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文档简介

应用RT-PCR技术检测AFP在转录水平上的的表达情况实验目的通过RT-PCR技术，AFP的mRNA在反转录酶的作用下，以mRNA为模版合成cDNA,再以此cDNA为模版进行PCR反应甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,

AFP)是肿瘤相关的胚胎特异α-球蛋白,分子量约为70

kDa，是一直以来都被认为是临床诊断胎儿出生缺陷和肝细胞癌的经典肿瘤标志物。

AFP基因的DNA结构AFP基因约为20

kbp大小,

由15个内含子和14个外显子组成,

包含590个氨基酸,

其中在N末端有19个氨基酸是信号肽序列,

AFP蛋白质的分子量约70

kDa.

AFP被归类于白蛋白基因超家族,

这个家族的结构特点为:

由半胱氨基酸残基,

通过二硫键结合,

内折成一个环,

形一个U形的3级结构域.

这些分子,

通过晶体X-射线结果确定都含有3个结构域。甲胎蛋白的基因序列实验方法：

RT-PCR技术

RT-PCR（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）即逆转录PCR，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

另：荧光PCR技术实验原理原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。试验技术路线1、

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