中国海洋大学生命学院生化实验报告

中国海洋大学实验报告第一部分、蛋白质的颜色反应一、实验目的1、了解蛋白质的颜色反应，2、掌握通过相关的颜色反应初步判断蛋白质所含基团。二、实验原理蛋白质分子中某种或某些基团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。三、实验仪器1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、pH试纸6、水浴锅四、实验试剂1、卵清蛋白液2、0.5%苯酚3、Millon’s试剂4、尿素晶体5、1%CuSO46、10%NaOH7、浓硝酸8、0.1%茚三酮溶液9、冰醋酸10、浓硫酸五、实验步骤（一）

米伦（Millon’s）反应1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加Millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热观察颜色变化。2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加Millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。（二）

双缩脲反应1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。2、取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%CuSO4溶液，混匀，观察现象。（三）

黄色反应取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液1ml，观察颜色变化。（四）

茚三酮反应取蛋白液1ml于试管中，加10滴茚三酮溶液，加热至沸，观察现象。六、实验结果（一）1、溶液即出现玫瑰红色2、小心加热，凝固的蛋白质出现红色。（二）1、有紫色出现2、有紫色出现（三）有黄色物质生成，加入碱液后，液体变成橘黄色。（四）有蓝紫色出现。七、实验分析（一）米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物。他能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应。组成蛋白质的氨基酸中因酪氨酸含苯酚基团，因此蛋白质中含酪氨酸即发生颜色反应。（二）尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。（三）蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。（四）蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色，含有氨基的其他物质亦呈此反应。第二部分、蛋白质的沉淀反应一、实验目的1、了解蛋白质的沉淀反应2、加深对蛋白质性质的了解。二、实验原理 蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。三、实验仪器1、移液管2、吸管3、试管4、电炉四、实验试剂1、卵清蛋白液2、饱和硫酸铵溶液3、硫酸铵晶体4、95%乙醇5、醋酸铅溶液6、硫酸铜溶液7、氯化钠晶体8、10%三氯乙酸溶液9、饱和苦味酸溶液10、1%醋酸溶液五、实验步骤（一）蛋白质的盐析作用1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。（二）有机溶剂沉淀蛋白质试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。（三）重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜溶液，至有沉淀产生。2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。（四）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。六、实验结果（一）1、有球蛋白析出。2、沉淀溶解（二）有乳白色物质出现，静置后沉淀。（三）蛋白质聚集沉淀（四）蛋白质聚集沉淀，由于苦味酸为黄色，沉淀为黄色。七、实验分析（一）向蛋白质中加入大量的中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等），使蛋白质胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。于是稳定因素被破坏，蛋白质聚集沉淀。盐析作用一般不使蛋白质变性。（二）某些有机溶剂（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀。（三）重金属离子（如Pb2+、