,将罗汉松改为江南柏,但实际上仍存在混用的现象。为保证临床用药的安全有效,本文对罗汉松的性状、显微特征及理化鉴定方法进行研究,为该药临床应用、质量标准的制定及进一步研究打下基础。1材料和机器1.1药物、试剂和仪器本实验所用罗汉松药材分别是:样品1(批号:20101201)采自广州大学城广东药学院药圃、样品2(批号:20110103)采自广州华南植物园、样品3(批号:20110214)采自广州大学城广中医药圃。经广东药学院中药学院中药资源系李书渊教授鉴定为罗汉松科罗汉松属植物罗汉松Podocarpusmacrophyllus;所用试剂为氯仿、甲醇、乙醇(95%),薄层层析硅胶G(青岛海洋化工有限公司);穗花杉双黄酮对照品(批号:111638-200402,购于中国药物生物制品检定所);β-蜕皮甾酮对照品(批号:111637-200301,购于中国药物生物制品检定所)。1.2实验仪器和设备SK250LH超声波清洁器(超声功率为100W,上海科导超声仪器有限公司)、YOKO-PN电动喷雾器(武汉药科新科技开发有限公司)、HHS型电热恒温水浴锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、DGX-9143B-2电烘箱(上海福玛实验设备有限公司)、200克手提式高速中药粉碎机DFT-200(温岭市林大机械有限公司)、NikonYS100生物显微镜(日本尼康公司)、HCCP11B·5架盘药物天平(北京市宣武区天平厂),以及实验常用器皿等。2方法和结果2.1罗汉松属genus,清生长所依自然意识罗汉松为广东地方习用药材,始载于《本草纲目拾遗》:治心胃痛,大补元气。《植物名实图考》:滇南罗汉松,实大如拇指,绿首绛跗,形状端好,跗嫩味甘,饤盘尤雅。俗云食之能益心气,盖与松柏子同功,治血虚面色萎黄,心胃痛。《浙扛天目山药植志》:“血虚面色萎黄”罗汉松属常绿乔木,叶螺旋状互生,条状披针形,两面中脉显著,雌雄异株。花期4～5月。种子广卵形或球形,8～9月成熟,初为深红色,后变为紫色,有白粉;其种子似头状,种托似袈裟,全形宛如披袈裟之罗汉,故而得名罗汉松。2.2花托的形状商品药材除叶外,有的还具带叶小枝。枝条粗2～5mm,表面淡黄色褐色,粗糙,具似三角形的叶基脱落痕。叶条状披针形,长7～12cm,宽4～7mm;先端短尖或钝,上面灰绿色至暗褐色,下面黄绿色至淡棕色。质脆,易折断。气微,味淡。种子椭圆形、类圆形或斜卵圆形,长8～11mm,直径7～9mm。外表灰白色或棕褐色,多数被白霜,具突起的网纹,基部着生于倒钟形的肉质花托上。质硬,不易破碎,折断面种皮厚,中心粉白色。气微,味淡。2.3轻微检测2.3.1维管束内木细胞组织组织(1)表皮:上表皮细胞一层,长方形,排列紧密,无气孔。下表皮细胞比上表皮细胞长,呈长方形,外壁被角质层。表面观气孔成行排列,与主脉平行。(2)叶肉:两面叶;栅栏组织通过主脉,由1～2列细胞组成,细胞多呈长方形。海绵组织2～6列细胞,近圆形,排列疏松;草酸钙方晶散在。(3)副转输组织:在维管束的两侧,横向伸长,5～7列细胞,与主脉维管束垂直,管胞壁上通常为伸长的单纹孔。(4)叶脉:只有一条明显的主脉,无侧脉,维管束外韧形,木质部由20～35列径向排列的管胞组成,每列细胞2～4个。在维管束的两侧各有一组转输组织,转输组织主要由转输管胞、蛋白质细胞及转输薄壁细胞3部分构成。韧皮部细胞呈径向排列,在维管束和转输组织的周围有一圈不明显的维管束鞘,由厚壁组织2～3列细胞排列于主脉两侧;下表皮与韧皮部之间有三个树脂道。(5)射线细胞径向排列整齐,每列12～15个,韧皮射线横切面积大于木射线。见图1。2.3.2气孔石细胞结构粉末浅绿色,气微,味淡;(1)管胞大部分呈梭形,具缘纹孔管胞、较细长的环纹管胞和螺纹管胞常相伴存在。(2)气孔直轴式,成行整齐排列,保卫细胞壁增厚。(3)表皮细胞为长方形,排列紧密,宽50～80μm。(4)纤维梭形,长达1300μm,宽30～50μm,边缘波浪状弯曲。(6)石细胞呈楔形或类长圆形,长120～160μm,宽约50～60μm。(7)草酸钙方晶大小不一。见图2。2.4物理鉴定2.4.1供试品溶液制备供试品溶液的制备:取本品粉末8g,加80%甲醇50mL,超声处理30分钟,加热回流1h,滤过,滤液用石油醚脱脂,蒸干,残渣加水16mL,微热使其溶解,将上述溶液加在D101大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm,柱高为15cm)上,用水300mL洗脱,弃去水液,再用20%乙醇100mL洗脱,弃去洗脱液,继用50%乙醇100mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液一。继用80%乙醇100mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液二。2.4.1.单一相环合物vib的合成取β-蜕皮甾酮对照品,加甲醇分别制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VIB)试验,吸取上述供试品溶液一和对照品溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶甲醇∶水∶甲酸(10∶4∶0.1∶0.05)为展开剂,展开,取出,晾干。喷以5%的香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图3。2.4.1.聚酰胺薄膜的表征取穗花杉双黄酮对照品,加甲醇分别制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VIB)试验,吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以氯仿∶甲醇∶甲酸(4∶2∶0.25)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,晾干,置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图4。3显微研究发现了样品的基本特征本课题对罗汉松科植物罗汉松进行系统的生药学研究。其中,显微鉴别发现,叶子横切面观为两面叶;在维管束的两侧,横向伸长有5～7列的副转输组织,与主脉维管束垂直。在维管束的两侧各有一组转输组织。其次,通过对其粉末的显微研究发现,管胞有具缘纹孔管胞、环纹管胞和螺纹管胞。气孔直轴式,成行整齐排列,保卫细胞壁增厚。纤维边缘波浪状弯曲。以上特征可作为鉴别罗汉松的重要依据。在大孔吸附树脂纯化样品的实验中,曾试以用20%,35%,50%,80%的一系列不同浓度的乙醇溶