牛黄解毒片的综合质量检测（中药制剂检测课件）

牛黄解毒片的综合质量检测【实训目的】1.能依据《中国药典》对六味地黄丸进行全面检验。2.能判断六味地黄丸的质量状况，能正确填写相关检验原始记录及检验报告单。【实训内容】（一）实训用品1.仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）、超声波提取器、C18色谱柱、微量注射器（10μl）、电子天平、水浴锅、分液漏斗、蒸发皿、乳钵、硅胶G薄层板、展开缸、古蔡法测砷装置等。试剂：标准砷试液（lμgAs/ml）、碘化钾试液、酸性氯化亚锡试液、醋酸铅棉花、锌粒、溴化荥试纸、正己烷、乙酸乙酯、甲醇、醋酸、1%香草醛硫酸、三氯甲烷、乙醇、10%硫酸乙醇、乙醚、石油醚、甲酸乙酯、甲酸丁酮、甲酸、甲醇（色谱纯）、磷酸等。3.材料：牛黄解毒片、胆酸对照品、大黄对照药材、黄芩苷对照品、大黄素对照品。（二）实训方法牛黄解毒片由人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草八味中药制成的素片、糖衣片或薄膜衣片。本实训依据《中国药典》利用显微鉴别方法观察大黄、雄黄的显微特征；利用冰片的升华特性进行鉴别；使用胆酸对照品、大黄对照药材、大黄素对照品、黄芩苷对照品进行薄层色谱鉴别；牛黄解毒片中含有雄黄，主要成分As2S2，为保证制剂的安全性，要对制剂进行砷盐检。依据制剂通则中有关片剂项下的规定，进行重量差异、崩解时限等检查；利用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量。（三）实训步骤1.查阅资料，设计方案查阅《中国药典》正文566-567页及相应附录部分，设计检验方案。2.取样按检验要求取样，并记录品名、批号、规格、数量、来源等内容。然后根据需要进行适宜处理。一般片剂成品取样量200片，未成片前可取已制成的颗粒100g。3.性状素片或除去包衣后的包衣片显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。4.鉴别（1）显微鉴别：取本品2~3片，刮去包衣，置乳钵中研细；或用刀片直接从药片断面刮取少量粉末，按粉末制片法装片观察，应有以下特征：草酸钙簇晶大，直径60~140μm（检大黄）。不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽（检雄黄）。（2）冰片的升华鉴别：取本品1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴，液滴边缘渐显玫瑰红色。（2）牡丹皮中丹皮酚的TLC鉴别：①供试品溶液的制备：取本品水蜜丸6g，研细；或取小蜜丸或大蜜丸9g，剪碎，加硅藻土4g，研。加乙醚40ml，回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，即得。②对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含lmg的溶液，即得。③薄层色谱：吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。④结果判断：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。5.常规检查（1）水分：取六味地黄丸25g，破碎成碎片，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100~105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置于干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算六味地黄丸中含水量（％），不得过12.0%（水蜜丸）或15.0%（小蜜丸或大蜜丸）。（2）重量差异：①大蜜丸：以本品1丸为1份，取供试品10份，分别称定重量，再与标示重量相比较（9g），超出±6%的不得多于2份，并不得有1份超出±12%。②水蜜丸或小蜜丸：以本品10丸为1份，取10份，分别称定重量，再与每份标示重量相比较，超出±6%不得多于2份，并不得有1份超出±12%。（3）装量：取六味地黄丸5个完整包装，除去外盖和标签，容器外壁用适宜的方法清洁并干燥，分别称定重量，除去内容物，容器用适宜的溶剂洗净并干燥，再分别称定空容器的重量，求出每个容器内容物的装量与平均装量。平均装量不得少于标示装量，且每个容器装量不得少于标示装量的97%。如有1个容器装量不符合规定，则另取3个复试，均应符合规定。（4）溶散时限：取六味地黄丸6丸，分别置于升降崩解仪吊篮的玻璃管中，加挡板，启动崩解仪进行检，应在1小时内全部溶散且通过筛网。如有1丸不能完全溶散，应另取6丸复试，均应符合规定。如果供试品黏附挡板，应另取6丸，不加挡板按上述方法检，应符合规定。（5）微生物限度：按微生物限度检法依法检查，应符合下列规定：①细菌数：每lg不得过30000cfu。②霉菌和酵母菌数：每lg不得过100cfu。③大肠埃希菌：每lg不得检出。④大肠菌群：每lg应小于100个。⑤霉变、长螨者以不合格论。6.含量测定按高效液相色谱法测定。（1）山茱萸1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87）为流动相；检测波长为236nm；柱温40℃。理论板数按马钱苷峰计算应不低于4000

2）对照品溶液的制备：取马钱苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。（3）雄黄的TLC鉴别：①供试品溶液的制备：取本品2片，研细，加三氯甲烷10ml研细，滤过，滤液蒸干，加乙醇0.5ml使溶解。②对照品溶液的制备：取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄层色谱：吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20：25：3：2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热约10分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。④结果判断：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（4）大黄的TLC鉴别：①供试品溶液的制备：取本品1片，研细，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，加盐酸1ml，加热回流30分钟，放冷，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解。②对照品溶液的制备：取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄层色谱：吸取上述三种溶液各40，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。④结果判断：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。（5）黄芩的TLC鉴别：①供试品溶液的制备：取本品4片，研细，加乙醚30ml，超声处理15分钟，滤过，弃去乙醚，滤渣挥尽乙醚，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，加热使溶解，滴加盐酸调节pH至2~3，加乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解。②对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液。③薄层色谱：吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。④结果判断：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.检查（1）砷盐检查：测试前，先于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60~80mm）；再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面为宜），盖上旋塞正并旋紧，即得。1）标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25~40℃水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。2）供试品的制备：取本品适量（包衣片除去包衣），研细，精密称取1.52g，加稀盐酸20ml，时时搅拌1小时，滤过，残渣用稀盐酸洗涤2次，每次10ml，搅拌10分钟。洗液与滤液合并，置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取2ml，加盐酸5ml与水21ml，照标准砷斑的制备，自“再加化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。（2）重量差异检查：按重量差异法操作，标示片重（或平均片重）在0.3g以下的片剂，重量差异限度为±7.5%，标示片重（或平均片重）在0.3g或0.3g以上的片剂，重量差异限度为±5%；超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度一倍。（3）崩解时限检查：照崩解时限检查法检，药材原粉片各片均应在30分钟内全部崩解；浸膏（半浸膏）片、糖衣片各片均应在1小时内全部崩解。微生物限度检查：按微生物限度检查法依法检，应符合下列规定：①细菌数：lg不得过30000cfu。②霉菌和酵母菌数：每lg不得过100cfu。③大肠菌群：每lg不超过100个。④大肠埃希菌、沙门菌不得检出。6.黄芩苷的含量测定用高效液相色谱法测定。（1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）为流动相；检测波长为315nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。（2）对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含30网的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品20片（包衣片除去包衣），精密称定，研细，混匀，取6g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇30ml，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。【实训注意】1.升华法鉴别时，样品粉末一般为0.5g，过少不易产生足够的升华物。2.砷盐检查时，反应温度一般控制在25℃之间，时间为45分钟。冬季气温低，可置温水浴中进行反应。如反应太快，则宜适当降低反应温度，使砷化氢气体能被均匀吸收。制备标准砷斑或标准砷对照液，应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定，反应中应保持干燥及避光，并立即比较。标准砷溶液应于实训当天配制，标准砷贮备液存放时间不宜超过一年。砷盐检查时，浸入乙醇制溴化汞试液的滤纸的质量，对生成砷斑的色泽有影。必须选用质量较好、组织疏松的中速定量滤纸，以使所显砷斑色调鲜明，梯度规律。不宜使用定性滤纸，否则所显砷斑色暗，深浅梯度无规律；溴化汞试纸宜新鲜制备。砷盐检查时，《中国药典》规定标准砷斑为2ml标准砷溶液（相当于2μg的砷）所形成的色斑。供试品规定含砷限量不同时，采用改变供试品取用量的方法来适应要求，而不采用改变标准砷溶液取量的方法。1.HPLC中常用的定量方法有几种？外标法、内标法定量时有何优缺点？2.砷盐检的原理是什么？加入KI、SnCl2、Pb(Ac)2棉花的作用是什么？【实训思考】记录实训现象及检验结果，分析实训现象并将检验结果与药品标准相比较，判断供试品是否符合规定。【实训报告】【实训评价】考核内容