毛细管电泳法快速测定齐墩果酸片的含量

毛细管电泳法快速测定齐墩果酸片的含量【摘要】目的建立快速测定齐墩果酸片含量的方法。方法采用毛细管电泳法，未涂层弹性石英毛细管；压力进样，压力：kPa；进样时间：5s；分离电压：25kV；柱温：25℃；检测波长：200nm；运行缓冲液：含5％甲醇的20mmol·L-1硼砂溶液(pH)；运行时间：10min。结果齐墩果酸的线性范围为～660μg·mL-1，平均回收率为%，RSD为%(n=6)。结论方法准确、快速、简便，适于齐墩果酸片的含量测定。

【关键词】齐墩果酸片毛细管电泳含量测定

Abstract:ObjectiveToestablishanHPCEmethodforrapidmonitoringthecontentofoleanolicacidinoleanolicacidtablets.MethodsSampleswereanalyzedonafusedanduncoatedsiliccapillaryof75μm×50cm(40cmofeffectivelength).20mmol·L-1ofboraxcontaining5%methanolwasusedasrunningbuffer.Sampleswereinjectedhydrodynamically(5s,kPa)intothecapillary.Theappliedvoltagewas25kVandthedetectionwavelengthwassetat200nm.Thetemperaturewaskeptat25℃.Therunningtimewas10min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeofμg·mL-1(r=)foroleanolicacid.Theaveragerecovery(n=6)was%withRSD%.ConclusionThismethodisaccurate,rapid,andsimpleforthecontentdeterminationofoleanolicacid.

Keywords:oleanolicacidtablet;HPCE;contentdetermination

齐墩果酸片具有护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤等作用，上除广泛于急、慢性肝炎的辅助治疗外，也用于配合肿瘤病人的手术、放疗、化疗，促进免疫功能恢复以及再生障碍性贫血、红斑狼疮等免疫缺陷性疾病。目前国内有许多厂家生产齐墩果酸片，生产上采用酸碱非水滴定法［1］测定其含量，但该方法终点不易掌握，专属性差，误差较大。也有采用比色法［2］、薄层扫描法［3］、HPLC法［4］等测定齐墩果酸片的含量，但以上方法均存在费时长、样品用量多、操作繁琐等问题。而毛细管电泳法具有高效、快速、准确、操作简便、样品用量少等优点，适合快速分析样品［5］。笔者采用毛细管电泳测定齐墩果酸片中有效成分的含量，结果方法快速、灵敏、简便、结果准确。

1仪器与试药

俄罗斯LumexCAPEL105型毛细管电泳仪，紫外检测器，弹性石英毛细管。

齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供；齐墩果酸片；硼砂、硼酸、乙醇、甲醇、乙腈均为分析纯，实验用水为重蒸水。

2方法与结果

分离条件

进样方式，压力进样，压力kPa，进样5s；分离电压为25kV；柱温25℃；紫外检测波长200nm；以含5％甲醇的20mmol·L-1硼砂溶液(pH)为运行缓冲液。实验前，毛细管依次用mol·L-1盐酸、重蒸水、mol·L-1NaOH溶液、重蒸水各冲洗5min，然后用运行缓冲液冲洗3min。在每2次运行之间，毛细管用mol·L-1NaOH溶液冲洗2min，重蒸水和运行缓冲液各冲洗3min。试验前运行缓冲液用μm滤膜过滤和超声波脱气。齐墩果酸对照品和齐墩果酸片样品的色谱见图1。

A.齐墩果酸对照品;B.齐墩果酸片样品;C.阴性样品;1.齐墩果酸

图1毛细管电泳图

Figure1CEchromatograms

溶液制备

对照品储备液的制备精密称取齐墩果酸对照品mg于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，以μm滤膜过滤，即得。

供试品溶液的制备取供试品20片精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于齐墩果酸20mg)置100mL量瓶中，加甲醇约60mL，超声30min，放冷，加甲醇定容刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。实验前样品溶液经μm滤膜过滤，备用。

线性关系

精密量取不同体积“”项下的齐墩果酸对照品储备液，分别加甲醇制得质量浓度为、、、、165、330、660μg·mL-1的一系列对照品溶液，进样测定，以峰面积积分值为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：A=ρ+，r=7。表明齐墩果酸在～660μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。

精密度试验

取质量浓度330μg·mL-1齐墩果酸对照品溶液连续进样6次，结果峰面积积分值的RSD为％，表明精密度良好。

稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0、4、8、24、72h进样，记录色谱，结果峰面积积分值的RSD为%，表明样品溶液在72h内稳定。

重复性试验

取同一批号样品，照“”项下的方法制备6份供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，结果齐墩果酸平均含量为标示量的%，RSD为%，表明方法重复性良好。

加样回收率试验

精密称取6份已知含量的供试品细粉适量(相当于齐墩果酸10mg)，加入齐墩果酸对照品约mg，按“”项下的方法制备溶液，进样测定，计算回收率，结果齐墩果酸的平均加样回收率为%(n=6)，RSD为%,见表1。

最低检出限和定量限

当信噪比为3时，最低检出限为μg·mL-1；当信噪比为10时，定量限为μg·mL-1。

样品测定

取3个不同批号的齐墩果酸片，按“”项下方法制备溶液，依上述色谱条件进样测定，3批样品的测定结果分别为标示量的%、%、%

Table1Resultsofrecovery(n=6)

3讨论

比较了磷酸盐、磷酸盐硼砂、硼砂硼酸等多种缓冲体系及其浓度对分离效果的影响。结果发现，20mmol·L-1的硼砂缓冲溶液体系，电泳电流较小，基线平稳，齐墩果酸出峰快(min)，信号灵敏度高。故选择20mmol·L-1的硼砂作为背景电解质溶液比较理想。

为改善峰形和提高检测灵敏度，实验添加了适量的有机溶剂。比较了添加不同有机溶剂种类(甲醇、乙醇、乙腈)及体积比例对分离检测的影响。结果表明选用体积分数为％甲醇作为添加剂可有效提高分离度和灵敏度。

齐墩果酸片收载于《卫生部药品标准》二部第三册，含量测定采用酸碱滴定法，用乙醇制氢氧化钾滴定液，其配制较繁琐，测定终点不明显；采用HPLCUV检测时，由于齐墩果酸为五环三萜类成分，在200nm处有末端吸收，测定结果受流动相影响大，基线不理想，检测灵敏度较低；毛细管电泳具有快速、准确、操作简便、样品用量少等优势，本实验中，样品的测定在5min内就能完成，且能克服HPLC法紫外末端检测的不足。

本实验同时采用卫生部药品标准收载的酸碱滴定法和HPLCUV法测定3批样品中的齐墩果酸含量，测得的结果分别为%、%、%和%、%、%。说明酸碱滴定法测定的结果偏高，毛细管电泳法测定的结果与HPLC法测定的结果接近，表明本方法的准确性可靠。

【参考文献】

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准二部：3册［M］.北京：化学工业出版社，1994：19.

［2］邓世星,孙志勇,周卿,等.紫外光谱法测定齐墩果酸含量［J］.遵义院学报，2003,26(6):556-557.

［3］都述虎,饶金华,耿