多管发酵法测定水中大肠菌群 实验报告

多管发酵法测定水中大肠菌群摘要：初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内，37度下培养，24内小管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，为阳性如果，如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况，应该延长培养至48小时，若仍不的为阴性反应。平板分离实验中把初实验产期产酸的试管的菌接到伊红美兰琼脂平板上然后培养24小时。复发酵实验中将以上大肠杆菌阳性菌落，经涂色染色为革兰阴性无芽孢杆菌，通过次试验进一步证实原理：初发酵实验：发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一个杜氏小管。乳糖能其选着作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠杆菌能发酵乳糖而产气产酸。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为指示剂，细菌产酸后培养基由原来的紫色变为黄色。初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内，37度下培养，24内小管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，为阳性如果，如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况，应该延长培养至48小时，若仍不产气的为阴性结果。平板分离：伊红美兰琼脂培养基有伊红和美兰两种染料，在此作为指示剂，大肠杆菌发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料及结合，使培养基产生有金属光泽的深紫色菌落。复发酵实验：以上大肠杆菌阴性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢的，通过此试验进一步证实。原理与初发酵实验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠杆菌阴性结果。材料与用具：培养基乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置杜氏小管）三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有杜氏小管）伊红美兰琼脂平板2．无菌水3.用具载玻片灭菌带玻璃塞空瓶灭菌试管灭菌吸管方法：1水样的采取从不同水体（自来水、河水）中采集样品2自来水检查初发酵实验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10ml水样。混匀后，37度培养24小时，24小时候没产气的继续培养至48小时。平板分离经24小时培养后，将产气产酸及48小时产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美兰琼脂平板上，再与37度下培养18到24小时，将符合一下特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰染色，镜检。1深紫黑色、有金属光泽2紫黑色、不带或带金属光泽3但紫黑色、中心颜色较深复发酵实验进涂片、染色、镜检，如果为革兰阴性无芽孢杆菌，则挑去该菌落的另一部分，从新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1到3个，37度培养24小时，结果若产气又产酸，即证明有大肠杆菌存在。证实有大肠杆菌存在后，再根据初发酵实验的阳性管数查表1及可得大肠杆菌群数。3河水的检查将水稀释成1：10与1：100.分别吸取1ml1：10、1：100的稀释水样和1ml原水样，各入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另外取10ml和100ml原水样，分别注入装有5ml和50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管中。以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵实验。将100ml、10ml、1ml、0.1ml水样的发酵管结果查表2结果：自来水检查实验的结果为10ml水量的阳性管数为10支，100ml水量的阳性管数为2支，经查表可知每升自来水样中大肠菌群数为>230.河水检查实验结果为接种水样总量111.1ml试管中100ml、10ml、1ml、0.1ml的发酵情况为阳性，而接种水量为11.11试管中10ml、1ml、0.1ml的发酵情况为阳性，而0.01的发酵情况为阴性，查表可知每升河水的大肠菌群数为23800.结果讨论：1.水样的采集不具有代表性，可能会给实验结果带来误差。2.自来水检测试管实验中没有发酵烧瓶故用三角瓶代替，而加入杜氏小管后气不能直立，如果结果产气的话不能很好的判断，因而会给实验结果带来误差。3.在进行革兰氏染色时可能会引入其他的革兰氏阴性菌，使结果出现误差。4.河水检查试管中水样稀释不均匀，也会给实验结果带来误差。参考文献：全桂静，雷晓燕，李辉，微生物学实验指导，北京，化学工业出版社，2010.图15ml三倍浓缩乳糖蛋白图2培养24小时后河水的产气和图3培养24小时后自来胨发酵管培养前颜色颜色变化情况水的产气和颜色变化情况图4图5平板分离实验的伊红美兰培养基的长菌情况图6复发酵实验中普通浓度图724h培养后自来水的颜图824h培养后河水的颜乳糖蛋白胨发酵管培养前颜色色变