肿瘤单克隆抗体的制备

人源化单克隆抗体Byhyglixgroup人源化单克隆抗体是什么？分类方法：人源化抗体就是指抗体的可变区部分（即Vh和Vl区）或抗体所有全部由人类抗体基因所编码。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应人源化抗体包括嵌合抗体、移植抗体和全人源化抗体等几类。基因工程抗体目的：保留抗体的抗原结合能力、易于大规模生产、减小鼠源性成分，增加人源化，可用于临床。基本原理：借助于基因工程手段，将编码Ab的重轻链可变区基因重组到真核或原核表达载体上并进行表达。国外市场情况：单克隆抗体，90年代后期上市以来，经过多年的开发，终于在某些疾病的治疗上取得突破。抗体进入临床研究，其中16个已进入市场，2002年销售额达29亿美元，预计2005年将达近90亿美元。根据商业通讯公司预测，2002年全球治疗与诊断用抗体市场为73亿美元，预计将以每年16.6%的平均速度增长，到2007年可达到157亿美元。2001年诊断用抗体市场为4.41亿美元。人源化单克隆抗体的临床应用在肿瘤治疗方面的应用在器官移植中的应用在自身免疫性疾病方面的应用未来发展方向目前，抗体人源化方法还在不断发展和晚上，目标是提高抗体亲和力、降低抗体异原性，同时兼顾抗体的免疫活化作用。另外，针对不同的异源抗体。选择合适的人源化途径构建更适合于临床应用的人源化抗体，将为新药的开发和一些顽固的治疗开辟新的途径。恒定区人源化可变区人源化利用抗体库技术获得完全人源序列发展嵌合抗体选择或剪切效

应基因减少了HAMS……CDR移植Ab1、模板替换2、表面重塑3、补偿变换4、定位保留全人源化抗体恒定区人源化--鼠/人嵌合抗体（chimericantibody）表达产物——嵌合抗体的纯化

以A蛋白包被的小珠通过吸附和解吸过程来纯化抗体,这种A蛋白可牢固地结合于免疫球蛋白重链Fc段第二和第三恒定区。并非所有免疫球蛋白对A蛋白的亲和力都相同在纯化抗体前,必须采用商品化的抗Fc段同种型免疫学试剂先行测定其重链所属的类型,如抗体属于对A蛋白亲和力弱的一类(如人的IgG3),就必须使用其他方法。嵌合抗体检测Western印迹法是检测抗体的常用方法。此种技术是把电泳分离的蛋白组分从凝胶转移至一种固相支持体,并以针对特定的氨基酸序列的特异性试剂检测之。对于嵌合抗体来说,通常使用的探针为抗体。完全人源性单克隆抗体1，筛肿瘤特异性抗原：（1）利用T细胞筛内源性抗原（2）利用Hu-PBL-SciD小鼠筛抗体结合抗原,2，抗体制备及构建抗体库技术：（1）合成抗体库技术及小鼠转基因技术（2）核糖体展示技术（3）噬菌体抗体库技术3，筛选技术及表达（1）亲和筛选（immobilizedpanning)（2）捕获法(capturepanning)（3）完整细胞淘洗(wholecellpanning)

筛选肿瘤抗原

1，利用T细胞筛选抗原

Pre-T细胞

混合培养以诱导CTL CTL细胞肿瘤细胞

杀伤与否

CDNA文库

转染的细胞

2，SCID小鼠筛选抗原SCID小鼠肿瘤细胞构建HU-PBL-SCID小鼠能否免疫应答淋巴细胞B淋巴细胞肿瘤细胞CDNA文库免疫抗原转染表达MHCI类的靶细胞特异抗体制备及

1，合成抗体库及小鼠转基因技术（一）合成抗体(Syntheticantibodylibrary)。1，在对人或鼠抗体序列和主体结构进行分析的基础上,合成多条VH和VL基因,用来替代所有的抗体类别和结构,组成多个总抗体