白花败酱草化学成分研究

白花败酱草化学成分研究

白色斑点是白色斑点科植物的白酱汁。全草广泛分布于我国南方省份，药物来源丰富。败酱始载于《神农本草经》,具有清热解毒,利湿排脓,活血化瘀,镇心安神的功效。常用于治疗阑尾炎,肺脓痈,结核瘰疬,痈肿疮毒,肠炎,痢疾,肝炎,扁桃体炎,眼结膜炎,产后瘀血腹痛,咯血,衄血,神经衰弱,心脏神经官能症等。彭金咏等对白花败酱草脂溶性部位化学成分进行了研究。为了充分利用和开发白花败酱草的丰富资源、阐明其药效物质基础尤其是抗肿瘤活性成分,笔者对其成分进行了研究,从其95%乙醇提取物的石油醚和乙酸乙酯萃取物中分离得到了五个化合物,分别鉴定为:熊果酸(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、山柰酚-3-O-β-吡喃半乳糖苷(Ⅲ)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(6-1)-α-L-鼠李糖苷(Ⅳ)和Patrinalloside(Ⅴ)。除化合物Ⅱ外,其它化合物均为从该植物中首次分到。1仪器和检测方法WATERS高效液相(WATERS型RPC18柱(5.0mm×150mm);DAD紫外检测器;日本岛津LIBRORAEC-200型熔点测定仪;Perkin-Elmer577型IR光谱仪;Shell/JB2300型细胞培养箱;DG-3022A型酶联免疫检测仪;柱层析硅胶(200-300目)和GF254为青岛海洋化工厂产品;其余所用试剂均为分析纯。白花败酱购自华东医药有限公司,经浙江中医药大学张如松研究员鉴定为PatriniavillosaJuss.。2熊羧酸的分离纯化取干燥的白花败酱全草7.0kg,加10倍量的95%乙醇加热回流提取3次,每次2h,过滤,减压回收乙醇,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取液减压浓缩,得石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三个萃取部位。其中石油醚部位用硅胶柱分离,以石油醚-乙酸乙酯反复梯度洗脱,根据TLC检测流份,分离得到了熊果酸(Ⅰ)40mg。乙酸乙酯部位用氯仿-甲醇系统梯度洗脱,得到β-谷甾醇(Ⅱ)55mg、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)26mg、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-(6-1)-α-L-鼠李糖苷(Ⅳ)27mg和patrinalloside(Ⅴ)15mg。3半干合成酶系统成像法检测半干合酶系统中dmso-3.将生长旺盛的乳腺癌细胞用胰蛋白酶消化后,调整细胞浓度为2×105个/ml;置于37℃、5%CO2、相对湿度100%培养箱中培养24h后,加入测试药液,继续培养3d后,每孔加5mg/mlMTT溶液(用生理盐水配制),在培养箱中温育4h,每孔加入200μlDMSO,于微量振荡器振荡以使甲臜完全溶解,最后用酶标仪在570nm波长处测吸光度A值,计算其半数抑制浓度IC50。4结果4.1对照品检测rf值化合物Ⅰ:白色结晶性粉末,mp234～236℃,Liebermann-Burchard反应呈紫红色。MSm/z:456(M+),438(M-H2O),423(M-H2O-CH3),410,300,249,248,(100);233,219,207,203(248-COOH),189,133,119,95,81,55,43。1H-NMR(CDCl3)δ:5.29(1H,br,H-12),3.25(1H,m,H-3),1.28(6H,s,2×CH3),1.11(3H,s,CH3),1.01(6H,s,2×CH3),0.96(3H,s,CH3),0.82(6H,d,J=6.5Hz,2×CH3)。13C-NMR(CDCl3)δ:41.9(C-1),27.9(C-2),78.0(C-3),30.5(C-4),55.3(C-5),18.2(C-6),33.0(C-7),41.9(C-8),48.1(C-9),39.0(C-10),23.1(C-11),125.5(C-12),138.2(C-13),47.5(C-14),27.6(C-15),24.0(C-16),48.1(C-17),52.9(C-18),39.4(C-19),39.4(C-20),29.4(C-21),36.7(C-22),23.0(C-23),15.2(C-24),16.5(C-25),18.2(C-26),23.0(C-27),180.4(C-28),16.5(C-29),20.5(C-30)。以上数据与文献报道相符,因此鉴定化合物Ⅰ为熊果酸。化合物Ⅱ:白色片状结晶,mp137～138℃。EI-MSm/z:414[M,100]+,396,330,329,273,255。经与对照品对比较,混合熔点不下降TLC检测Rf值一致。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.67,0.81,0.82,0.85,0.94,1.01(各3H,s,6×Me),3.52(1H,m,3-H),5.35(1H,brs,6-H)。13C-NMR(400MHz,CDCl3)δ:11.9(C-18),12.0(C-29),18.8(C-21),19.1(C-27),19.4(C-19),19.8(C-20),21.1(C-11),23.1(C-28),24.3(C-15),26.1(C-23),28.3(C-16),29.2(C-25),31.7(C-2),31.9(C-7,C-8),36.2(C-22),36.5(C-10),37.3(C-1,C-26),39.8(C-12),42.3(C-13),42.3(C-4),45.9(C-24),50.2(C-9),56.1(C-17),56.8(C-14),71.8(C-3),121.7(C-6),140.8(C-5)。以上数据与文献报道一致,故化合物确定为β-谷甾醇(β-sitosterol)。化合物Ⅲ:黄色针状结晶(甲醇),mp194.0～195.5℃(dec),三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,示有酚羟基存在;盐酸镁粉反应阳性,推测为黄酮类化合物;Molish反应阳性。FAB-MSm/z:447.0([M-H]+,409,307,153(100),64,32。1H-NMR(400MHz,CDCl3):B环质子:δ8.10(2H,d,J=8.0Hz,2′,6′-H)与δ6.90(2H,d,J=9Hz,3′,5′-H):A环质子:δ6.42(1H,d,J=2.0Hz,8-H)与6.18(1H,d,J=2.0Hz,6-H);糖质子:δ5.16(1H,d,J=8.0Hz,C-1″-H),δ4.00～3.32(6H,C2-C6-H)。13C-NMR(400MHz,CDCl3)δ:157.1(C-2),134.2(C-3),178.2(C-4),160.2(C-5),98.5(C-6),164.1(C-7),93.4(C-8),157.7(C-9),103.6(C-10),161.7(C-4′),131.0(C-2′,6′),114.7(C-3′,5′),101.7(C-1″),71.6(C-2″),73.6(C-3″),68.6(C-4″),75.7(C-5″),60.6(C-6″)。以上数据与文献中化合物山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷吻合,故确定其为山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(kaempferol-3-O-β-D-galactopyranoside)。化合物Ⅳ:黄色针晶(甲醇),mp246.0～247.0℃,三氯化铁-铁氰化钾反应阳性,示有酚羟基存在;盐酸镁粉反应阳性,推测为黄酮类化合物;Molish反应阳性,说明为苷类化合物。HRFAB-MS:分子式为C27H30O15,m/z:593([M-H]+,447([M-146]+,153(100),64。化合物Ⅳ与Ⅲ相比,质谱中具有447([M-146]+,氢谱及碳谱中也均多出一个甲基五碳糖,同时与化合物Ⅲ中的半乳糖碳谱数据相比C-6向低场位移至66.0,C-5略微向高场位移至74.0,说明甲基五碳糖连接于半乳糖的C-6位,甲基五碳糖碳谱数据与文献中鼠李糖一致,氢谱中甲基五碳糖端基氢化学位移为4.54(1H,s),端基碳构型为α型,通过HMBC证明半乳糖连于山柰酚的C-3位,故而化合物Ⅳ为山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖(6-1)-α-L-鼠李糖苷,通过1H-1HCOSY、HSQC及HMBC对化合物Ⅳ的氢谱和碳谱数据进行了归属。13C-NMR(400MHz,CD3OD)δ:158.0(C-2),134.3(C-3),178.1(C-4),161.6(C-5),98.6(C-6),164.7(C-7),93.5(C-8),157.1(C-9),104.1(C-10),121.3(C-1′),131.1(C-2′,6′),114.7(C-3′,5′),160.3(C-4′);半乳糖:104.1(C-1″),71.6(C-2″),73.7(C-3″),68.8(C-4″),74.0(C-5″),66.0(C-6″);鼠李糖:100.5(C-1ue087),70.7(C-2ue087),70.9(C-3ue087),72.5(C-4ue087),68.3(C-5ue087),16.6(C-6ue087)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:6.23(1H,d,J=2.0Hz,H-6),6.42(1H,d,J=2.0Hz,H-8),8.11(2H,d,J=8.0Hz,H-2′,6′),6.91(2H,d,J=8.0Hz,H-3′,5′),5.06(1H,d,J=8.0Hz,gal-H-1″),4.54(1H,s,rha-H-1ue087),4.00～3.32(10H,gal-H-2″-H-6″andrha-H-2″-H-5″),1.20(3H,d,J=6.5Hz,rha-C5ue087-CH3)。化合物Ⅴ:白色结晶(氯仿-甲醇),mp63℃,与氨基酸共同加热形成蓝紫色沉淀;与Shear试剂反应,产生紫色然后变成棕色。FAB-MSC21H34O11m/z:462(M+),377,298.1,299.1。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.35(s,H-3),6.19(d,J=4Hz,H-1),4.58(d,J=8Hz,H-1′),4.33(m,H-7),4.12(J=12Hz,2H-11),3.94(t,J=3Hz,H-3′),3.85(dd,J=1.7,11.0Hz,H-6′),3.80(dd,J=7.4,11.0Hz,1H-10),3.71(dd,ABX,J=5.6,10.9Hz,H-6′),3.47(dd,J=3.0,9.4Hz,H-4′),3.22(m,H-5),2.23(-CH2-),2.22(dt,J=5.3,8.6Hz,H-9),2.03-2.09(m,2H,H-6,-CH<),2.02(m,H-8),2.00(m,H-6),0.96(d,J=6.6Hz,XH,2X)。13C-NMR(400MHz,CDCl3)δ171.1(C=O),139.9(C-3),115.6(C-4),102.2(C-1′),91.9(C-1),74