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文档简介
一、药物分析方法学的建立1、标准曲线的绘制:取标准品10mg(实际称取量为9.5mg),加入10ml容量瓶中,以甲醇为稀释剂,定容至刻度,定容后即为1mg/mL的标准品溶液。从中取10、25、50、100uL,以甲醇为稀释剂,分别定容至10mL,HPLC测定含量(色谱条件在后面叙述),然后得到线性回归方程。由曲线可知,在0.95〜9.5ug/mL范围内,线性关系良好,且吸收无干扰。y=52.14x-16.86740FlavopiridolConcentration(ug/mL)40FlavopiridolConcentration(ug/mL)图1标准曲线2、 HPLC色谱条件:流动相为A:Water(0.05%TFA):B:Acetonitrile=7:3;流速为1mL/min;检测波长为264nm;进样量为20uL;最大压力200bar;柱温为室温。3、 HPLC测定图谱aVWDA波长264nm(IEF_LC2012-(4-12VWDA波长264nm(IEF_LC2012-(4-129令17\皿(701£mAJ2502D1510050VW1A波长=64nm(D_C212&C5tl-3l-3\CB3_(301.DmAJ35251.5Q57750PLGA微球mnVW1A波长=64nm(D_C212&C5tl-3l-3\CB3_(301.DmAJ35251.5Q57750PLGA微球mnVW1A波长=64rm(D_C2312-06-(511-31-301-0101.D)0N6mn图2 HPLC色谱图:a)为Flavopiridol标准品的图谱;b)为Flavopiridol的PLGA微球的图谱;c)为空白PLGA微球的图谱由图谱可知,在Flavopiridol的出峰时间处,无空白干扰。二、药物的PLGA微球制备1、 配制PVA17-88的水溶液(1%);2、 取100mgPLGA(LA/GA=50/50,分子量5.5万),溶于1mL的氯仿中;另取10mg药物,加入此氯仿中,加入10uL三乙胺,静置10min,观察是否溶解,若不溶解继续加5uL即可。3、 在1000rpm不停搅拌下,取上述氯仿溶液,逐滴加于含PVA17-88的水溶液中,水溶液的体积是氯仿体积的25倍,加完后,高速(7000rpm)均质15s。转移至通风橱中,继续搅拌(600rpm)2min后,补加等体积蒸馏水,继续搅拌4h。4、 待氯仿挥发完后,取溶液高速离心(15000rpm,温度4度)10min,加适量蒸馏水分散后,冻干。三、制剂的表征
1、粒径取5.8mg制剂溶于5mL氯仿中,水浴超声使分散均匀,然后测定粒径Z-AVERAGESIZE(nm)
1080PEAK(nm)Z-AVERAGESIZE(nm)
1080PEAK(nm)867PDI0.0632、含量测定称取制剂11.5mg,置于10mL容量瓶中,以氯仿定容至刻度,HPLC测定含量。计算得知,此溶液浓度为32.80ug/mL,载药量为2.85%。3、释放准确称量制剂10mg,以1mLpH7.4的PBS溶液分散后转移至透析袋中。然后将透析袋置于含40mLpH7.4的PBS溶液(含0.1%的Tween-8O)的离心管中,恒温振荡(37度,50rpm)。取样时间点为2h,4h,6h,8h,12h,24h,
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