实验室病原微生物危害评估报告

实验室病原微生物危害评定报告第1版生效日期：08月02日XX市疾病防止控制中心综合实验室目录第一章综合实验室实验活动生物危害评定报告 1第二章结核分枝杆菌的生物危害评定报告 7第三章金黄色葡萄球菌的生物危害评定报告 12第四章副溶血性弧菌的生物危害评定报告 15第五章致泻大肠埃希菌的生物危害评定报告 17第六章伤寒沙门氏菌的生物危害评定报告 19第七章志贺氏菌的生物危害评定报告 22第八章蜡样芽胞杆菌的生物危害评定报告 24第九章单核增生李斯特菌的危害评定报告 28第十章流感病毒的危害评定报告 31第十一章禽流感病毒的危害评定报告 33第十二章肠道病毒71型的危害评定报告 36第十三章麻疹病毒的生物危害评定报告 39第十四章人类免疫缺点病毒HIV的生物危害评定报告 41第十五章乙型脑炎病毒的生物危害评定报告 43第一章综合实验室实验活动生物危害评定报告9一、危害程度分类及生物安全防护水平评定生物源危害重要是由多个检查标本中的微生物，特别是病原微生物引发的，涉及细菌、病毒、寄生虫等，含有潜在危险性，可能引发实验室感染；微生物室还进行一定数量的多个条件致病性细菌及真菌的分离培养工作，工作过程存在病原微生物对实验人员、环境污染的风险；除之以外实验室还存在触电、火灾、化学品腐蚀、偷盗等危险。根据《实验室生物安全通用规定》，本实验室不涉及《人间传染的病原微生物名录》中高致病性微生物的分离培养及高致病性微生物的菌、毒种的保藏，实验室采用一定防护方法就能控制感染或防备灾害，或者对对应病原体存在有效的免疫办法。评定我实验室生物安全防护水平按二级实验室（BSL-2）生物安全规定。二、实验人员和实验室安全防护的普通规定1.吸烟危害评定及防护（1）实验室工作区内绝对严禁吸烟；（2）点燃的香烟是易燃液体的潜在火种；（3）香烟、雪茄或烟斗都是传染细菌和接触毒物的途径。2.实验区内食用食物、饮料及其它危害评定及防护（1）实验工作区内不得有食物、饮料及存在“手－口”接触可能的其它物质（2）实验室工作区内的冰箱严禁寄存食物。专用寄存食物的冰箱应放置在允许进食、喝水的休息区内。3.使用化妆品危害评定及防护实验工作区内严禁使用化妆品进行化妆，但允许并建议经常洗手的实验人员使用护手霜。4.实验中眼睛和面部的风险评定及防护（1）解决腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜、面罩或其它保护眼睛和面部的防护用品。（2）工作人员在实验室的危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。（3）使用、解决能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的状况时，必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。5.实验中服装和个人防护装备的普通规定（1）应穿着符合实验室工作需要的服装，工作服应干净、整洁。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。（2）采血员和其它需要接触病员的工作人员，在接触病员时需穿实验服或工作服。（3）个人防护服装应定时更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立刻更换。（4）不得在实验室内设值班床，严禁在实验室内住宿。6.实验中足部防护的普通规定在工作区内，应穿舒适、防滑、并能保护整个脚面的鞋。在有可能发生液体溅溢的工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸取化学物品和有传染性的液体，因此最佳穿皮革或其它防渗漏的合成材料的鞋。7.实验中头发和饰物的风险评定及防护留长发的工作人员应将头发盘在脑后，以避免头发接触到被污染物和避免人体脱屑落入工作区。头发不得垂肩，应与离心机、切片机等正在运转的器械保持一定距离8.实验中胡须的风险评定及防护蓄有胡须的男性工作人员必须恪守上项（7）的规定。9.洗手的规定实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触患者前后、以及在进食或吸烟前都应当洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立刻洗手。10.用口移液的危害评定及防护用口液移可造成多个病原体的实验室感染。全部实验室操作严禁用口液移，应使用助吸器具。11.锐利物品的危害评定及防护谨慎解决针头、解剖刀、和碎玻璃等锐利物品。使用后的针具不要折断、弯曲、破损、重复使用或用手重装在针管上。一次性注射器上的针头用后不要取下。锐利物品应立刻放置在专用锐器盒内，在完全装满之前或48小时之内更换。12.隔离方法的规定接触患者时，实验室工作人员应恪守医院的隔离方法。13.工作环境的规定（1）“清洁”区和“非清洁”区根据实验室的具体工作状况由主任选择并拟定“清洁”和“非清洁”工作区，在清洁区和非清洁区之间设“缓冲室”。被指定为“清洁”的区域，则应努力保持清洁，如采用防止方法，避免电话、视频显示屏终端、键盘、门柄及其它经常被手或手上的手套触摸的物品的污染，规定工作人员在触摸设备（如计算机键盘及电话的保护罩等）前取下手套，制订仪器设备和工作面的常规消毒和清洁制度和对严重污染的紧急解决方法方法。被指定为“非清洁”的区域，允许戴手套接触全部物品（如电话、门柄、计算机终端和其它物品），全部这些物品的表面都认为是不清洁的。未戴手套的人员如果使用该区域内的电话、计算机终端或其它设备，应当戴上手套，或在使用后立刻彻底洗手。“清洁”和“非清洁”区都应保持整洁。实验台最少应每天清洁、消毒一次，如有必要能够多次清洗、消毒。在解决溅溢的样品或严重污染的工作面时，应戴上手套和其它个人防护装备、使用对应适宜的清洁剂去除全部的溅溢物。（2）冰箱、冷冻柜、水浴和离心机应当定时清洗和消毒（时间由实验室主任来决定），在发生严重污染后应立刻进行清洗和消毒。进行清洗、消毒时要戴上手套，穿上工作服或其它适宜的防护服。（3）外衣：外衣（实验服、工作服、和围裙）应悬挂在远离散热器、蒸汽管道、供暖装置、以及有明火的地方，不要挂在压缩气瓶或灭火器上，也不要挂在门的玻璃隔板上，妨碍视线。“清洁”的和“非清洁”的个人防护服要分开寄存。（4）垃圾解决：每天最少清理垃圾一次。（5）装饰：不得在电灯、灯座或仪器上进行装饰，更不要使用电子装饰物、蜡烛、圣诞树等有引发火灾危险的装饰品。（6）为便于清洁消毒，实验室内不应有织物装饰的用品或椅子。（7）个人物品：实验工作区不得寄存个人物品，如钱包、外套、皮靴、咖啡杯、运动服、预包装的食品和药品等。（8）实验室内应配备应急设备，如应急洗眼装置，酒精等消毒用品。（9）实验室应安装非手触式洗手装置。（10）实验室内应安装防蚊蝇装置，应定时投撒灭蟑螂、老鼠的药品。（11）用后的废弃物品：实验工作区内的用后废弃物品存量不要太大。具危险性的液体如酸或碱性液体应放在视平线下列。较大的废弃物容器应靠近地面寄存。（12）出口通路：实验室的出口和通道必须保持畅通无阻，不准堆放物品、垃圾、装置、或设备。安全门必须保持畅通，不得堵塞。注意：无论任何时间、何种因素都不得阻塞通往灭火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.使用玻璃器具的危害评定及防护操作玻璃器具时应遵照下述安全规则：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃试管上的塞子，粘紧的试管可用刀切开分离。（3）接触过传染性物的玻璃器具，清洗之前，应先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片应丢弃在有专门标记的、单独的、不易刺破的容器里。（5）高热操作玻璃器具时应戴隔热手套。（6）在不影响实验质量的前提下，应尽量减少使用玻璃器具。15.使用离心机的危害评定及防护感染途径危害评定感染途径危害评定感染途径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少（1）气溶胶：离心过程中应控制气溶胶的产生在最低水平。（2）操作：离心机只有在盖好盖板后，才干启动。（3）传染性物品：全部能够产愤怒溶胶进行播散的生物制品或标本，都应使用密封的离心管，并在盖紧的离心头或转头中进行。（4）为避免气溶胶飞溢，应在离心停止30分钟后打开离心物。（5）清洗：按照消毒隔离制度规定清洗离心机。（6）平衡：离心时应保持适宜的平衡，以确保离心的顺利进行。16．采集血样的危害评定及防护感染途径危害评定感染途径危害评定感染途径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）极少呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少盗窃可能化学腐蚀极少放射无（1）每天上午用500mg/L的”84”消毒液擦拭抽血台面及其它物表，并开紫外灯消毒最少30分钟，并做好统计。（2）工人每天上午更换消毒液，涉及浸泡锐器、止血带的消毒液和手消毒液。（3）工作人员必须穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。严禁使用包装破损，超出使用期的一次性用品。（5）严格执行无菌技术操作规程、静脉采血必须一人一针一管一巾一带。微量采血应做到一人一针一管一片，对每位病人操作前洗手或手消毒。（6）无菌物品如棉球需每天更换，启动后使用不得超出24小时。（7）工作人员需对锐器如采血针采用高度防止方法，用过的采血针需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。17.标本(血清、血浆、全血、尿)上检查分析仪检测过程的危害评定及防护感染途径危害评定感染途径危害评定感染途径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少盗窃可能化学腐蚀无放射无（1）为了避免液滴和气溶胶和扩散，实验室仪器加样、加液，清洗等过程应在封闭罩内进行的。（2）实验中使后的比色盘，反映杯等废弃物应当收集在封闭的容器内，集中处置。（3）在每一步完毕后应根据操作指南对对仪器进行消毒。血液、体液污染物表时，应立刻消毒。（4）工作人员要戴手套进行操作。18.标本(血清、血浆、全血、尿、粪)手工检测过程的危害评定及防护感染途径危害评定感染途径危害评定感染途径危害评定皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少盗窃可能化学腐蚀可能放射无（1）每天上午做好实验室的清洁消毒工作。（2）工作人员要戴口罩、手套进行操作。（3）实验中使用的竹签用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）废弃的标本连同试管、盖帽要用1000mg/L“84”消毒液浸泡，由工人统一清洁后进行无害化解决。（5）实验中使用的吸头、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）标本污染物表时，应立刻消毒。（7）离心时，发生试管破裂或标本溅出，由操作者负责用有效消毒剂对离心机内部进行及时消毒处置。19．微生物分离鉴定药敏实验及基因扩增实验活动的危害评定及防护感染途径危害评定感染途径危害评定感染途径危害评定皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）可能盗窃可能化学腐蚀极少放射无（1）每天上午开紫外灯消毒空气最少30分钟，同时做好各物表、仪器的清洁消毒工作。（2）实验人员要戴手套、帽子进行操作。当预计会出现微生物和危险物溅出时要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用的接种环、镊子等金属物品要在酒精灯火焰上烧灼灭菌。（4）可能产生致病性微生物气溶胶或出现溅出的操作如涂片、接种时，应在生物安全柜内操作，并使用个体防护设备。（5）实验室内的多个标本、菌种、培养基和其它废弃物在运出实验室前必须灭活（高压、浸泡），需运出实验室灭活的物品必须放在专用的密闭容器中。（6）操作过程中发生菌种污染物表时，应立刻采用方法进行物表消毒。（7）当发生致病性微生物气溶胶污染时，应立刻进行人员疏散，告知负责人到现场进行指导消毒。（8）对菌种的保存应严格恪守菌种保存制度，严禁私自保存多个国家法定传染病菌株或毒株。（9）实验人员离开实验室前要去除手套，确认无污染或污染已排除，后方可洗手拜别。（10）微生物、PCR实验室要设立纱窗、挡鼠板。三、特定实验活动危害评定见下列章节之多个病原体的危害评定四、工作人员素质本实验室共有技术人员10名，其中申请进入BSL-2实验室10名。硕士学位3名，5名曾经从事微生物学实验，5名曾经从事无菌实验室活动经历，10名技术人员学习过生物安全手册并通过定时培训及考核成绩合格，经体检无现患严重疾病，本实验室无其它患传染性疾病的技术人员，健康状态良好。五、评定结论本次评定本实验室共14项可能潜在危险的实验活动，在实验操作实验施过程中在无控制方法状况下可能产生的高危害度2项，中度12项，低度0项；对危害发生的可能性分析，实验危害较大可能发生的有0项，可能发生2项，较少可能发生12项；这些危害造成高度严重后果的2项，后果严重性中度的12项，后果严重性低度的0项。根据拟采用的防止控制方法后仍然存在的残留风险为高度0项，中度0项，低度危害12项。评估：XX市疾病防止控制中心综合实验室评定人：审核：XX市疾病防止控制中心生物安全管理委员会审核人：8月02日第二章结核分枝杆菌的生物危害评定报告结核病是由结核分枝杆菌（偶然可由牛型或非洲型分枝杆菌）引发的一种细菌性疾病。结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。该病含有传染性强，散播面广，不分地区均可发生。结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等途径感染，但其重要传输途径是以空气为传输因子的呼吸道传染，而排菌的肺结核病人传染性更大，是传输感染的重要传染源。1.传输途径呼吸道感染（respiratortractinfection）是肺结核的重要传染途径（routesofinfection），飞沬传染（dropletinfection）为最常见的方式。传染源重要是排菌的肺结核患者（特别是痰涂片阳性未经治疗者）。飞沬核（dropletnuclei）＜10μm时可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打喷嚏时喷出的带菌飞沫而受感染。2.危害程度分级微生物按其与否致病、致病力强弱、危害人体的严重性、传染性的大小、临近人群的抵抗力、有无免疫制剂和特效治疗药品等综合评价，可分为四个不同的危害等级。结核分枝杆菌属于3级危险。3级危险（对个体含有极大危害，对群体含有较大的危害性）：指有特殊危险的致病菌。感染后症状较重，并可能危及生命，或者缺少有效的防止办法、发病后不易治疗的微生物。3.实验室感染的因素及防止（一）技术操作可能造成的感染及其防止方法。1.接种：应使用无弹力的铂丝接种环，结核菌接种后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要特别注意。2.混匀：吸管吸吹菌液时不要产愤怒泡，应沿容器壁排出。3.研磨：最佳使用组织研磨器，乳钵易产愤怒溶胶。4.移液：吸管上端的棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸取，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产愤怒泡，形成气溶胶。5.开封：要避免压力和气流的急剧变化。6.离心：离心管套底垫要完好，使用匹配的管、套、离心头，加盖。7.注射：做好个人防护，对的使用注射器。8.搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭的外包装。（二）技术保障1.双人原则，不允许单人操作1、2类病原。2.入口处应有危险警示标记，并标明所操作的微生物的种类。3.培训考核上岗，掌握有关技术操作要领，熟悉规章制度，适应工作环境。4.完备的管理方法，技术操作规范。5.良好的工作行为可减少生物危害风险。4.实验室中的分枝杆菌及分枝杆菌气溶胶结核病实验室工作人员，在分枝杆菌检查过程中，会接触到多个潜在感染源标本和多个危险物，特别是许多操作易产生分枝杆菌气溶胶。含有结核分枝杆菌的微滴核（1-5微米）通过呼吸进入人体肺泡，能够黏附在肺泡内生长繁殖。因此，首先要对实验室中生物危险物产生的途径和存在的地点有充足的认识，方便明确生物安全防护的环节。(一)分枝杆菌存在的地点1、多个临床标本，普通是痰，胃或支气管灌洗液、脑脊液、尿液等。2、被污染的操作台、器械、仪器、试剂等。3、收集的结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌菌株等。4、细菌学实验室的部分区域。(二)产生分枝杆菌气溶胶1、实验室内可疑肺结核患者痰标本的采集。2、样本的制备和涂片的火焰固定。3、分离培养或接种培养物。4、用火焰烧灼接种环。5、使用移液器混合培养物。6、培养管或培养瓶中含有培养物的滴落物。7、溢出的分枝杆菌悬浮液。8、高速混合含有分枝杆菌的液体。9、转移液态培养物和上清液，或培养液、上清液的倾倒。10、离心过程中离心管的破碎。11、用做原代培养所需的组织匀浆。5.安全防护(一)严格恪守实验室安全操作规程，任何时侯都要警惕分枝杆菌气溶胶的产生。实验室的技术人员必须通过生物安全培训后方可上岗。(二)实验室应严格限制非实验人员进入，减少实验室内外交叉生物污染。完毕实验工作离开实验室，要关好门窗。(三)进入实验室应避免携带非必需物品。(四)进入实验室，工作人员应穿着工作服，操作时应穿戴防护隔离衣、口罩、帽子和手套，长发者应将头发装束在帽子内。(五)实验过程中绝对严禁吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。(六)实验前须启动紫外线灯对实验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；实验结束后，立刻启动紫外灯进行照射消毒2小时以上。(七)任何实验的开始和结束后，操作人员要用70%酒精浸泡双手或认真擦后，用清洁剂或清水洗净。(八)每次实验结束后，必须清理好实验台，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗实验台面。(九)实验室中的生物危险品要根据检查项目和性质不同，局限在对应的实验区间，不得随意将其带到其它的实验室。(十)实验室内任何微生物的样本，废弃物都必须经高温高压灭菌后，方可按普通垃圾解决。6.安全保障(一)首先各级实验室应按等级规定完善实验设施，如简易安全柜内的抽气排风功效、紫外灯消毒功效，生物安全柜维护与除菌滤膜定时更换等。(二)实验室采集病人痰标本时应在户外进行，避免因病人咳漱造成室内气溶胶污染。(三)普通实验室应注意气流方向，实验过程中尽量避免强气流变化而产愤怒溶胶（如﹕涂片、染色过程中）。(四)细菌的分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，各级实验室均应在简易安全柜或生物安全柜中进行。(五)使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯的内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。(六)稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产愤怒泡或气溶胶。(七)使用注射器加样时，用过的针头切勿再重新入套或拔开注射器与针头，应直接放入锐器收集器，以免划破皮肤造成接种感染。(八)菌株库要设专人管理，并按照国家微生物菌毒种管理方法执行。(九)进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染的防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免由于粗心扩大污染范畴。(十)实验结束后，操作过程中全部可能与生物危险物接触或被污染的实验器械和物品，能够高压消毒的必须高压消毒，不能进行高压消毒的设备、仪器，应使用有效的消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。(十一)实验中发生意外污染状况，应立刻告知主管人员并做好解决污染物和对应区域的准备，不得私自采用其它严禁的办法进行消毒解决。(十二)实验室主任应制订规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊规定(如，通过免疫接种)的人，才干进入实验室。(十三)操作致病性微生物时，实验室入口处应贴有生物危险标志，并显示下列信息：有关病原、生物安全级别、免疫接种规定、研究人员姓名、电话号码、在实验室中必须佩带的个人防护设施、出实验室所规定的程序。(十四)实验室主任为实验室人员特别制订的原则操作程序或生物安全手册中，应涉及生物安全程序。对于有特殊风险的人员，规定阅读并在工作及程序上遵照执行。(十五)实验室主任确保明验及其辅助人员接受适宜的培训，涉及和工作有关的可能存在的风险、避免暴露的必要方法和暴露评定程序。(十六)实验室所用任何个人防护装备应符合国家有关原则的规定。实验室应确保含有足够的有适宜防护水平的清洁防护服供使用。还应穿戴其它的个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。(十七)解决样本的过程中易产生高危害气溶胶时，规定同时使用适宜的个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子的气溶胶，应在适宜的生物安全柜中操作。(十八)实验用鞋应舒适，鞋底防滑。应用皮制或合成材料的不渗液体的鞋类。在从事可能出现漏出的工作时可穿一次性防水鞋套。在实验室的特殊区域（例如有防静电规定的区域）或BSL-3和BSL-4实验室规定使用专用鞋（例如一次性或橡胶靴子）。7.结核病实验室废物解决一、实验室废弃物解决的目的：(一)将操作、收集、运输、解决及处置废弃物的危险减至最小；(二)将实验室废弃物对环境的有害作用减至最小。二、实验室污物解决及消毒(一)实验室含有生物危险物的临床标本及被污染的一次性用品，实验完毕后，应在操作台或实验区域内以紫外灯近距离照射消毒2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。(二)可重复使用的实验用品及器材，完毕实验后，应在操作台或实验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上后，再交有关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。(三)实验用的试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏的容器内，经高压灭菌后取出。(四)培养物或实验室垃圾，在丢弃前必须经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射解决。不允许积存垃圾和实验室废弃物。已装满的容器应定时运走。在去污染或最后处置之前，应寄存在指定的安全地方，普通在实验室区内。(五)实验室废弃物应置于适宜的密封且防漏容器中安全运出实验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经适宜的无害化解决后排放，应符合国家有关的规定。(六)实验过程中，如标本或含标本的前消化解决液被打翻污染了操作台或地面，应以吸满70%酒精的卫生纸覆盖污染区，15分钟后来卫生纸方可移去。(七)实验室内未经消毒的污水，严禁直接排入公共排水系统，更不允许混入居民生活垃圾。8.意外事故的解决(一)如果发生意外，必须立刻告知实验室主管人员，并在有关人员的指导监督下对出事现场进行解决，绝对严禁未经报告而私自对出事现场予以非规范的解决。(二)实验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等状况发生，应立刻停止实验工作进行紧急解决，更换被污染的实验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。(三)如果发生菌液溢出，含菌种的培养管破碎等，造成中、小面积污染，可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域，边沿用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液避免干燥），再经紫外灯近距离（1米内）照射2小时以上；被污染的器械、容器等立刻浸泡于70%酒精中2小时以上，实验完毕后再进行高压消毒解决。(四)如果发愤怒溶胶污染或大面积污染，应立刻停止实验并关闭实验室，对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区进行24小时封闭空气熏蒸消毒（乙醛消毒法﹕5ml乙醛＋2g高锰酸钾/m3空间）。(五)绝对严禁使用的事故解决办法﹕1.任何有可能造成污染面积扩大的去污办法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的区域。2.直接用火焰对未经任何解决的污染地面、操作台、器械等进行烧灼解决。3.使用消毒效果未经证明的消毒剂进行消毒。4.使用低浓度的消毒剂和紫外灯进行短时间、长距离的照射。第三章金黄色葡萄球菌的生物危害评定报告1.生物学特性金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，从属于葡萄球菌属，可引发多个严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养规定不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周边形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反映阳性，VP反映弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。2.危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制订《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。3.致病性和感染剂量金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱重要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道现在出现越来越多的耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强。4.暴露的潜在后果暴露后可能引发感染，菌量大时可使实验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周边及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。5.感染途径通过污染食品和水源经口传输，也可通过呼吸道和接触传输。6.微生物在环境中的稳定性葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热80℃30min才被杀死。5％石炭酸，0.1％升汞10～15min死亡。1:100000～1:00龙胆紫溶液能克制其生长。对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，MRSA即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。7.浓度和浓缩标本的容量普通样本检测。8.自然和易动人群宿主金黄色葡萄球菌常存在于鼻咽喉、下消化道、毛发和皮肤上，在人类和普通的动物都有存在。致病性根据宿主状状，卫生状况，皮肤和黏膜有否创伤而异。当宿主免疫力下降，皮肤黏膜有创伤或卫生状况不好是易感染，特别是老人和婴儿。9.实验操作活动巳有文献证明，金黄色葡萄球菌可造成实验人员化脓性和呼吸道感染，人类不是该菌在唯一传染源，在许多动物身上都存在该菌。这种病原体能够存在于受感染的人或动物的脓液，血液等多个体液中。通过污染食品和水源经口传输，和通过呼吸道和接触传输是该菌的重要传输方式，该菌也是引发院内感染的重要细菌之一。暴露在气溶胶中也可能引发感染。按照国标办法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，鉴定。建议采用BSL-2级水平的操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，按照本实验室的《意外事故应对方案和应急程序》进行解决。10.防止和治疗金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。现在疫苗还不可用于人类。该菌能对人体多部位的感染，因此跟据所致疾病的不同也应采用不同的治疗方案，重要是对症解决和针对病原治疗，大致用药可选用红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。防止金黄色葡萄球菌感染，首先是要做好个人卫生，和加强餐饮和食品卫生的管理，及时发现带菌者，做好多个动物的管理工作，把能传输该菌的途径有效的控制好。11.工作人员素质卫生技术专业人员，并通过生物安全培训后获得上岗证书。12.评定结论该菌生物性状较稳定，但抗生素有滥用，也出现了不少的耐药株。该菌主通过污染食品和水源经口传输，也可通过呼吸道和接触传输，可引发局部化脓感染，也可引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。防止手段重要防止金黄色葡萄球菌感染，首先是要做好个人卫生，和加强餐饮和食品卫生的管理，及时发现带菌者，做好多个动物的管理工作，把能传输该菌的途径有效的控制好。实验过程建仪采用BSL-2级水平的操作技术、防扩散设备和设施。实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时，防护服必须脱下并留在实验室内。不得穿着外出，更不能携带回家。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。操作台面用70%酒精或含氯消毒剂擦拭，废弃物解决按本实验室废弃物解决制度进行。第四章副溶血性弧菌的生物危害评定报告副溶血性弧菌（VibrioParahemolyticus,VP）是一种嗜盐性细菌。副溶血性弧菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，重要来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。本菌存活能力强，在抹布和砧板上能生存1个月以上，海水中可存活47天。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为重要症状。本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体发病。由于海鲜空运，内地都市病例也渐增多。此菌对酸敏感，在普通食醋中5分钟即可杀死；对热的抵抗力也较弱。副溶血性弧菌食物中毒多发生在6~10月，海产品大量上市时。中毒食品重要是海产品，另一方面为咸菜、熟肉类、禽肉、禽蛋类，约有半数中毒者为食用了腌制品后。中毒因素重要是烹调时未烧熟煮透或熟制品被污染。。1.PCR检测用于检测V．p的PCR办法重要有任意引物PCR(abritrarilyprimedPCR，Ap-PCR)、针对副溶血性弧菌任意引物PCR、多重PCR(muhiplex-PCR)、实时PCR(Real-timePCR)。实时PCR常规PCR检测，需要从反映体系中吸取产物做电泳或Southern杂交等实验进行鉴定，转移过程中易污染，造成假阳性，并且耗费时间。1996年，Tyagi开创了一种实时PCR(Real-timePCP,)。实时PCR是在，PCR反映体系中加入标记有报告基团和淬灭基团的线性Taqman。探针或茎环型荧光分子信标探针，在墓因扩增过程中，与产物杂交，此时，报告基团和淬灭基团分开，根据能量共振转移现象，报告基团发出荧光而被检测。这种办法操作简朴，闭管检测，减少污染，敏捷度高，并且能够在PCR结束或PCR过程进行同时定性或定量检测，面且能够进行临床大规模快速检测。2.流行病学传染源传染源为病人，集体发病时往往仅少数病情严重者住院，而多数未住院者可能成为传染源，但由于病人仅在疾病早期排菌较多，其后排菌快速减少，故不至因病人散布病菌而造成广泛流行。传输途径本病经食物传输，重要的食物是海产品或盐腌渍品，常见者为蟹类、乌贼、海蜇、鱼、黄泥螺等，另一方面为蛋品、肉类或蔬菜。进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引发。地辨别布特点：日本及我国沿海地区为副溶血性孤菌食物中毒发病率的高发区。据调查，我国沿海水域、海产品中副溶血性弧菌检出率较高，特别是气温较高的夏秋季节。但近年来随着海产食品的市场流通，内地也有副溶血性弧菌食物中毒的散在发生。季节性特点及易感性：7～9月常是副溶血性弧菌食物中毒的高发季节。男女老幼均可患病，但以青壮年为多，病后免疫力不强，可重复感染。食物的种类：重要是海产品，其中以墨鱼、带鱼、虾、蟹最为多见，如墨鱼的带菌率达93%，另一方面为盐渍食品。食品中副溶血性弧菌的来源：人群带菌者对多个食品的直接污染。沿海地区饮食从业人员、健康人群及渔民副溶血性弧菌带菌率为11.7%左右，有肠道病史者带菌率可达31.6～88.8%。间接污染，沿海地区炊具的副溶血性弧菌带菌率为61.9%，被副溶血性弧菌污染的食物，在较高温度下寄存，食用钱加热不彻底或者生吃，或熟制品受到带菌者、带菌的生食品、带菌容器及工具等的污染。3.治疗方法支持及对症治疗脱水者需输入生理盐水及葡萄盐水，或口服补液盐，以纠正失水。血压下降者，除被动补充血容量，纠正酸中毒等外，可酌用血管活性药。抗菌药品轻度患者可不用抗菌药品，较重者可给复方新诺明或庆大霉素、阿米卡星和诺氟沙星等喹诺酮类抗菌药品【上述抗生素类可能使细菌产生耐药性，使用须谨慎】。发生中毒后要立刻停止食用可疑中毒食品，并到医院医治。副溶血性弧菌对氯霉素敏感。呕吐、腹泻严重者要补充水和盐。4.中毒防止加工海产品的案板上副溶血弧菌的检出率为87.9%。因此，对加工海产品的器具必须严格清洗、消毒。海产品一定要烧熟煮透，加工过程中生熟用品要分开。烹调和调制海产品拼盘时可加适量食醋。食品烧熟至食用的放置时间不要超出4个小时。重要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂，胃粘膜炎、内脏（肝、脾、肺）淤血等。第五章致泻大肠埃希菌的生物危害评定报告1.生物学特性大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，统称为致泻性大肠杆菌，普通涉及五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。大肠埃希氏菌为两端钝圆的短小杆菌，普通大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。约有50%左右的菌株含有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，普通不超出10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株含有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范畴为15-46℃。在普通营养琼脂上生长体现3种菌落形态：光滑型、粗糙型、粘液型。大肠埃希氏菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。大肠埃希氏菌生华物性是，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，录素酶实验阴性，IMVi实验++--，有些菌株如碱性异型菌群，微产碱，不产气，无动力，易与志贺菌混淆。大肠埃希氏菌的抗原构造重要由菌体抗原(O)，鞭毛抗原(H)和荚膜抗原(K)三部分构成。现巳知有171个O抗原、99个K抗原和56个H抗原。2.危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制订《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。3.致病性和感染剂量致泻大肠埃希氏菌在人和动物的大便中大量存在，引发人体以腹泻症状为主的全球性疾病，其中尤以EPEC、ETEC所占比例为大。其中有少数几个引发人类食物中毒，部分埃希氏菌株與嬰兒腹瀉有關，並可引发成人腹瀉或食物中毒的暴發，感染剂量约为107～108。尽管现在报道各地重要腹泻病是由志贺氏菌或轮状病毒引发的，但是，数年来，致泻性大肠杆菌引发的腹泻病例始终位于第二位，可见大肠杆菌肠道传染的广泛性。尚有，致泻性大肠杆菌亦可常年引发人体腹泻，以夏秋季为高峰，在患者感染住院率中，婴幼儿占60%以上4.暴露的潜在后果摄入是重要的实验室危害，可引发实验人员感染。暴露在气溶胶中能否造成危害尚不清晰。5.感染途径通过污染食品和水源经口传输。6.微生物在环境中的稳定性此菌对理化因素的抵抗力，在无芽胞菌中是最强的一种，在室温可存活数周，在土壤、水中存活数月，耐寒力强，但是在30分钟内快速冷冻，将37℃降至4℃的过程，可杀死此菌。加热60℃，30分钟，此菌可灭活。此菌对青霉素有中档抵抗力，对普通消毒剂都比较敏感对漂白粉，酚、甲醛等较敏感，水中1ppb氯可杀死此菌。此菌耐胆盐，在一定程度上能抵抗煌绿等染料的抑菌作用7.浓度和浓缩标本的容量普通样本检测。8.自然和易动人群宿主致泻大肠埃希氏菌的宿主重要为牛、猪、羊、鸡等家禽家畜，许多被该微生物污染的食物都不得能够作为传输媒介，幼儿、老人及免疫缺点者更为易感。9.实验操作活动致泻大肠埃希氏菌巳证明会对实验人员造成危害。摄入是重要的实验室危害，暴露在气溶胶中能否造成危害尚不清晰。按照国标办法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，鉴定。建议采用BSL-2级水平的操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，按照本实验室的《意外事故应对方案和应急程序》进行解决。10.防止和治疗致泻大肠埃希氏菌引发人体以腹泻症状为主疾病，根据菌型不同可引发如某些疾病：轻度水泻，痢疾样腹泻、出血性腹泻，也可引发食物中毒性疾病。现在尚无可用于人类的疫苗。对本病的治疗，病人应予胃肠道隔离，除普通治疗外，可根据大便细菌培养及药品敏感实验选用适宜的抗菌药品作病原治疗，如选用庆大霉素、丁胺卡那霉素等。防止致泻大肠埃希氏菌的感染，首先是要做好个人卫生。切实做好饮食卫生、水源及粪便管理,消亡苍蝇,切断传输途径，避免病从口入。第六章伤寒沙门氏菌的生物危害评定报告伤寒沙门菌，又称伤寒杆菌，属沙门菌属D组。革兰染色阴性，呈短杆状，周有鞭毛，能活动，不产生芽孢，无荚膜。在普通培养基上能生长，在含有胆汁的培养基中生长更加好。伤寒杆菌在自然界中的生活力较强，在水中可存活2—3周，在粪便中能维持1—2个月，在牛奶中不仅能生存，且可繁殖。耐低温，在冰冻环境中可存活数月，但对光、热、干燥及消毒剂的抵抗能力较弱，日光直射数小时即死，加热至60~C后30分钟或煮沸后立刻死亡，消毒饮水余氯可快速致死。伤寒杆菌只感染人类，在自然条件下不感染动物。伤寒杆菌含有菌体(“O”)抗原、鞭毛(“H”)抗原和表面(“i'’)抗原，均能产生对应的抗体，但这些并非保护性抗体。由于“O”和“H”抗原性较强，故惯用于血清凝集实验(肥达反映)以辅助临床诊疗，亦可用以制备伤寒菌苗供防止接种。“i'’抗原见于新分离(特别是从病人血液分离)的菌株，能干扰血清中的杀菌效能和吞噬功效，是伤寒杆菌的重要毒力因子，但其抗原性不强，所产生的“i'’抗体的凝集效价普通较低且为时甚短。当病原菌从人体中去除后，“i'’抗体滴度快速下降，故“i'’抗体的检出虽对本病的诊疗无多大协助，但有助于发现带菌者。伤寒杆菌在菌体裂解时可释放强烈的内毒素，对本病的发生和发展起着较重要的作用。1.流行病学(一)传染源：为病人及带菌者。病人从潜伏期开始即可从粪便排菌，从病程第1周末开始经尿排菌，故整个病程中都有传染性，尤以病程的2—4周内传染性最大。慢性带菌者是本病不停传输或流行的重要传染源。原有慢性肝胆管疾病(如胆囊炎、胆石症等)的伤寒病人易成为慢性带菌者，约1％—4％患者在肠道和胆囊中隐藏伤寒杆菌达数月或数年之久。(二)传输途径伤寒杆菌随病人或带菌者的粪、尿排出后，通过污染的水或食物、日常生活接触、苍蝇和蟑螂等传输。其中，水源污染是本病传输的重要途径，亦是暴发流行的重要因素。食物污染也可引发本病的流行，而散发病例普通以日常生活接触传输为多。(三)人群易感性人对伤寒普遍易感。病后可获得持久性免疫，再次患病者极少。(四)流行特性世界各地都有本病发生，以热带、亚热带地区多见，可散发、地方性流行或暴发流行。在发展中国家重要由于水源污染而暴发流行，发达国家则以国际旅游感染为主。本病长年可见，但以夏秋季最多。其中以小朋友和青壮年居多。局部地区流行的伤寒耐药菌株有所增加，耐药谱也在逐步扩大。除耐氯霉素、复方磺胺甲嗯唑、氨苄西林外，少数菌株对头孢菌素及喹诺酮类抗菌药品也产生耐药性。2.实验室检查（一）常规检查：血白细胞大多为3×109/L～4×109/L，伴中性粒细胞减少和嗜酸粒细胞消失，后者随病情的好转逐步回升。极期嗜酸粒细胞＞2%，绝对计数超出4×108/L者可基本除外伤寒。高热时可有轻度蛋白尿。粪便隐血实验阳性。（二）细菌学检查：①血培养是确诊的论据，病程早期即可阳性，第7～10病日阳性率可达90%，第三周降为30%～40%，第四周时常阴性；②骨髓培养阳性率较血培养高，尤适合于已用抗菌素药品治疗，血培养阴性者；③粪便培养，从潜伏期起便可获阳性，第3～4周可高达80%，病后6周阳性率快速下降，3%患者排菌可超出一年；④尿培养：病程后期阳性率可达25%，但应避免粪便污染；⑤玫瑰疹的刮取物或活检切片也可获阳性培养。（三）免疫学检查1.肥达氏实验：伤寒血清凝集实验即肥达反映阳性者对伤寒，副伤寒有辅助诊疗价值。检查中所用的抗原有伤寒杆菌菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原，副伤寒甲，乙，丙鞭毛抗原共5种，目的在于用凝集法测定病人血清中多个抗体的凝集效价。病程第1周阳性反映不多，普通从第2周开始阳性率逐步增高，至第4周可达90%，病愈后阳性反映可持续数月之久。有少数病人抗体很迟才升高，甚至整个病程抗体效价很低（14.4%)或阴性（7.8%～10%），故不能据此而排除本病。Widal实验已沿用近1，60年代曾有人对其特异性提出异议，认为其成果存在着混乱含糊的状况，非伤寒发热性疾病Widal's实验也呈阳性成果，如多个急性感染，肿瘤，结缔组织病性疾病，慢性溃疡性结肠炎，均可出现阳性成果。Perlnan等认为无菌的结肠细胞和肠杆菌可能有共同的抗原，结肠粘膜损害所产生的抗结肠抗体与沙门菌菌体抗原起交叉反映，因此对肥达氏反映成果的鉴定宜审慎，必须亲密结合临床资料，还应强调恢复期血清抗体效价的对比，有人提出应用流行菌株抗原与国际菌株相比，阳性率可提高，建议用本地流行菌株取代国际原则菌株，以提高流行区域伤寒诊疗的阳率。2.其它免疫学检查（1）被动血凝实验（PHA）：用伤寒杆菌菌体抗原致敏红细胞，使之与被检血清反映，根据红细胞凝集状况判断有无伤寒特异性抗体存在，国内外报道阳性率90%～98.35%，假阳性率5%左右。鲍行豪等曾报道LSP-PHA对伤寒血培养患者的检出率为89.66%，早期病人90.02%，临床确诊者为82.5%，且重要检测的是特异IgM抗体，故可用于早期诊疗。（2）对流免疫电泳（CIE）：本办法可用于血清中可溶性伤寒抗原或抗体的检测，操作简便，便于基层推广，特异性较高；但敏感性较低，不同作者报道为24%～92%，重要受采集血清时间的影响，发病早期最易测出，故可用于伤寒的早期诊疗。（3）协同凝集实验（COA）：运用金葡菌的葡萄球菌A蛋白（SPA）可（2）对流免疫电泳（CIE）：本办法可用于血清中可溶性伤寒抗原或抗体的检测，操作简便，便于基层推广，特异性较高；但敏感性较低，不同作者报道为24%～92%，重要受采集血清时间的影响，发病早期最易测出，故可用于伤寒的早期诊疗。（4）免疫荧光实验（IFT）：Doshi等用伤寒杆菌菌体Vi悬液作抗原进行间接免疫荧光抗体检测，140例血培养阳性的伤寒患者134例（95.7%）阳性；394例对照者仅4例（1%）假阳性，现在有关本法的报道尚少，伤寒疫防止接种和其它沙门氏菌感染与否会影响本实验特异性，尚需进一步研究。（5）酶联免疫吸附实验（ELISA）：ELISA的基本原理是用酶促反映的放大作用来显示初级免疫学反映，既可检测抗原，又可检测抗体，用ELISA法检测伤寒患者Vi抗原，敏捷性达1ng/ml，高于CoA法9100ng/ml，并可检测到1∶1024稀释后尿液中的Vi抗原。国内、外用ELISA检测过临床标本中的Vi抗原，V9抗原，LPS，H抗原等，敏感性在62.5%～93.1%，因检测抗原的不同而异，多数在80%以上。杭州鲍行豪等应用ELISA同时检测IgM和IgG抗体，LPS-IgM-ELISA的敏感性为91.38%，特异性为99.02%，LPS-IgG-ELISA分别为93.1%和98.02%，在伤寒的血清免疫学诊疗办法中，ELISA办法简便，快速，敏感，特异性高，是公认较好的一种诊疗办法。（四）分子生物学诊疗办法1.DNA探针（DNAProbe）DNA探针是用DNA制备的诊疗试剂，用于检测或鉴定特定的细菌，办法是用一段已标记的特定的DNA片段（探针）与标本中已变性的细菌DNA杂交，通过测定与否发生杂交反映来达成检测目的，由于此探针是以细菌专有的特异性基因片断制备，故特异性很高。用DNA探针对培养所得的伤寒杆菌进行检测，敏感性需标本中达1000个细菌才干检出。DNAProbe的特异性高而敏感性低，普通用于菌种鉴定及分离。2.聚合酶链反映（PCR）PCR办法是80年代中后期发展起来的一种分子生物学办法，它能在数小时内在体外将目的基因或DNA片段扩增到数百万倍，检出率较DNA探针高100～10000倍，国外JaeHS等用PCR办法扩增伤寒的鞭毛抗原编码基因，敏感度能检出10个伤寒菌，特异性为100%，PCR办法因其高度敏感，易出现产物污染，因此控制PCR办法的假阳性及假阴性，是提高精确度的核心。3.细菌的生物安全防护在实验室操作上对于有高风险的人员，如免疫缺点者，要严格限制进入。对于针头和锐器要有警示，要用专门寄存锐器的容器盛装。在个人防护上，规定穿隔离衣，出实验室时应将隔离衣脱下；在可能接触病原时要戴一次性使用的手套，但不要戴手套接触清洁表面（如电话等），脱去手套后要洗手；在BSC外面进行操作时，要进行面部保护，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼台，还要有高压消毒器第七章志贺氏菌的生物危害评定报告1.生物学特性志贺氏菌属（Shigella）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌人类对痢疾杆菌有很高的易感性。在幼儿可引发急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志贺氏菌和大肠杆菌都属于肠杆菌科，根据DNA杂交研究成果表明，志贺氏菌属的四个种和大肠杆菌属在生化上是难以辨别的，由于有产气的志贺氏菌，也有乳糖阴性、不产气、不运动的大肠杆菌，有些大肠杆菌也能引发痢疾状的腹泻。志贺氏菌属细菌的形态与普通肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μm,宽0.5-0.7μm。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。志贺氏菌需氧或兼性厌氧。营养规定不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37℃，最适pH为6.4-7.8。37℃培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边沿整洁，直径约2nm，宋内氏菌菌落普通较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型菌落。在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本属细菌分为四个群、39个血清型。2.危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制订《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。3.致病性和感染剂量志贺氏菌引发的细菌性痢疾，重要通过消化道途径传输。根据宿主的健康状况和年纪，只需少量病菌（最少为10～100个细胞）进入，就有可能致病。致病因素：志贺氏菌的致病作用，重要是侵袭力、菌体内毒素个别菌株能产生外毒素。志贺氏菌引发的细菌性痢疾可分为两类一类是急性细菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型；二类是慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不稳定。4.暴露的潜在后果暴露后可能引发感染，菌量大时可使实验人员显性感染，菌量极少时常呈临时的带菌状态。被感不染后，成为传染源，可能对周边及环境造成污染，应及时得到控制。5.感染途径通过污染食品和水源经口传输，无其它感染途径。6.微生物在环境中的稳定性志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。普通在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在粪便内（室温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-60℃10分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。7.浓度和浓缩标本的容量普通样本检测。8.自然和易动人群宿主人和灵长类是志贺氏菌的适宜宿主，营养不良的幼儿、老人及免疫缺点者更为易感。9.实验操作活动巳有文献证明，志贺氏菌可造成实验人员感染细菌性痢疾，仅在美国和英国就有数十例报告。尽管在捕获的非灵长类动物中曾有过暴发，但人类是惟一重要的传染源。然而，实验室感染的豚鼠、其它啮齿类动物和非人灵长类动物也是被证明的传染源。这种病原体能够存在于受感染的人或动物的粪便中，极少存在于血液中。摄入及胃肠道外接种该病原体是重要的实验危害。人类经口感染福氏志贺菌的ID25～50大概是200个细菌。暴露在气溶胶中能否引发感染现在还不清晰。按照国标办法对样本（粪便、食品、水样）进行分离，培养，鉴定。建议采用BSL-2级水平的操作技术，防扩散设备和设施。一旦发生意外，按照本实验室的《意外事故应对方案和应急程序》进行解决。10.防止和治疗志贺氏蓖可引发细菌性痢疾。细菌性痢疾又可分为两类，一类是急性细菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型；二类是慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。现在疫苗还不可用于人类。对本病的治疗，病人应予胃肠道隔离，除普通治疗外，可根据大便细菌培养及药品敏感实验选用适宜的抗菌药品作病原治疗。如复方磺胺甲基异唑、氯霉素、庆大霉素及卡那霉素等。亦可应用氨苄青霉素或氧哌嗪青霉素等治疗。中毒性痢疾应予对应的急救方法，如抗休克、冬眠药品和脱水药的应用等。慢性菌痢可采用保存灌肠的办法治疗。。防止沙门氏菌感染，首先是要消亡传染源是防止方法之一，除治愈患者外，必须对托幼、饮食业及自来水厂工作人员定时检查，及时发现带菌者，调离工作岗位并予以治疗。切实做好饮食卫生、水源及粪便管理,消亡苍蝇,切断传输途径，避免病从口入。第八章蜡样芽胞杆菌的生物危害评定报告1.细菌的传输与致病蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多生熟食品中常见。已从多个食品中分离出该菌，涉及肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及多个甜点等。在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的重要因素；在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引发；在我国则重要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。1950年Hauge在对挪威奥斯陆某医院职工和病员进食甜食后引发的食物中毒研究中，初次明确指出蜡样芽胞杆菌的致病作用。蜡样芽胞杆菌作为一种食源性疾病的报导较多，在多个食品中的检出率也较高，如1982年犬饲等对日本名古屋所采1641份食品样品中，有193份检出了该菌、阳性率为11.8%；1984年我国有关单位对南京市所采211份食品样品中，有81份检出了该菌，阳性率为38.4%。蜡样芽胞杆菌食物中毒普通以夏秋季（6-10月）最高。引发中毒的食品常于食前由于保存温度不当，放置时间较长或食品经加热而残存的芽胞以生长繁殖的条件，因而造成中毒。中毒的发病率较高，普通为60-100%。但也有在可疑食品中找不到蜡样芽胞杆菌而引发食物中毒的状况，普通认为是由于蜡杆芽胞杆菌产生的热稳定毒素所致。当摄入的食品其蜡样芽胞杆菌数量达>106/克时常可造成食物中毒。蜡样芽胞杆菌食物中毒在临床上可分为呕吐型和腹泻型两类。呕吐型的潜伏期为0.5-6小时，中毒症状以恶心、呕吐为主，偶而有腹痉挛或腹泻等症状，病程不超出24小时，这种类型的症状类似于由金黄色葡萄球菌引发的食物中毒。腹泻型的潜伏期为6-15小时，症状以水泻、腹痉挛、腹痛为主，有时会有恶心等症状，病程约24小时，这种类型的症状类似于产气荚膜梭菌引发的食物中毒。严重者还可造成败血症。蜡样芽胞杆菌引发食物中毒是由于该菌可产生肠毒素。它产生两种性质不同的代谢物，引发腹泻型综合症的是一种大分子量蛋白；而引发呕吐型综合症的被认为是一种小分子量、热稳定的多肽。致呕吐型综合症的肠毒素至今尚未提纯，致腹泻型综合症的肠毒素已提纯，其纯化的肠毒素分子量为55-6.0×103。致腹泻的肠毒素能使小白鼠致死。2.细菌的生物学特性蜡样芽胞杆菌分类为芽胞杆菌属的第I群，该群有22个种。根据营养型菌细胞的宽度分为两类，蜡样芽胞杆菌、蕈状芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、炭疽芽胞杆菌和巨大芽胞杆菌属“大细胞菌种”。蜡样芽胞杆菌为革兰氏阳性大杆菌，大小为1-1.3×3-5μm，需氧或兼性需氧，生长6h即可形成原形芽胞，芽胞位于菌体的中心或次末端不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，与炭疽杆菌相似。引发食物中毒的菌株多为周鞭毛，有动力无荚膜。它的生长温度为25-37℃，最佳温度30-35℃。在肉汤中生长混浊有菌膜或壁环，振摇易乳化。在普通琼脂上生成的菌落较大，直径3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，边沿常呈扩展状故而得名。偶有产生黄绿色色素，在血琼脂平板上呈草绿色溶血。在甘露醇、卵黄多粘菌素（MYP）平板上，呈伊红粉色菌落。能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素等，VP实验阳性，可液化明胶，卵磷脂酶阳性，但多次传代后，其生化特性常可变化。另外蜡杆芽胞杆菌耐热，其食物中毒菌株中的游离芽胞能耐受100℃30分钟，而干热灭菌需120℃60分钟才干杀死。本菌对氯霉素、红霉素和庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺类和呋喃类耐药。3.细菌的实验室检查及其它检查1.标本收集采集可疑食物或收集粪便和呕吐物进行直接涂片染色镜检和其它操作。2.活菌计数无菌操作称取样品50g放入灭菌搅拌缸内。加Butterfield磷酸盐缓冲稀释液450mL，以高速（18.000-21.000rpm）均质2min。用上述1:10稀释液，持续稀释供蜡样芽胞杆菌计数。移取10mL均质样液（1:10稀释）加到90mL空白液中，从10-2到10-6制备一系列稀释液，充足混匀，并继续稀释直到10-6为止。取样品的各个稀释液（涉及1:10）0.1mL接种2只MYP（甘露醇一卵黄多粘菌素琼脂）平板，用灭菌玻璃棒在每只平板表面涂布均匀。将平板置30℃培养24小时，并检查菌落周边有沉淀圈者，表达产生卵磷脂酶。蜡样芽胞杆菌菌落普通是粉红色，随着培养时间的延长则更明显。如果上述反映不清晰，应将平板再培养24小时后计数，从MYP平板上挑取典型菌落5个或更多，移种到营养琼脂斜面上供蜡样芽胞杆菌证明实验用。3.MPN技术被推荐用于食品中低于10个/g蜡样芽胞杆菌的检查。某些不适合用平板计数法的脱水淀粉类食品也可用此法检查。在胰酪胨大豆多粘菌素肉汤中接种3管MPN系列，10-1、10-2、10-3的稀释液各接种1mL于3管。将培养管置30℃培养48±2小时，检查生长密集、典型的蜡样芽胞杆菌。将阳性管培养物划线接种于MYP平板，于30℃培养24-48小时。下列环节同2。4.分离培养将可疑食物置无菌乳钵中，加适量生理盐水研磨后，划线接种于普通琼脂平板或血琼脂平板，若为呕吐物可直接划线接种于上述平板，于37℃培养。5.若有类似蜡样芽胞杆菌的菌落出现再进一步分离纯化以及进行生化反映。6.蜡样芽胞杆菌的证明实验蜡样芽胞杆菌的分离物应符合下述条件：1)革兰氏阳性产芽胞大杆菌，其芽胞不突出体外；2）在MYP琼脂上产生卵磷脂酶而不发酵甘露醇；3）厌氧培养生长，发酵葡萄糖产酸；4）还原硝酸盐；5）VP阳性；6）分介L-酪氨酸；7）在含0.001%溶菌酶的培养基中能生长。7.蜡样芽胞杆菌群的鉴别实验要鉴别典型蜡样芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌群的其它种还需进一步进行下述实验：1）动力实验；2）根状生长实验；3）溶菌活性实验；4）蛋白质毒素结晶实验：蜡样芽胞杆菌有动力、强溶血、不形成根状菌落，或不产生蛋白质毒素结晶。并且蜡样芽胞杆菌在4℃、pH4.3、盐浓度18%的条件下仍能存活或生长。通过高温杀菌或适宜的冷藏能够控制蜡样芽胞杆菌的增殖。8.血清学分型、噬菌体分型。4.细菌的防治蜡样芽胞杆菌所引发的食物中毒多因食品在食用前保存温度较高（20℃以上）和放置时间较长，故对中毒的防止涉及：由于蜡样芽胞杆菌在15℃下列不繁殖，剩饭、剩菜应放在低温保存。该菌污染的食品普通无腐败变质的异味，不易被发现。因此，剩饭、剩菜在食用前一定要再加热。注意食品的贮藏和个人卫生，避免尘土、昆虫及其它不洁物污染食品。若一旦发生了中毒，则立刻停止食用可疑污染的食品，多饮水。普通不需要使用抗生素治疗。腹泻较重者可到医院就诊。5.细菌的生物安全防护根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传输的微生物名录（待颁布）蜡样芽胞杆菌属于三类，BSL-2。（1）操作规定1、实验时，未经实验室主任同意，限制或严禁进入实验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应寄存在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、全部的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，涉及针、注射器、玻片、加样器等。5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃迈进行人工解决，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至解决区消毒，最佳高压杀菌。6、打碎的器皿不能直接用手解决，必须用其它工具解决，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照有关的规定进行消毒。7、全部的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒办法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立刻向实验室主任报告。进行适宜的医学评定、观察、治疗，保存书面统计。9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、特别是传染源溅出或洒出后、或受到其它传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照有关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照有关的规定打包运输。（2）安全设备1、对的使用和保养生物安全柜、最佳是二级生物安全柜、或其它适宜的人员防护设施、或物理遏制装置。2、拟定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，涉及离心、研磨、匀浆、激烈震荡或混匀、超声波破裂、启动装有传染源的容器、采集感染标本等。3、涉及高浓度或大致积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。4、当必须在生物安全柜外解决标本时，需采用面部保护方法（跟镜、口罩、面罩、或其它防溅装置），以免传染源或其它有害物溅或洒到面上。5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服能够在实验室内解决，也能够在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“干净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。第九章单核增生李斯特菌的危害评定报告1.细菌的传输与致病产单核李斯特菌是李斯特菌属中唯一可对人类致病的菌种，能够引发李斯特菌病，重要体现为脑膜炎和败血症。健康的带菌者是重要的传染源，能够经粪-口途径传输，也能够通过胎盘和产道由带菌的母亲感染给新生儿。如果人的眼睛或皮肤与带菌的病畜直接接触，也可造成局部感染。产单核李斯特还能引发鱼类、鸟类和哺乳动物牛、羊等多个动物疾病。2.细菌的生物学特性产单核李斯特菌是一种革兰阳性短小杆菌，大小约为1~2μm×0.4~0.5μm，普通成双排列，偶然可见双球状。有鞭毛，但仅在18~20℃有动力，在37℃动力缓慢。无芽胞，普通不形成荚膜，但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜。兼性厌氧，对营养规定不高，普通培养基上可生长，在血平板上会形成β-溶血。最适的生长温度是30~37℃，并可在4℃条件下进行冷增菌。产单核李斯特菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌等及大肠埃希菌含有共同抗原。根据菌体及鞭毛抗原的不同，可将其分为4个血清型，1、3、4型还可分为若干亚型。抗原的构造与毒力无关，致病的物质重要是溶血素和菌体表面成分。其中1型重要感染啮齿动物，4型重要感染反刍动物。但各型均可对人类致病，尤以1a和1b最为多见。本菌耐碱不耐酸，对热较为敏感，加热50℃10min即可死亡。同时该菌对多个抗生素敏感，以氨苄青霉素为首选，尚有青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等敏感。但该菌对磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。3.细菌的实验室检查1、标本采集采集来自临床的多个标本，如脑脊液和血液。另外还可根据症状采集子宫、子宫颈、阴道、鼻咽部等部位的分泌物或组织，尚有新生儿脐带残端、羊水及胎粪、尿等送检。2、涂片镜检除了血液标本外，其它标本都能够涂片做革兰染色镜检，或用产单核李斯特菌1型和4型及多价荧光抗体进行染色。3、动力检查在18~20℃有动力，在37℃动力缓慢。若发现有动力，应立刻报告并及早进行抗生素治疗，以防止本菌败血症或脑膜炎的发生。4、分离培养取脑脊液离心后的沉淀物划线接种于羊血琼脂平板上，于10%CO2环境中进行培养，35℃孵育18~24h；血液标本5ml注入含有50ml培养基的血培养瓶中，同样在含10%CO2环境中进行培养；咽喉拭子、组织及粪便标本可接种于肉汤培养基置4℃冰箱中进行冷增菌。成果：产单核李斯特菌在血琼脂平板上能产生狭窄的β-溶血环，菌落呈灰白色，直径1~2mm；在肉汤中呈均匀混浊生长表面形成薄膜；在半固体培养基内，可形成倒伞形生长。5、生化鉴定本菌可发酵多个糖类如葡萄糖、果糖、覃糖、麦芽糖核水杨素，产酸不产气。甲基红和V-P实验阳性，触酶阳性，可使石蕊牛乳缓慢产酸并使其脱色，能水解精氨酸产氨。不还原硝酸盐、不形成吲哚、不液化明胶和凝固血清，不分解尿素。能水解七叶苷，有时还可形成硫化氢。6、血清学实验用已知的李斯特菌1型、4型和多价抗血清玻片凝集实验对可疑菌进行鉴定。7、动物结膜点种实验取幼兔或豚鼠一只，用本菌24h肉汤培养物1滴，滴入实验。8、动物一侧的结膜囊内，以另一侧为对照，观察5天。普通产单核李斯特菌会在接种后的24~36h内，出现化脓性结膜炎。4.细菌的生物安全防护根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传输的微生物名录（待颁布）产单核李斯特菌属于三类，BSL-2。有关的防护事宜涉及：（1）操作规定1、实验时，未经实验室主任同意，限制或严禁进入实验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应寄存在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。3、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，涉及针、注射器、玻片、加样器等。4、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃迈进行人工解决，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至解决区消毒，最佳高压杀菌。5、打碎的器皿不能直接用手解决，必须用其它工具解决，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照有关的规定进行消毒。6、全部的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒办法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。7、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、特别是传染源溅出或洒出后、或受到其它传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照有关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照有关的规定打包运输。（2）安全设备1、对的使用和保养生物安全柜、最佳是二级生物安全柜、或其它适宜的人员防护设施、或物理遏制装置。2、拟定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，涉及离心、研磨、匀浆、激烈震荡或混匀、超声波破裂、启动装有传染源的容器、采集感染标本等。3、涉及高浓度或大致积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。4、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服能够在实验室内解决，也能够在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。5、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“干净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。第十章流感病毒的危害评定报告流感病毒属正粘病毒科，分甲、乙、丙三型。含有“变异”特性，不停产生新的亚型。可引发人或家禽的流行性感冒。这是一种急性呼吸道传染病，它含有忽然暴发、快速蔓延、涉及面广的特点。在人群中，它的发病率高，病死率低，多发于青少年，恢复快，含有一定季节性。而禽流感发病率和病死率高，季节性不强，来源常不明。20世纪曾有4次流感大流行。流感流行时造成的经济损失名列各传染病之首。流感是第一种实施全球监测的传染病。病人和病禽是重要的传染源。传输途径以空气飞沫传输为主，也存在通过水源、亲密接触、垂直传输、蚊虫传输等多个途径。人群普遍易感，病后免疫时间短，而流感病毒变异性大，但型间无交叉免疫，因此人在一生中可多次患流感。流感病毒在外界的抵抗力弱，在56℃30分钟条件下易被灭活，在室温下传染性很快丧失，100℃1分钟即被灭活，但在0～4℃能存活数周，在-20℃真空干燥条件下可长久保存。对紫外线