第四章 药物定量分析

第四章药物定量分析与

分析方法验证

一、定量分析样品的前处理方法

1．概述（1）含金属或卤素的药物，在分析前需要经过不同方法处理后，方可进行测定。（2）处理方法因金属或卤素在分子中结合的牢固程度而异。（3）而含金属的有机药物，有两种情况：一是金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机药物。二是金属原子直接与碳原子以共价键相连接，结合状态比较牢，称为有机金属药物。2．不经有机破坏的分析方法（1）直接测定法（2）经水解后测定法1)直接回流后测定法

例如：三氯叔丁醇的含量测定（银量法）2)用硫酸水解后测定法

例如：硬脂酸镁含量测定2．不经有机破坏的分析方法（3）经氧化还原后测定法1）碱性还原后测定法卤素结合于芳环上时，由于分子中碘的结合较牢固，需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使碳－碘键断裂，形成无机碘化物后测定。例如：泛影酸含量测定（银量法）

2）酸性还原后测定法例如：碘番酸含量测定（3）经氧化还原后测定法3）利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量（间接碘量法）a．含锑药物

b．含铁药物将含铁药物加酸溶解后，便游离出Fe3＋，利用Fe3＋在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘可用硫代硫酸钠滴定液滴定以测定含量。3．经有机破坏的分析方法条件：含金属有机药物及有机卤素药物结构中的金属原子、卤素与碳原子结合牢固者，用水解或氧化还原后测定方法难以将有机结合的金属原子及卤素转变为无机的金属化合物及卤素化合物。3．经有机破坏的分析方法（1）湿法破坏1）硝酸－高氯酸法破坏能力强，反应比较强烈。故进行破坏时，必须严密注意切勿将容器中的内容物蒸干，以免发生爆炸。适用于血、尿、组织等生物样品的破坏。经本法破坏后，所得的无机金属离子，一般为高价态。对含氮杂环药物的破坏不够完全，此时宜选用干法烧灼进行破坏。3．经有机破坏的分析方法（1）湿法破坏2）硝酸－硫酸法适用于大多数有机物质的破坏，如燃料、中间体或药物等。经本法破坏分解所得的无机金属离子均为高价态。因碱土金属可与硫酸形成不溶性的硫酸盐，将会吸附被测定的金属离子，使测定的结果偏低。所以本法不适用于含碱土金属有机药物的破坏。此时，可改用硝酸－高氯酸法进行破坏。3．经有机破坏的分析方法（1）湿法破坏3）硫酸－硫酸盐法所用硫酸盐为硫酸钾或硫酸钠，因硫酸钠为含水化合物，不利于有机破坏，故一般多采用硫酸钾。加入硫酸盐的目的，是为了提高硫酸的沸点，以使样品破坏完全。同时，也防止硫酸在加热过程中过早地分解为三氧化硫而损失。（1）湿法破坏注意a.湿法破坏所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏烧瓶；b.所用试剂及蒸馏水均不应含有被测金属离子或干扰测定的其它金属离子等组分；c.由于整个操作过程所用矿酸量数倍于样品，所以必须按相同条件进行空白试验校正；d.操作时应在通风櫉内进行。

（2）干法破坏1)将有机物灼烧灰化以达分解的目的。2)应注意的问题a.加热或灼烧时，应控制温度在420℃以下，以防止某些被测金属化合物的挥发。b.灰化完全与否，直接影响测定结果的准确性。c.经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。（2）干法破坏3)适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机药物）以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏。

（3）氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法是将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别，检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。是快速分解有机物的简单方法，它不需要复杂设备，就能够使有机化合物中的待测元素定量分解成离子型。二、定量分析方法特点

1．容量分析法（1）容量分析法是将已知浓度的滴定液（中国药典中称滴定液）由滴定管滴加到待测药物的溶液中，直到所加滴定液与被测药物按化学计量反应完全为止，然后根据滴定液的浓度和消耗的体积，就可以计算出被测药物的含量。（2）容量分析的关键问题是如何确定等当点。（3）容量分析通常用于测定高含量或中含量组分，即被测组分的含量在1％以上。容量分析法比较准确，一般情况下相对误差可达0.2％以下。（4）容量分析法操作简便、快速、比较准确，所用仪器普通易得，在药品检验工作中具有很大的实用价值。（5）容量分析法的计算问题1）滴定度指每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。中国药典用毫克（mg）表示。2）滴定度（T）的计算在容量分析中，被测药物（B）与滴定液（A）之间都按一定的摩尔比进行反应，反应可表示为：2）滴定度（T）的计算滴定度（T）可按下式计算：M－滴定液的摩尔浓度b－被测药物的摩尔数a－滴定液的摩尔数B－被测药物的毫摩尔质量（分子量）3）百分含量计算在测定药物含量时，常用直接滴定法和回滴定法，其计算方法如下：a.直接滴定法用滴定液直接滴定，以求得被测药物的含量。

T－滴定度值W－供试品取量V－消耗滴定液的体积

在实际工作中，所配制的滴定液的摩尔浓度与药典中规定的摩尔浓度不一定恰好符合，此时就不能直接应用药典上所给出的滴定度（T），但只要乘以滴定液浓度校正因数（F）即可换算成实际的滴定度（T’），3）百分含量计算b.回滴定法（剩余滴定法）此法是先加入定量过量的滴定液A，使其与被测药物反应，待此反应进行完全后，再用另一滴定液B来回滴反应中剩余的滴定液A。b.回滴定法I.不做空白试验时百分含量计算方法

（VA×FA-VB×FB）×T含量%=×100%W

VA－先加入的定量过量的滴定液A体积VB－滴定液B消耗体积FA－滴定液A浓度校正因数FB－滴定液B浓度校正因数W－供试品取量T－滴定度II.做空白试验的百分含量计算方法

V0－空白试验消耗硫酸滴定液体积VB－样品测定试验消耗滴定液体积T－滴定度F－滴定液浓度校正因数W－供试品取样量（g）2．光谱分析法（1）紫外－可见分光光度法1）特点紫外－可见分光光度法是根据物质分子对波长为200nm～760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的光谱分析方法。主要特点如下：a.灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml。b.准确度高，相对误差为2％～5％。c.仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。d.应用广泛。

（1）紫外－可见分光光度法2）朗伯－比耳定律

3）仪器校正和检定4）对溶剂的要求5）测定法 a.对照品比较法b.吸收系数法c.计算分光光度法（2）荧光分析法1）特点2）干扰因素的排除3）测定法3．色谱分析法色谱分析法（又称层析法）根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱。又可根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。三、药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定以及制剂中其它成分（如降解产物、防腐剂等）的测定验证内容有：准确度精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）专属性检测限定量限线性范围和耐用性1．准确度准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率（％）表示。（1）含量测定方法的准确度1）原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。2）制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。3）制剂的含量测定（2）数据要求在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，例如制备3个不同浓度的样品，各测定3次。应报告已知加入量的回收率（％），或测定结果平均值与真实值之差及其可信限2．精密度精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。含量测定和杂质定量测定考虑方法的精密度。（1）精密度表示方法1）偏差（deviation，d）a.b.相对误差（relativedeviation，RD）：

若两份平行操作，设A、B为两次测得值，则其相对偏差为：c.最大相对偏差：相对偏差用来表示测定结果的精密度，根据对分析工作的要求不同而制订的最大值（也称“允许差”）。一般，各种含量测定的允许差如下：容量分析法为0.3％；重量分析法为0.5％；凯氏定氮法为1％；氧瓶燃烧法为0.5％；仪器分析法为3％。（1）精密度表示方法2）标准偏差（Standarddeviation，SD或S）

（1）精密度表示方法3）相对标准偏差（relativestandarddeviation，RSD）也称变异系数（coefficientofvariation，CV）（2）重复性、中间精密度及重现性1）重复性a.在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。b.在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，如制备3个不同浓度的样品，各测定3次，或把被测物浓度当作100％，用至少测定6次的结果进行评价。2）中间精密度a.在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。b.为考查随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因素为不同提起、不同分析人员、不同设备。3）重现性a.在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。b.当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。（3）数据要求均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限。3．专属性专属性是指在其它成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考查其专属性。3．专属性（1）鉴别反应应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均应呈负反应。（2）含量测定和杂质测定1）色谱法和其它分离方法，应附代表性图谱，以说明专属性。图中应标明诸成分的位置，色谱法中的分离度应符合要求。2）在杂质可获得的情况