第九章血脂及血浆脂蛋白检验

第九章血脂及血浆脂蛋白检验第一节概述第二节血清总胆固醇测定第三节血清三脂酰甘油测定第四节血清高密度脂蛋白胆固醇测定第五节血清低密度脂蛋白胆固醇测定第六节血清载脂蛋白A1和B测定第七节血清脂蛋白电泳分析第八节血清脂蛋白（a）测定本章内容概要第一节概述血脂及血浆脂蛋白脂蛋白代谢紊乱一、血脂及血浆脂蛋白

血脂：是指血浆中脂类的总称。属于中性脂肪（甘油三酯和胆固醇）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）的总称定义：

脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。（一）血浆脂蛋白的分类超速离心法：根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮速率不同而进行分离的方法。

电泳分离法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同，利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断其部位。

分离方法超速离心法：乳糜微粒（chylomicron,CM）极低密度脂蛋白（verylowdensitylipoprotein,VLDL）中间密度脂蛋白（intermediatedensitylipoprotein,IDL）低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein，LDL）高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein，HDL）脂蛋白（a）（lipoprotein(a),Lp(a)）

乳糜微粒、前-

、

和

四条脂蛋白区带

电泳法（二）血浆脂蛋白的组成组成：

蛋白质、三脂酰甘油、磷脂（PL）、游离胆固醇（FC）及胆固醇酯（CE）等成分组成。其中蛋白质部分称为载脂蛋白（Apo）AⅠApoAAⅡAⅢB48ApoB载脂蛋白（a）B100CⅠApoCCⅡCⅢApoD

近年来，还发现了Lp（a）脂蛋白分类1.乳糜微粒CM颗粒最大，脂类含量高达98%，密度极低。由小肠粘膜细胞在吸收食物脂类（主要是甘油三酯）时合成，经乳糜导管，胸导管到血液。主要功能为运输外源性甘油三酯。2.极低密度脂蛋白vldl主要在肝脏利用脂肪酸和葡萄糖合成。若食物摄取过量糖或体内脂肪动用过多，均可导致血vldl增高。vldl中脂类占85%-90%，其密度也很低。主要功能为vLdL是运输内源性甘油三酯。3.低密度脂蛋白LdL的结构大致可分为三层：内层、中层、外层。游离胆固醇分布于三层之中。4.高密度脂蛋白HBL是一组不均一的脂蛋白HBL主要由肝合成，小肠也可合成，HBL按密度大小又可分为HBL1、HBL2和HBL3。HBL1又称为HBLc，仅在摄取高胆固醇膳食后才在血中出现，健康人血浆中主要含HBL2和HBL3。HBL主要是将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢。5.脂蛋白（a）lp(a)核心部分由甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯等脂质和载脂蛋白b100组成，结构类似LdL。lp(a)含有两类载脂蛋白，即apoB100和apo(a)lp(a)是动脉粥样硬化性疾病的一项独立危险因子。

（三）血浆脂蛋白的结构与功能结构：大致为球形颗粒，由两大部分组成即疏水性的内核和亲水性的外壳（图10-1）。内核由不同量的CE与TG组成表层由载脂蛋白、PL及FC组成FC及PL的极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。血浆脂蛋白的结构与载脂蛋白的功能有密切的联系脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo)载脂蛋白定义：种类：按1972年Alaupovic建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸组成的差异，每一型又可分若干亚型。功能：

①维持脂蛋白的结构例如：ApoAⅠ、ApoCⅠ、ApoE②调节脂蛋白代谢的关键酶例如：ApoAⅠ、ApoCⅠ能激活磷脂酰胆碱胆固醇脂酰基转移酶（LCAT）促进胆固醇的酯化，ApoCⅡ激活脂蛋白脂肪酶（LPL），促进CM和VLDL中三脂酰甘油降解③识别脂蛋白受体例如：ApoE能识别肝细胞CM残余颗粒受体ApoB100识别LDL受体脂蛋白受体定义：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。脂蛋白与脂蛋白受体的作用：

不仅是运送细胞所必需的脂蛋白，也能消除血和外周组织中具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白。种类：

已有很多种，主要有LDL受体、残粒受体及清道夫受体。LDL受体：

不仅能识别ApoB100、ApoE，在细胞结合、摄取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用。各种脂蛋白受体功能残粒受体：

能识别ApoE，是清除血液循环中CM残粒和β-VLDL残粒的主要受体，它也能结合含ApoE的HDL。

清道夫受体：

主要存在于巨噬细胞表面,介导修饰LDL(包括氧化LDL和

-VLDL)从血液循环中清除。

二、血浆脂蛋白代谢紊乱血浆脂蛋白代谢分类：外源性代谢途径：指食物中摄入的胆固醇和甘油三酯在小肠中合成CM及CM代谢的过程。内源性代谢途径：指肝脏合成VLDL，然后转变为IDL和LDL

并被肝脏或其它器官代谢的过程胆固醇的逆向转运：HDL参与将胆固醇从外周组织运输到肝脏的过程。

脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血症定义：

高脂血症是指血浆中胆固醇或和甘油三酯水平升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一定时会导致高脂蛋白血症。

分型：

1．表型分型法

主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。该分类法不包括病因学，故称表型分类。

（1）Ⅰ型高脂蛋白血症又称家族性高乳糜微粒血症（2）Ⅱa型高脂白血症（3）Ⅱb型高脂蛋白血症（4）Ⅲ型高脂蛋白血症（5）Ⅳ型高脂蛋白血症（6）Ⅴ型高脂蛋白血症高脂蛋白血症表型分型法甘油三酯及胆固醇危险水平的划分标准2．按是否继发于全身性疾病分类

继发性高脂血症：

原发性高脂血症：

继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。此外，某些药物如β-受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异常。

在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高脂血症由先天性基因缺陷所致3．高脂血症的基因分型法

家族性高脂血症的临床特征常用名基因缺陷临床特征表型分类家族性高胆固醇血症LDL受体缺陷以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，LDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。ⅡaⅡb家族性ApoB100缺陷症ApoB100缺陷同上同上家族性混合型高脂血症不清楚胆固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。Ⅱb家族性异常β脂蛋白血症ApoE异常胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDL残粒以及IDL明显增加，可有掌皱黄色瘤，多为ApoE2（2/2）表型。Ⅲ家族性高甘油三酯血症不清楚以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，VLDL明显增加。Ⅳ低脂蛋白血症1．家族性低β-脂蛋白血症2．β-脂蛋白缺乏血症3．家族性低α-脂蛋白血症第二节血清胆固醇测定简介胆固醇是人体内重要的脂类成分，具有重要的生理功能。

游离胆固醇30%

血清总胆固醇（TC）

胆固醇酯70%血浆胆固醇↑引起动脉粥样硬化，形成堵塞性血管疾病。

血清（浆）总胆固醇测定一、比色法二、酶法三、气相色谱法四、高效液相色谱法五、同位素-稀释质谱法酶测定法特点：

常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。原理

胆固醇酯＋H2O胆固醇＋游离脂肪酸胆固醇＋O2胆烷-4-烯-3-酮＋H2O2H2O2＋4氨基安替比林＋酚醌亚胺＋4H2O

试剂与器材1、酶应用液2、参考血清3、器材试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、恒温水浴箱实验操作取3支试管，按下表操作加入物（ml）测定管标准管空白管待测血清0.02——参考血清—0.02—蒸馏水----0.02酶应用液2.002.002.00混匀，置于37℃水浴箱，放置15分钟，以空白管调零点，在510nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算

测定管吸光度血清胆固醇（mmol/L）=------------------

×

参考胆固醇浓度（mmol/L）

标准管吸光度参考范围3.10~5.70mmol/L评价：主要缺点是：优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。影响TC水平的因素①年龄与性别；②长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高；③遗传因素；④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。【临床意义】病理性高TC血症：见于脂肪肝、肝脏肿瘤、甲状腺功能亢进严重糖尿病、动脉粥样硬化等。病理性低TC血症：见于肝脏疾病如急性肝坏死、肝硬化，甲状腺功能亢进，恶性贫血、溶血性贫血营养不良等第三节血清三脂酰甘油测定简介三酰酯甘油（TG）是由一分子甘油和三分子脂肪酸组成。每一分子三酰酯甘油含有2~3种不同的脂肪酸。血清（浆）甘油三酯的测定方法气相层析高效液相层析红外分光光度法散射比浊法化学法酶法基本操作：（一）化学法分溶抽提-乙酰丙酮显色法1、抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂3、氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸4、显色：甲醛的定量主要有两种方法：①甲醛与变色酸(4，5-二羟-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物②甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶实践步骤加入物（ml）

测定管

对照管

空白管

血清

0.02--

标准液-

0.02-蒸馏水--0.02

抽提液2.52.52.50.04mol/LH2SO40.50.50.5加H2SO4时边加边摇，使其充分混匀，静置分层后分别准确吸取上清液于另外3支试管中上清液0.30.30.3造化剂1.01.01.0

混匀，在56℃恒温水浴箱中保温5min氧化剂1.01.01.0显色剂1.01.01.0混匀后，置60℃水浴20min，取出冷却。用分光光度计在波长415nm处，空白管调零，读取各管吸光度。计算

测定管吸光度血清三酰酯甘油（mmol/L）=-----------------

×

标准液浓度（mmol/L）

标准管吸光度参考范围0.56~1.70mmol/L注意事项1.每加一次试剂需摇匀。2.皂化、氧化与显色的温度和时间对吸光度均有影响，因此，每批标本都需要做标准管。3.以血浆作标本时，应注意抗凝剂的影响，通常用EDTA-Na2.4.标本应及时分离，无论血清、血浆。(二)酶法磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）原理

TG+3H2OLPL

甘油+3脂肪酸

甘油+ATPGK

磷酸甘油+ADP

磷酸甘油+O2

GPO

磷酸二羟丙酮+H2O2

2

H2O2+4-AAP+4-氯酚POD

红色醌类化合物

+4H2OGOP、4-AAP、4-氯酚三者合称PAP，故本法称GPO-PAP法试剂与器材1、三酰酯甘油测定酶试剂2、三酰酯甘油水溶性标准液3、器材试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、

37℃恒温水浴箱。实验操作取3支试管，按下表操作加入物（ml）测定管标准管空白管血清0.01——标准液—0.01—蒸馏水----0.01酶试剂1.001.00

1.00混匀后，置37℃水浴15min，用分光光度计在波长500nm处，空白管调零，读取各管吸光度。计算

测定管吸光度血清三酰酯甘油（mmol/L）=-----------------

×

标准液浓度（mmol/L）

标准管吸光度参考范围0.56~1.70mmol/L注意事项1、标本必须新鲜，4℃放置不宜超过3天，时间过长，游离甘油升高。2、需用空腹血清作标本。3、>11.1mmol/L,需做稀释。临床意义

TG随年龄增长而上升趋势，体重超标往往偏高。正常成人空腹脂肪餐（脂肪1g/kg体重）后，2~4h内血清混浊程度及TG值高峰，8h后恢复正常。脂肪清除率较差者，清除时间延长。病理性升高见于原发性高脂血症、动脉粥样硬化、脂肪肝、其他肝病、糖尿病、肾病综合症、胰腺炎、甲功能减退、妊娠等。病理性降低见于原发性b脂蛋白缺乏症，肝功能严重低下、甲功能亢进、肾上腺皮质功能减退等。第四节血清高密度脂蛋白胆固醇测定概述血清高密度脂蛋白（HDL）是密度最大的脂蛋白，由蛋白质、磷脂、胆固醇及其酯、三酯酰甘油组成。HDL中主要脂类是磷脂，以磷脂酰胆碱最多，胆固醇是HDL中含量占第二位的脂类，酯化和游离的胆固醇之比约3：1HDL所含的蛋白质主要是ApoAⅠ和ApoAⅡ，其中以ApoAⅠ更重要。注意：虽然磷脂部分比胆固醇含量多，但测定胆固醇比测定磷脂更容易，故常以测定HDL-C含量代表HDL水平。高密度脂蛋白测定

超速离心法凝胶过滤层析法免疫化学法电泳法沉淀法临床实验室常用：沉淀法中的林钨酸-镁法林钨酸-镁法原理用磷钨酸与镁离子作沉淀剂，选择性沉淀LDL和VLDL（主要含ApoB），上清液中只含HDL，测定上清液中胆固醇含量。试剂与器材1、沉淀剂2、酶试剂3、参考血清4、器材试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、

37℃恒温水浴箱。实验操作HDL的提取于小离心管中加血清200uI和沉淀剂200uI，混匀，室温（20℃，不得高于30℃）放置15min，然后3000rpm离心15min。取3支试管，按下表操作加入物（ml）测定管标准管空白管上清液0.050——定值血清—0.025—蒸馏水--0.0250.050酶试剂2.002.002.00混匀，置于37℃水浴箱，放置15min，以空白管调零点，在500nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算

测定管吸光度HDL-C（mmol/L）=-----------------×

定值血清胆固醇浓度（mmol/L）

标准管吸光度参考范围成人男性

1.16~1.42mmol/L成人女性1.29~1.55mmol/L注意事项血清严重混浊时IDL和VLDL沉淀不完全，此时用生理盐水将血清做1：1稀释后再行沉淀，测定结果乘以2。血清中高胆红素、维生素C、溶血都会有影响。【临床意义】

HDL-C与冠心病发病呈负相关HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危险因素HDL-C大于1.55mmol/L被认为是冠心病的“负”危险因素

HDL-C下降多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。HDL-C增高往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-C升高。第五节血清低密度脂蛋白胆固醇测定概述低密度脂蛋白（LDL）由极低密度脂蛋白（VLDL）在血浆中转变而来，是空腹血浆中含量最多的脂蛋白，约占脂蛋白总量的1/2以上。LDL中的胆固醇占血浆胆固醇总量的60%~70%,其中胆固醇酯占4/5，故有血浆低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）之称。测定方法LDL-C测定没有决定性方法。目前多采用聚乙烯硫酸（PVS）沉淀法聚乙烯硫酸（PVS）沉淀法空腹血清中主要含有HDL、LDL、VLDL。用聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚选择性地沉淀LDL，离心后上清液中韩HDL、VLD测定出上清液HDL-C和VLDL-C总和。同时测定血清总胆固醇含量。

LDL-C=TC-（HDL-C+VLDL-C）实验操作LDL分离于小离心管中加血清200uI和沉淀剂100uI，混匀，室温（20℃，不得高于30℃）放置15min，然后3000rpm离心15min，取上清液与血清同时测定胆固醇。取3支试管，按下表操作加入物（ml）标准管测定管1测定管2空白管标准液0.03--——上清液--0.03--—血清----0.03--蒸馏水--酶试剂2.00--2.00--2.000.032.00混匀，置于37℃水浴箱，放置5分钟，以空白管调零点，在500nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算

测定管1吸光度上清血清胆固醇浓度=-----------------------×

胆固醇标准液浓度

标准管吸光度

测定管2吸光度总胆固醇浓度=-----------------------×

胆固醇标准液浓度

标准管吸光度上清LDL-C=TC-上清液胆固醇浓度

参考范围40岁以上成人2.70~3.10mmol/L合适水平<3.36mmol/L危险水平>4.41mmol/L【临床意义】

LDL-C水平与冠心病的发病率呈正相关LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。临床上以LDL-C水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标。第六节血清载脂蛋白A1和B测定简介ApoAⅠ

是HDL的主要结构蛋白约占HDL蛋白总量的64%ApoB100

是LDL的主要结构蛋白约占LDL蛋白总量的95%因此，ApoAⅠ和ApoB100可以直接反映HDL和LDL的含量。血清载脂蛋白测定免疫化学法：单向免疫扩散（RID）电免疫分析（如火箭电泳法）放射免疫分析（RIA）酶联免疫吸附分析（ELISA）免疫浊度法等早期目前：目前比较适合于临床实验室的是免疫浊度法，包括免疫散射比浊法（INA）和免疫透射比浊法（ITA）。免疫