度人教版DNA的粗提取与鉴定（28张）

一、基础知识——提取DNA的方法

选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。主要指蛋白质（如、酶）和核酸等。则：提取DNA的基本思路

利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。（一）提取生物大分子的基本思路：1、DNA的溶解性①DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同：

（二）DNA分子的理化性质：一、基础知识——提取DNA的方法②DNA不溶于酒精溶液：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，已达到分离目的。（提取）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。【思考】利用这一原理，可以达到什么目的？除杂提纯2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性（二）DNA分子的理化性质：一、基础知识——提取DNA的方法①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响；②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性；③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响。3、DNA的鉴定（二）DNA分子的理化性质：一、基础知识——提取DNA的方法②甲基绿（绿色）★①DNA+二苯胺变蓝色沸水浴二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液（三）去除滤液中的杂质（四）DNA的析出与鉴定二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计（一）实验材料的选取

凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。【思考】①什么样的实验材料适合提取DNA？②你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。1、动物细胞讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，更加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜。2、植物细胞【讨论】加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。例如，提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液2、植物细胞【讨论】如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计【学生活动】

阅读教材提供的三种方法，分析其中的原理。（三）去除滤液中的杂质二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计方案一：【讨论】①此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质操作要点：反复溶解、析出【讨论】②为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

用高盐浓度的溶液使DNA溶解，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中能溶解的杂质。

因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。（三）去除滤液中的杂质二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计方案一：【讨论】方案二与方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三：利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。（三）去除滤液中的杂质二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计方案二：方案三：（四）DNA的析出与鉴定

DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％），静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水。1、DNA的析出二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计2、DNA的鉴定鉴定DNA时在两只试管中先加入质量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，其中一只加入DNA丝状物，各加入4mL二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色。（四）DNA的析出与鉴定二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计案例：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得;②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。三、实验案例案例：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取【讨论】提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液中的上清液？血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞。

DNA存在于鸡血细胞中，而上清液是血浆，含大量血浆蛋白。三、实验案例答：共“两次蒸馏水，两次析出，三次过滤”①两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第二次：稀释NaCl，使含DNA的黏稠物析出【讨论】

实验过程中有几次使用蒸馏水，几次析出，几次过滤？搅拌时要注意什么？案例：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取三、实验案例②三次过滤第一次：DNA存在于滤液里第二次：DNA被留在纱布上第三次：DNA存在于滤液里案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取【注】过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关。三、实验案例【讨论】

实验过程中有几次使用蒸馏水，几次析出，几次过滤？搅拌时要注意什么？案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取③两次析出第一次：用0.14mol／L的NaCl溶液（含杂质多）第二次：用冷却的95％的酒精④搅拌：均要朝一个方向、轻缓的搅拌，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNA。三、实验案例【讨论】

实验过程中有几次使用蒸馏水，几次析出，几次过滤？搅拌时要注意什么？【巩固训练】1.（单选）在DNA分子的粗提取实验中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是

A．稀释血液、冲洗样品

B．使血细胞吸水涨破，稀释NaCl使DNA析出

C．使血细胞吸水涨破，增大DNA溶解度

D．使血细胞吸水涨破，提取含杂质较少的DNAB【巩固训练】2．（单选）在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是:①DNA在氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时溶解度最低；②DNA在冷却的体积分数为95%的酒精中能沉淀析出：

A．两次都是①

B．两次都是②

C．第一次是①，第二次是②

D．第一次是②，第二次是①C【巩固训练】3．（多选）下列DNA粗提取的实验操作中，经过离心或过滤后，取上清液或滤液的有：

A．在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，混合均匀后离心

B．在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水，快速搅拌后过滤

C．在2mol/L的氯化钠溶液中放入丝状物，轻轻搅拌后过滤

D．在溶有DNA的氯化钠溶液