兔脑磷脂抗炎免疫药理研究

兔脑磷脂抗炎免疫药理研究

动物饲养的本质是务夫ricu家蚕。近年证明兔脑制剂有促凝血、促血小板增生和抗50Co辐射所致血小板减少等功能。临床试用于血小板减少性出血和外用止血疗效显著。本文研究了兔脑磷脂的抗炎免疫药理作用。1样品与药物的配制新鲜兔脑剔除脑膜和血块,匀浆后,用丙酮脱水去胆固醇,再用乙醚反复提取得兔脑磷脂(RBP),RBP经冷热乙醇分离得卵磷脂(L)和脑磷脂(C)。RBP、L和C分别以乙醇制成乳剂供实验用。地塞米松(DX):河北秦皇岛制药厂,批号:900205。强的松龙(HP):浙江仙居制药厂,批号:9107175。左旋咪唑(LMS):山东莒南制药厂,批号:910902。cGMP药盒和3H-TdR:中国科学院原子能研究所产。LACA小鼠,BALA/C小鼠,20士2g♂♀兼用,Wistar大鼠,180±10g♂。实验动物均由潍坊医学院实验动物中心提供。2方法和结果2.1关于炎症模型的影响2.1.1l-1角叉菜胶0.0.0.2ml时取健康大鼠60只,按附图分6组,给药后1h,参考文献方法,测定各鼠sc10g·L-1角叉菜胶0.1ml前与1、2、4和5h足爪容积。结果表明,不同剂量的RBP及L、C、DX均显示明显抗角叉菜胶性炎症作用(P<0.05或P<0.01),RBP抗角叉菜胶性炎症作用依剂量增加而增强(P<0.01)。2.1.2皮肤染色面积和染料渗出量测定大鼠40只,依表1分组,ip各药lh后,参考文献方法,iv10g·L-1曲利本蓝2ml·kg-1,并sc组胺0.1mg·只-1,30min后处死动物,测皮肤染色面积和染料渗出量。结果表明,不同剂量RBP和DX均明显减少染色面积和染料渗出量(P<0.01)。2.1.3致炎侧耳廓与对侧耳廓重量差值的测定LACA小鼠40只,分、4组,分别ipNS、2.5mg·kg-1DX,100mg·kg-1和200mg·kg-1RBP1h后,参考文献方法,测定致炎侧耳廓(█7mm打孔称重)与对侧耳廓重量差值,分别为4.60±1.39(x±s),0.80±0.46,2.03±0.76与1.53±0.98mg。结果表明,DX和不同剂量RBP均明显减轻小鼠巴豆油性耳廓肿(P<0.01)。2.1.4伊文氏蓝的渗出量小鼠40只,分组与剂量同上,分别scNS,DX,二种剂量RBP,1h后参照文献方法,测定腹腔液中伊文氏蓝的渗出量,分为4.87±1.73(x±s),1.24±0.96,1.80±0.96和1.59±0.77mg·L-1。结果表明,二种剂量RBP和DX均明显减少小鼠腹腔染料的渗出量(P<0.01)。2.1.5肉芽干重的测定大鼠40只,分4组,参考文献方法,各鼠皮下植入30±1mg灭菌棉球2枚,分别ipNS,2.5mg·kg-1·d-1DX和100、200mg·kg-1·d-1RBP,于d7取出肉芽,按mg·kg-1体重算得肉芽干重,分别为629±221,419±228,705±177与833±299mg·kg-1。结果表明,DX有减轻肉芽肿作用(P<0.01),但两种剂量RBP对肉芽肿干重均无影响(P>0.05)。2.2影响小鼠吞咽细胞功能2.2.1小鼠碳粒廓清率测定LACA小鼠40只,按表2分组,参考文献方法,测定小鼠碳粒廓清率。结果表明,不同剂量RBP和LMS组的廓清指数K和吞噬系数α均明显高于NS组(P<0.01)。2.2.2对正常小鼠咀嚼功能的影响只,分4组scNS,2.5mg·kg-1·d-1DX,200mg·kg-1·d-1RBP和DX+RBP,4d后按文献方法测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率(%)和吞噬指数,依次为41.3±3.9,23.3±1.8,88.9±3.1,82.5±2.9和0.43±0.05,0.25±0.02,1.00±0.07,0.92±0.04。结果表明DX抑制吞噬功能明显(P<0.01),RBP有提高正常小鼠吞噬功能作用(P<0.01),且RBP还可提高吞噬功能受抑小鼠的吞噬功能,使其达正常水平之上(P<0.01)。2.3对小鼠免疫功能的影响BALA/C小鼠40只,scNS,im100mg·kg-1·d-1RBP,sc5mg·kg-1·d-1HP,RBP+HP,连续给药7d,各组于d3,ip50g·L-1SRBC0.2ml·只-1。2.3.1对正常小鼠脾重的影响于d9处死小鼠称各组脾重,结果见表3。结果表明,RBP对正常小鼠脾重无影响(P>O.05),但RBP可增加免疫受抑小鼠脾重(与HP组比较P<0.05)。2.3.2x+rbp组3h-tdr的cpm值参照文献方法,测得NS,RBP,DX和DX+RBP组3H-TdR的cpm值(见表3)。结果表明,RBP可分别提高正常和免疫受抑小鼠脾淋巴细胞的转化率(P<0.05)。2.3.3对正常和免疫受抑小鼠溶血素抗体的抑制率按文献方法,测定小鼠脾细胞介导溶血素生成的HC50值(见表3),结果表明,RBP可提高正常和免疫受抑小鼠溶血素抗体的生成(P<0.01)。2.3.4降血酸含量hp对免疫受抑小鼠肝脏内镜内镜cmp含量的影响依放射免疫法测定NS组,HP组和RBP+HP组小鼠肝细胞cGMP含量(见表3),结果表明HP降低肝细胞cGMP含量(P<0.05),而RBP可提高免疫受抑小鼠肝细胞cGMP含量(与HP组比较P<0.05.与NS组比较P<0.05)。2.4lgl-lrbp对巴细胞增殖的影响取13名健康成人静脉血在体外加入0.1～100mg·L-1RBP,以3H-TdR掺入法观察PHA诱导淋巴细胞增殖反应。0.1,lmg·L-lRBP的cpm值明显高于空白对照(见表4,P<0.05),表明0.1,1mg·L-1RBP有促进淋巴细胞转化作用,但100mg·L-1RBP则抑制淋巴细胞转化(P<0.01)。1mg·L-1RBP促进淋巴细胞始于48h,72～120h促进转化作用尤为显著。3rabp对aa的影响本研究发现RBP及L,C有抗急性渗出性炎症作用,为兔脑用于治疗冻疮、火伤、痈疽热疖恶疮提供了理论依据。RBP抗急性炎症的机制可能与影响花生四烯酸(AA)代谢有关,因磷脂在磷脂酶A2作用下生成AA,进一步在环氧酶和脂氧酶作用下生成有致炎作用的前列腺素和白三烯,至于RBP如何影响AA尚待探讨。本研究证明RBP有提高正常和免疫受抑动物吞噬细胞功能,体液和细胞免疫功能,并提高免疫受抑动物肝细胞cGMP含量,体外促进或抑制人