一次性使用电子消化道内窥镜环残检测方法验证A

广州瑞派医疗器械有限责任公司文件编号DOCNo.QC-VP-T-041机密等级Secrecy□—般Lv1□秘密Lv2□机密Lv3版次Rev.A-0文件类型DOCtype验证文件Validationfile适用范围Scope消化道内窥镜工艺代号Code产品型号Model/一次性使用电子消化道1乙醇残留量的检(RPB01A|RPB01B/RPB02A内di窥镜族环氧乙烷及2-氯佥方法确认方案2B02B/RPB03A|RPB03B)编制Preparedby日期Date审核Reviewedby日期Date批准Authorizedby日期Date生效日期Effectivedate受控印章SealD・1str3^utlon分发范围□管理者代表Managementrepresentative□研发部RD□质量部QA/QC□生产部PD□行政人事部HR□采购部PU□市场部SM□法规部LD修订履历ChangeHistory版次日期修订内容修订人变更申请号A-02021.09.15新建立陈富华/1概述我公司生产的一次性使用电子消化道内窥镜须环氧乙烷灭菌，环氧乙烷具穿透力强，可达到被消毒物品深部，杀灭多数病原微生物，包括细菌繁殖体、芽孢、病毒和真菌，属于光谱抗菌剂。环氧乙烷是经环氧乙烷灭菌产品的主要残留物，2-氯乙醇为环氧乙烷灭菌过程中衍生的有机物质，这两种物质在一定浓度下会对人体有危害作用；GB/T16886.7-2015/IS010993-7:2008《医疗器械生物学评价第7部分：环氧乙烷灭菌残留量》中规定了经环氧乙烷灭菌的医疗器械单位产品上的环氧乙烷灭菌残留物（包括环氧乙烷和2-氯乙醇）的允许限量，短期接触器械环氧乙烷对患者的平均日剂量不应超过4mg，2-氯乙醇对患者的平均日剂量不应超过9mg。本方案设计我公司一次性使用电子消化道内窥镜经环氧乙烷灭菌后，使用顶空气相色谱方法测定环氧乙烷残留量和2-氯乙醇残留量，确认残留量结果符合本公司质量标准要求。2目的建立使用安捷伦8860型气相色谱仪和7697A顶空检验经环氧乙烷灭菌的一次性使用电子消化道内窥镜的环氧乙烷残留量及2-氯乙醇残留量，证明本次确认的检验方法适用于我公司一次性使用电子消化道内窥镜的环氧乙烷残留量及2-氯乙醇残留量检测项目，并符合相关法规要求。3范围本次经环氧乙烷灭菌一次性使用电子内窥镜族涵盖以下产品：名称产品代码型号材质一次性使用电子胃镜RPB01A|RPB01BRP-GI-G02ARP-GI-G02B一次性使用电子肠镜RPB02A|RPB02BRP-GI-C02ARP-GI-C02B一次性使用电子肠镜RPB03A|RPB03BRP-GI-C02CRP-GI-C02D由于上表所列产品中，部分的生产工艺及材质相同，故本次环氧乙烷残留量及2-氯乙醇残留量检验方法验证将选其中一种产品实施验证。名称产品代码型号一次性使用电子胃镜RPB01RP-GI-C02A4职责质量部主管编制验证方案和报告，负责对验证相关人员进行方案的培训，明确职责分工质量部经理审核验证方案和报告；质量部QC人员负责按照验证方案实施验证。管理者代表批准确认方案和报告。计划实施日期：2021年07月20日至2021年09月20日文件依据GB/T16886.7-2015/IS010993-7:2008《医疗器械生物学评价第7部分:环氧乙烷灭菌残留量》GB14233.1-2008/T《医用输液、输血、注射器具检验方法第1部分：化学分析方法》《中国药典》2020版四部0521气相色谱法9101分析方法验证指导原则QC-PMP-T-026《8860气相色谱仪及7697A顶空操作、清洁、维护管理规程》相关人员培训确认开始前要求对该方案所有相关人员进行培训，培训内容为本方案、依据的相关文件实验所涉及的相关操作规程等，并有相应的培训记录《员工培训签到表》（记录编号:F-HR-SMP-002-01）。8内容8.1仪器组件：由载气源、进样部分（7697A顶空进样器）、8860气相色谱仪（色谱柱、柱温箱、检测器）、数据处理系统组成。8.1.1载气源：氮气（N2）8.1.2进样部分：7697A顶空进样器，将标准溶液或样品制得的浸提液，置于顶空瓶中，在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在非气态和气态达至平衡后，由色谱柱自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中。8.1.38860型气相色谱仪色谱柱：毛线管石英柱柱温箱：分为恒温和程序升温8.1.3.3检测器：火焰离子化检测器（FID）8.1.4数据处理系统：色谱工作站OpenLabCDS检验原理：在一定温度下，用蒸馏水浸提样品中的环氧乙烷和2-氯乙醇，用顶空气相色谱法测定环氧乙烷和2-氯乙醇的含量。气相色谱法是采用气体（氮气）做为流动性（载气）流经色谱柱进行分离测定的色谱方法，环氧乙烷和2-氯乙醇气化后，被载气带入色谱柱进行分离，并分先后顺序进入检测器，使用色谱工作站OpenLabCDS记录色谱信号。8.3检验内容8.3.1检验方法及仪器设置8.3.1.17697A顶空平衡温度：80°C；阀和定量环温度：90°C；传输线温度：100°C平衡时间：30min；GC循环时间：14min样品瓶加压：15psi；充满定量环压力：13psi8860GC载气：氮气，衬管：不添加石英棉的衬管进样口温度：200C，分流比：10：1色谱柱：DB-624,30mx0.32mmx1.80pm恒流模式，3mL/min柱温程序：40C保持1min,15°C/min升温至130°C，保持1minFID温度：250C，氢气30ml/min，空气400ml/min，尾吹+柱流速20ml/min8.3.2溶液配制8.321取10ml容量瓶，加入约5ml的蒸馏水，取0.8ml5mg/ml的2-氯乙醇标准溶液和0.4ml5mg/ml环氧乙烷标准溶液，再加入蒸馏水定容至10ml,混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为200mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为400mg/ml。8.322取10ml容量瓶，加入约5ml的蒸馏水，取1ml200mg/ml环氧乙烷标准溶液和400mg/ml2-氯乙醇标准溶液的混合液，再加入蒸馏水定容至10ml，混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为20mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为40mg/ml。8.323从8.322稀释以下5个系列浓度的标准溶液并定容至10ml，该系列浓度如下表所示：序号混合溶液（ml）蒸馏水（ml）EO最终浓度（pg/ml）ECH最终浓度(pg/ml)10.59.5122192432.57.55104551020510020408.3.2.4分别取5ml置于顶空瓶中，按8.3.2.1方法以标准品混合液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。8.3.2.5样品浸提液制备1）模拟产品使用情况，我公司的一次性使用电子消化道内窥镜中的产品在人体内最长时间均60min；故取经环氧乙烷灭菌的一次性使用电子宫腔镜，把与人体接触部分剪成数段，装进干净的自封袋中，按照lg样品：5ml蒸馏水加入适量蒸馏水，置于37°C的电热恒温水浴锅中，恒温120分钟。取5ml置于顶空瓶中，按8.3.2.1方法以标准品混合液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，测得相应的浓度。2）依据公式，计算出环氧乙烷残留量和2-氯乙醇残留量。环氧乙烷（EO）残留量：按照以下公式计算含量，标准为WlOpg/gCE0=Md/M=CenxVen/M式中：CE0——产品中环氧乙烷相对含量，单位Mg/gCen——从标准曲线中得到的浸提液中EO量，单位：Mg/mlenVen 浸提液（蒸馏水）的体积，单位：mlenMD——浸提的残留量，单位：MgM——浸提样品重量，单位：g2-氯乙醇（ECH）残留量：按照以下公式计算其含量，标准为W9mg/件Md=CenXVen/1000式中：MD——浸提的残留量，单位：Mg/件，Cen——从标准曲线中得到的浸提液中ECH量，单位：Mg/mlenVen 浸提液（蒸馏水）的体积，单位：mlen8.4实验准备8.4.1仪器及相关气体的确认实施本方案前，应对所用的仪器及其气体进行确认，并填写相应的记录；详见附件1。环氧乙烷标准品、2-氯乙醇标准品的确认实施本方案前，应对所用的环氧乙烷标准品及2-氯乙醇标准品进行确认，并填写相应的记录；详见附件2。8.5确认过程8.5.1系统适应性：气相色谱系统的适应性试验包括理论塔板数（n）和分离度（R）。8.5.1.1色谱柱的理论塔板数（n）:用于评价色谱柱的分离效果。在检测中的测定物质为环氧乙烷和2-氯乙醇，其理论板数应不小于5000。理论塔板数公式:n=16（tR/W）2或n=5.54（tR/Wh/2）2式中保留时间为$，峰宽（W）,半峰宽（Wh/2）分离度:用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。为了保证待测物质的分离效果，应确认环氧乙烷和2-氯乙醇峰与其相邻峰R，分离度R应不小于1.5。分离度公式：R=2x（小）/（Wi+W2）或R=2x（“）（Wih/2+W2h/2）式中tR2为相邻两色谱峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两色谱峰中前一峰的保留时间；w1w2及w1h/2W2h/2分别为此相邻两色谱峰的峰宽及半峰宽、，、8.5.1.3标准溶液制备：按照8.3.2.1至8.324制备标准品样品溶液，进行理论塔板数（n）和分离度（R）测试后记录结果数据，应符合8.5.1.1和8.5.1.2的要求。专属性8.5.2.1取1ml蒸馏水至顶空瓶中，按照8.3.1方法测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算的杂峰，分离度应符合8.5.2.1中R应不小于1.5的要求。8.522按照8.3.2.2法制得5yg/mlEO和10yg/mlECH混合溶液，移取1ml该样品至顶空瓶中，按照8.3.1方法测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算的杂峰，分离度应符合8.5.2.1中R应不小于1.5的要求。8.523取&3.2.5制得的1ml样品浸提液至顶空瓶中，按照8.3.1要求设置参数测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算的杂峰，分离度应符合8.5.2.1中R应不小于1.5的要求。8.524按照8.3.2.2法制得1ml5yg/mlEO和10yg/mlECH混合溶液后，移取1ml该样品至顶空瓶中，同时加入8.3.2.5制得的1ml样品浸提液至顶空瓶，按照8.3.1方法测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算的杂峰，分离度应符合8.521中R应不小于1.5的要求。8.5.3方法检测限使用3：1信噪比法：测得已知低浓度试样混合溶液（1ml1yg/mlEO和2卩g/mlECH）测出的信号与噪音比值，确定被可靠检测出的低浓度。8.5.4线性按照8.3.2.1至8.324方法测试，测试结果与试样中被测物浓度直接呈比例系数R值，R应大于0.99。8.5.5准确度取9支一次性使用电子消化道内窥镜，按照8.3.2.5要求制备浸提液备用。加标样品溶液的配制，每个样品的均按照如下方法配制：-取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取0.4ml5mg/ml的2-氯乙醇标准溶液和0.2ml5mg/ml环氧乙烷标准溶液，再加入浸提液定容至10ml，混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为100mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为200mg/ml；-取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取1ml100mg/ml环氧乙烷标准溶液和200mg/ml2-氯乙醇标准溶液的混合液，再加入浸提液定容至10ml，混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为10mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为20mg/ml。8.5.5.3从8.552稀释至以下3个系列浓度的标准溶液并定容至10ml,每组3个样品，该系列浓度如下表所示，准备9个顶空瓶，并按照浓度编号：1号为1-1；1-2；1-3；2号为2-1；2-2；2-3；3号为3-1；3-2；3-3；每个样品取1ml，置于空顶空瓶中密封，每个浓度每个样品各取按照8.3.2方法检验，检测环氧乙烷浓度和2-氯乙醇浓度并计算含量。序号混合溶液（ml）浸提液（ml）EO最终浓度（Ug/ml）ECH最终浓度（Ug/ml）10.59.5510219102032820408.554同时准备9个顶空瓶，每个样品浸提液取1ml,置于空顶空瓶中密封，与其相对应的加标标准溶液同时进行检测。8.5.5.5计算加标回收率及标准偏差：加标平均回收率应在80%~110%之间。加标回收率（P）计算公式：P=（m2-m1）/m><100%式中：P——加标回收率m1——样品中的物质含量m2 加标试样中的物质含量m——加标体积中的实际物质含量8.5.6精密度8.5.6.1重复性1） 标准溶液重复性：取1ml标准品溶液，含5卩g/ml的环氧乙烷和10yg/ml的2-氯乙醇置于顶空瓶中，按照8.3.1方法数测试样品，重复进样5个，计算含量RSD，RSD应小于2.0%。2） 样品溶液重复性：取6.3中样品浸提液1ml置于顶空瓶中，按照8.3.1方法试样品，重复进样5个，计算含量RSD，RSD应小于2.0%8.562中间精密度：取1ml标准品溶液，含5卩g/ml的环氧乙烷和10yg/ml的2-氯乙醇置于顶空瓶中，测定环氧乙烷和2-氯乙醇浓度，由不同人员，按照8.3.1方法测试样品，不同时间完成1次检测，并计算RSD，RSD应小于2.0%。8.5.7耐用性考察关键参数随机变动因素对结果的影响，改变顶空条件中炉温±3°C，气相色谱条件中柱温±3C。取1ml标准品溶液，含5yg/ml的环氧乙烷和10yg/ml的2-氯乙醇置于顶空瓶中，按上述各个条件进行测试，均应能满足系统适用性试验要求，理论塔板数不小于5000，分离度不小于1.5的要求。9异常偏差报告整个验证实施的过程中，确认过程中，应严格按此方案执行，出现个别不符合标准的结果时，应及时报告质量部经理，确认后再上报方法至管理者代表。10再验证检查方法变更、实验条件改变或产品材料发生变化等可能影响检查结果时，需对本方法进行再验证。11实验结论环氧乙烷、2-氯乙醇残留检测方法应适用于本次涉及的一次性使用电子消化道内窥镜检测，检测应能按照此方法进行。附件1仪器及相关气体确认仪器/气体名称仪器型号设备编码确认结果（有纸质证明的需提供相关证明）气相色谱仪顶空进样器氢气发生器空气发生器氮气结论：确认人/日期： 复核人/日期：附件2仪器及相关气体确认附件3：系统适应性塔板理论数和分离度：所有样品的理论板数及分离度统计计入下表，理论板数应不小于5000，分溶液的配制：按照8.321至8.324制备标准品样品溶液，并按照8.5.1方法测试后记录理论塔板数（n）和分离度环氧乙烷（EO）标准溶液批号：2-氯乙醇（ECH）标准溶液批号：标准混合溶液测试样品编号标准品名称理论板数应不小于5000分离度应不小于1.5标准品名称EO:1yg/mlECH:2yg/ml1环氧乙烷2-氯乙醇EO:2yg/mlECH:4yg/ml2环氧乙烷2-氯乙醇EO:5yg/mlECH:10yg/ml3环氧乙烷2-氯乙醇EO:10yg/mlECH:20yg/ml4环氧乙烷2-氯乙醇EO:20yg/mlECH:40yg/ml5环氧乙烷2-氯乙醇结论（原始记录至作为本确认报告的支持附件）：检验人/日期： 复核人/日期:附件4专属性按照8.3.1要求设置参数测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算的应不小于1.5。溶液的配制:取1ml蒸馏水至顶空瓶中，按照8.5.1方法测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算按照8.3.2.2法制得5gg/mlEO和10yg/mlECH混合溶液，移取1ml该样品至顶空瓶中，按照8.5.1方法测试样品，不应有影响含量计算的杂峰，计算R值。取8.3.2.5制得的1ml样品浸提液至顶空瓶中，按照8.5.1方法测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不按照832.2法制得1ml5gg/mlEO和1Oyg/mlECH混合溶液后，移取1ml该样品至顶空瓶中，同时加入8.325制得方法测试样品，其图谱在环氧乙烷峰及2-氯乙醇峰附近不应有影响含量计算的杂峰，计算R值。环氧乙烷（EO）标准溶液批号： 2-氯乙醇（ECH）标准溶液批号：样品重量： 加入浸提蒸馏水量： 恒温温度： 恒温时长：名称环氧乙烷峰宽环氧乙烷保留时间环氧乙烷与其杂峰分离度R值2-氯乙醇标峰宽蒸馏水5gg/mlEO和10gg/mlECH样品浸提液1ml5gg/mlEO和10gg/mlECH+1ml样品浸提液结论（原始记录至作为本确认报告的支持附件）：检验人/日期： 复核人/日期:

REDPINEDOCNo.REDPINEDOCNo.：QC-VP-T-041附件5：方法检测限使用3：1信噪比法：测得已知低浓度试样混合溶液（lmllyg/mlEO和2卩g/mlECH）测出的信号与噪音比值，确定被可靠检测出的低浓度。溶液的配制：按照8.3.2.1至8.3.2.4制备标准样品溶液。环氧乙烷（EO）标准溶液批号：2-氯乙醇（ECH）标准溶液批号：已知低浓度：lyg/mlEO和2gg/mlECH样品名称浓度测得S/N求出S/N为3的检测出的低浓度环氧乙烷lpg/ml2-氯乙醇2yg/ml结论（原始记录至作为本确认报告的支持附件）：检验人/日期：复核人/日期：REDPINEDOCNo.REDPINEDOCNo.：QC-VP-T-041附件6：线性测试结果与试样中被测物浓度直接呈比例系数R应大于0.99。溶液的配制：按照832.1至832.4方法配制，测试结果与试样中被测物浓度直接呈比例系数R值。环氧乙烷（EO）标准溶液批号：2-氯乙醇（ECH）标准溶液批号：环氧乙烷标准品浓度yg/ml保留时间min峰面积浓度(yg/ml)环氧乙烷线性相关系数（R）环氧乙烷方程2-氯乙醇标准品浓度yg/ml保留时间min峰面积浓度（yg/ml）2-氯乙醇线性相关系数（R）2-氯乙烷方程结论（原始记录至作为本确认报告的支持附件）：检验人/日期： 复核人/日期：附件7：准确度（回收率）准备9个顶空瓶，加入相关标准溶液，按照8.3.2方法检验，检测环氧乙烷浓度和2-氯乙醇浓度并收率应在80%~110%之间。加标回收率（P）=（m2-m1）/m><100%m1——样品中的EO（ECH）含量叫——加标试样中的EO（ECH）含量m——加标体积中实I1.浸提液制备测试样品编号样品重量（g）加入浸提蒸馏水（ml）恒温起始时间恒温结束时间恒温时1-11-21-32-12-22-33-13-23-3加标样品溶液的配制，每个样品的均按照如下方法配制：-取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取0.4ml5mg/ml的2-氯乙醇标准溶液和0.2ml5mg/ml环氧乙烷标准溶液环氧乙烷标准溶液浓度为100mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为200mg/ml,取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取0.5m2-氯乙醇标准溶液的混合液，再加入浸提液定容至10ml,混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为5mg/ml和2-氯乙醇标-取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取0.4ml5mg/ml的2-氯乙醇标准溶液和0.2ml5mg/ml环氧乙烷标准溶液环氧乙烷标准溶液浓度为100mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为200mg/ml，取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取lm]2-氯乙醇标准溶液的混合液，再加入浸提液定容至10ml,混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为10mg/ml和2-氯乙醇;-取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取0.4ml5mg/ml的2-氯乙醇标准溶液和0.2ml5mg/ml环氧乙烷标准溶液环氧乙烷标准溶液浓度为100mg/ml和2-氯乙醇标准溶液为200mg/ml，取10ml容量瓶，加入约5ml的浸提液，取2ml2-氯乙醇标准溶液的混合液，再加入浸提液定容至10ml,混合液中环氧乙烷标准溶液浓度为20mg/ml和2-氯乙醇;上述加标标准溶液稀释至以下3个系列浓度的标准溶液并定容至10ml，每组3个样品，该系列浓度如下表所刀号为1-1； 1-2； 1-3； 2号为2-1； 2-2； 2-3； 3号为3-1； 3-2； 3-3；每个样品取1ml,置于空顶空瓶中密封，每检测环氧乙烷浓度和2-氯乙醇浓度并计算含量。同时准备9个顶空瓶，每个样品浸提液取1ml,置于空顶空瓶中密封，与其相对应的加标标准溶液同时进行检测环氧乙烷（EO）标准溶液批号： 2-氯乙醇（ECH）标准溶液批号:样品溶液名称测试样品编号EO实测EO实际样品溶液回收率（%）平均回收率（%）ECH实测ECH实际m2mm】m2m5gg/mlEO+10gg/mlECH1-11-21-310gg/mlEO+20gg/mlECH2-12-22-320yg/mlEO+40yg/mlECH3-13-23-3结论（原始记录至作为本确认报告的支持附件）：检验人/日期:复核人/日期:REDPINE检验方法确认方案Rev.：A-0Page：19/21附件8：精密度8・1重复性：计算RSD,相对标准偏差RSD应小于2.0%。标准溶液重复性：取5ml标准品溶液，含5聘/ml的环氧乙烷和10卩g/ml的2-氯乙醇置于顶空瓶中，重复进样5个，计算浓度RSD,RSD应小于2.0%。样品溶液重复性：取6.3中样品浸提液5ml置于顶空瓶中，重复进样5个，计算浓度RSD，RSD应小于5.0%环氧乙烷（EO）标准溶液批号： 2-氯乙醇（ECH）标准溶液批号：样