2011年中国脊髓灰质炎实验室网络监测数据分析

2011年中国脊髓灰质炎实验室网络监测数据分析

自2000年，包括中国在内的世界卫生组织（who）被证明为无脊椎动物（脊柱灰），中国进入无脊椎动物灰的维护阶段。中国疾病预防控制中心(CenterforDiseaseControlandPrevention,CDC)病毒病预防控制所国家脊灰实验室(NationalPolioLaboratory,NPL),也是WHOWPR的脊灰参比实验室,主要承担中国的省(自治区、直辖市,下同)级CDC脊灰实验室(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同)送检的从急性弛缓性麻痹(AcuteFlaccidParalysis,AFP)病例及其接触者、流动人口、健康人群和外环境等分离到的脊灰病毒(Poliovirus,PV)的型内鉴定(IntratypiciDentification,ITD)和基因特征分析,及时发现可能出现的疫苗衍生(Vaccine-derived)PV(VDPV)或输入性野生型(Wild)PV(WPV);同时对省级CDC脊灰实验室进行质量控制(质控),并协助WHO对省级CDC脊灰实验室开展盲样考核和现场认证。现就中国2011年脊灰实验室网络(PolioLaboratoryNetwork,PLN)运转指标,以及实验室快速鉴定和应对新疆维吾尔自治区(新疆)输入性WPV疫情的情况报告如下。材料和方法1来自来源2分析结果1省级cdc脊柱灰实验室app病例监测1.1粪便样本来自app1.2型,pv+nvi从6089例AFP病例的粪便标本中,分离到PV的207例,分离率为3.4%;其中Ⅰ型63例,Ⅱ型50例,Ⅲ型54例,混合型28例,PV+NPEV12例。分离到NPEV的782例,分离率为12.8%。1.3血液清学评价的结果是匹配率1.4pv监测的实施2关于非营利非政府组织的itd结果2.1相对于pv服装外壳capsidprote，vp1编码区域的磷酸序列的测定和分析2.2病毒对抗中的药物2.3病毒、疾病监测3病毒输入来源2011年8月25日,NPL确认,新疆CDC脊灰实验室送检的4株PVⅠ阳性分离物(分离于和田地区4例AFP病例)的VP1编码区核苷酸,与疫苗株(Sabin1株)PV相比差异在189~193个,差异率为20.9%~21.3%,4个毒株之间的同源性高达99.2%~99.6%,鉴定为境外输入WPVⅠ引起的和田地区局部爆发。此WPVⅠ既往未在国内流行过。通过与WHO总部、WPRO、美国CDC和巴基斯坦等全球PLN快速沟通和合作,在3h内阐明病毒输入来源,证实中国新疆输入的WPVⅠ与巴基斯坦2010年流行的WPVⅠ的VP1编码区核苷酸同源性高达99%,WHO判定此次新疆WPVⅠ由巴基斯坦输入。NPL迅速启动应急机制,对新疆各设区的市(地区,州,下同)送检的疑似AFP病例、接触者和流动儿童的粪便标本,直接采用逆转录-聚合酶链反应(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,RT-PCR)结合序列测定和分析的方法,开展了PV检测;同时迅速开展新疆环境WPV的检测,共检出53例为WPVⅠ,其中21例来源于WPVⅠ病例,14例来源于接触者,16例来源于健康人群。2份环境污水来源于和田地区环境标本。4中国pln的质量控制4.1pv核苷酸测定和分析能力验证2011年9月,NPL参加了WHO组织的RealtimeRT-PCRITD和VDPV筛查的能力验证;2011年9月,NPL参加了WHO组织的PV核苷酸序列测定和分析能力验证。两项能力验证所使用的盲样标本是由WHO全球脊灰专项参比实验室———美国CDC的脊灰实验室制备的。NPL均以100分的成绩顺利通过。2011年11月2~3日,WHO专家对NPL进行了2011年度的现场认证。NPL作为WHOWPR参比实验室,按照WHO的关于地区参比实验室的标准进行认证,顺利通过了WHO的现场认证,继续拥有担任2012年度WHOWPR脊灰参比实验室的资格。4.2现场认证考核2011年11月6~11日,对13个省级CDC脊灰实验室(天津、山西、吉林、上海、江西、山东、贵州、云南、西藏、陕西、甘肃、青海和新疆)进行现场认证考核。从实验室空间布局、工作人员工作情况、实验室管理、细胞培养技术、粪便标本处理技术、病毒分离技术、病毒鉴定技术、生物安全与PV的保存、仪器设备、耗材供应、与扩大免疫规划(ExpandedProgramonImmunization,EPI)工作人员的合作、实验室数据库等12个方面进行了严格的认证考核,被考核省全部通过认证。环境健康监测2000年,我国实现无脊灰后,全国性补充免疫活动(SupplementaryImmunizationActivities,SIA)逐年减少,AFP病例中疫苗株PV的分离率也逐年下降。然而,2011年由于新疆输入WPVⅠ引起局部传播,新疆和部分省开展了口服脊灰减毒活疫苗(OralPoliomyelitisAttenuatedLiveVaccine,OPV)SIA,导致2011年PV分离率高于前几年。然而,近10年NPEV的分离率保持在>10%相对稳定水平上［2-4］。NPEV分离率是衡量粪便标本质量、病毒分离敏感性的一个重要的指标,间接反映了一个实验室运转的质量,间接提示中国PLN保持着较高的运转水平。2011年,中国PLN接受WHO的盲样标本能力验证,NPL及31个省级CDC脊灰实验室均以满分的成绩通过了病毒分离和鉴定的盲样考核。NPL还接受并通过了WHO的Real-timeRT-PCRITD盲样考核,PV核苷酸序列测定和分析的盲样考核,证明了中国PLN在WHO的水准要求下高水平地运转。PV通常会持续几周随着感染者的粪便排出体外,因此从污水或者其他废水中检测到WPV或VDPVs,可以用来评估PV在环境中的循环,以及估计环境人口中感染者的数量,因而可以将PV环境监测结果作为某一特定人口地区无脊灰循环的指标,并为最终消灭脊灰计划提供依据［5-7］。环境监测作为AFP病例病毒学监测的补充,WHO建议在那些AFP病例监测质量较差的地区或高风险地区,应开展环境中PV监测。截至2011年,NPL借鉴国内外经验,已经建立了一套成熟的环境样品采集、病毒浓缩以及病毒分离的技术。以环境监测结果作为评估特定地区健康人群PV和NPEV感染或流行的指标,建立了人群中PV和NPEV发生和循环的预测预警方法,并推广到山东、广东、上海、新疆、云南和广西等省［8-9］。2010年,印度WPV输入塔吉克斯坦,并引起持续6个月的流行,并发生10次传播到其他地区和国家的事件［10-12］。NPL在2010年针对塔吉克斯坦的WPV流行,迅速建立了快速RT-PCR结合序列测定从粪便标本中直接鉴定WPV、VDPVs和VHPV及疫苗株PV,将从粪便标本鉴定WPV的时间从35d缩短到1~3d。该方法为快速阐明2011年新疆WPV的地区分布、年龄分布和省分布起到了坚实的技术支撑作用。2011年,NPL及时鉴定了初始4例WPVⅠ病例,并通过WHO协调全球PLN,在3h内阐明了病毒由巴基斯坦输入,证实了NPL和全球PLN的高度合作和高效率。在卫生部领导下,NPL依靠快速RT-PCR法迅速阐明了WPV病例的地理区域分布、年龄分布。为卫生部制订在新疆不同地区、不同年龄组的SIA策略和剂次提供了重要的科学依据。在卫生部的领导下和中国CDC的技术指导下,在新疆CDC和各省CDC大力支援下,通过5轮SIA,中国在创纪录的3个月(首例WPV病例发病为2011年7月3日,最后1例WPV病例发病时间为2011年10月9日)阻断了输入性WPV的传播,疫情未扩散到其他省或国家。2012年10月9日,WHO宣布中国重新恢复无脊灰状态。PLN在新疆输入WPVⅠ的发现和应对中发挥了至关重要的作用。虽然这次输入性WPV的传播已被阻断,但风险犹存。巴基斯坦、阿富汗和尼日利亚还有本土WPV流行,只要全球还未消灭脊灰,我国就存在再次发生WPV输入的风险,若存在免疫空白就会发生局部传播或爆发的可能。为此,必须继续保持高质量的常规免疫,高质量的AFP病例流行病监测和病毒学监测,保障PLN有效和高质量的运转。中国PLN在维持无脊灰状态和全球消灭脊灰的进程中,需要持续发挥重要角色。目前,中国PLN使用的方法和AFP病例监测系统能够及早的发现VDPVs和WPV,只有实验室的早期发现和预警,才能保证对VDPVs和WPV做出快速应对,早期阻断其传播。中国免疫规划监测信息管理系统数据库中,31个省上报的AFP病例个案调查表和NPL的病毒学监测数据库。所有检测结果均采用微软电子表格(MicrosoftExcel)2003和微软数据库管理系统(MicrosoftAccess)2003等软件对资料进行统计分析。2011年,全国共报告AFP病例6205例,其中6145例采集了粪便标本,占99.03%(6108例采集了双份粪便标本,占98.44%;合格粪便标本采集率为90.9%;37例采集了单份粪便标本,占0.59%),其余60例未采集粪便标本,占0.97%。全国PLN共收到6205例AFP病例的12253份粪便标本,省级CDC脊灰实验室按照WHO第4版《脊灰实验室手册》的要求进行了病毒分离和鉴定。2011年,省级CDC脊灰实验室送检的PV毒株血清学鉴定结果与NPL结果的符合率为100%。2011年,广西、上海、广东、云南、山东省CDC脊灰实验室开展了PV的环境监测,共分离到323株PV。其中在广西分离到2株Ⅲ型疫苗高变异(Vaccine-hypervariable)PV(VHPV),在广东分离到1株Ⅲ型VHPV,在新疆分离到2株Ⅰ型(Type1)WPV(WPVⅠ)(表1)。NPL对594株单血清型PV进行了VP1编码区核苷酸序列测定与分析(表2)。与赛宾(Sabin)疫苗株PV相比,VP1编码区核苷酸变异≤5个的477株,占80.3%;变异6~9个的30株,占5.1%;变异≥9个的87株,占14.6%。根据PV的VP1编码区核苷酸序列分析结果,2011年NPL在7个省鉴定出9例VDPVs,分别为Ⅰ型1例1株,Ⅱ型7例13株,Ⅲ型1例12株。1株Ⅰ型分离于1例山东省AFP患者,为来源不明(Ambiguous)VDPV(aVDPV);7例13株Ⅱ型分别来源于福建省和浙江省AFP病例各1例接触者的共5株aVDPVs,贵州省1例AFP病例的2株免疫缺陷(Immunodeficiency)VDPVs(iVDPVs),贵州省1例流动儿童的1株aVDPVs,四川省2例AFP病例的3株VDPVs,甘肃省1例AFP病例的2株VDPVs;Ⅲ型来源于宁夏回族自治区1例AFP病例的12株iVDPV(表3)。根据PV的VP1编码区核苷酸序列分析结果,2011年鉴定出Ⅰ型VHPV共9株,核苷酸变异6~8个,其中山东省3株,上海市1株,湖北省1株,甘肃省2株,西藏自治区2株;8株Ⅱ型VHPV,核苷酸变异均为5个,其中浙江省1株,广西壮族自治区1株,四川省2株,北京市1株,广东省1株,云南省2株;11株Ⅲ型VHPV,核苷酸变异为6~8个,其中山东省5株,安徽省1株,西藏自治区1株,上海市1株,贵州省2株,广东省1株(表4)。2011年6月,NPL参加了WHO关于病毒分离和鉴定能力的验证项目,所使用的一组5份盲样标本是