2D电泳及质谱鉴定技术服务

2D----生工带您走进蛋白质组学时代试验原理：1、双向凝胶电泳是将不同种类的蛋白质依据等电点和分子量差异进展高区分率分别的分析方法2023到3000种蛋白质进展分别，是目前唯一的同时能分别成百上千种蛋白质的工具。通过对蛋白质双向电泳的图谱扫描，用相关软件〔ImageMaster等〕进展图谱差异分析，找到差异点。然后把差异点切出，进展脱色、酶解。最终样品进入质谱测试，得到质谱原始数据文件。通过搜库可得到差异蛋白质的具体信息。2、ABI4800串联质谱〔MALDI-TOF-TOF-MS〕是目前对SDS-2D解后进展鉴定最常用的质谱，它在肽指纹图谱(一级质谱)的根底上选择强度最大的10个峰进展进展二级质谱，对肽段碎片的分子量准确测定GPS3.AppliedBiosystem和Mascot2.1(MatrixScience)对质谱数据进展分析和蛋白鉴定。其供给的专一性信息丰富，对于数据库的检索，特别是对数据量丰富、冗余信息多的数据库的检索，其鉴定结果比肽指纹图谱牢靠的多，该ABI4800也可以不经过酶解直接对蛋白进展分子量经典蛋白质组学争论策略主要步骤：1、样品制备〔蛋白提取：主要包括植物、动物细胞或组织等的裂开、离心以及定量。2、第一向IEF3、其次向SDS-4、硝酸银染色或考马斯亮蓝染色。5、图像分析及数据处理。6、供给双向电泳的正式试验报告。7、选取感兴趣的蛋白点进展酶解。8、对酶解后蛋白进展质谱技术分析Maldi-Tof-Tof/M。9、供给质谱的正式试验报告。所需仪器：IPG-PhorIII实例分析：

GERubySE600 ImageScanner Maldi-Tof-Tof内皮细胞诱导前后蛋白变化量及差异蛋白分析供给结果：蛋白定量信息一份预试验报告一份胶图扫描结果图片〔预试验+正式试验〕ImageMaster〔差异点列表、差异点对应位置图、组内差异点强度柱状图及组内差异点强度列表〕正试验报告一份Maldi-Tof-Tof/MS〔成功率、库信息、蛋白查库结果等〕样品要求：3、样品需为可溶的固体蛋白或液体蛋白溶液，建议液体蛋白溶解体系为8M/4％CHAPS/40mMTris/65mMDTT。如溶解于其它缓冲液体系中，请应供给缓冲液成分。4、单次硝酸银染色供给蛋白量不小于0.3mg；单次考马斯亮蓝染色供给蛋白量不小于1mg2mg。5、用于一次制备型样品，动物组织或菌体的颖样本始终不小于500mg；收集细胞数量不小于1×108；植物或真菌样品2g；64℃保存，其它液体蛋白溶液贮于-20〔外地客户如需进展样品邮递请使用干冰〕7、如样品中含有杂质例如核酸、脂类、多糖、色素类等或需其它特别要求例如浓缩、透析等请提前告知。我们将依据具体状况对试验方案做出相应调整。效劳价格：效劳名称效劳名称价格样品制备500-1100/样蛋白定量预试验及正式试验 1500元/块制备试验SDS-〔7cm〕图像分析处理切胶SDS-Gel银染串联质谱考染串联质谱2DGel串联质谱鉴定〔询价〕直接分子量测定PMF〔肽指纹图谱〕常见问题分析：1．等电聚焦为什么电压上不去？主要是提取的蛋白样品中离子含量过高，通过适当修改蛋白提取方法比方承受除盐试剂盒、滤膜过滤或者丙酮沉淀等方法可以获得较好的效果。双向电泳图谱的横条纹与等电聚焦有什么关系？PH范围以及上样量等因素综合考虑。质谱鉴定取胶点该如何取？有什么留意事项？取点时将0.2ml的枪头前端剪去一段，用该枪头将凝胶戳取下来并转移至0.5ml离心管中，用水将胶粒反复吸打冲洗两至三次，最终吸干离心管中全部水分后封盖保存并做好标记。离心管最好用进口离心管；水最好用去离子水；取点时最好带上口罩与手套，以免角蛋白污染。针对特别小的蛋白点，枪头孔径可能会比蛋白点面积大，取点时把该蛋白点的边上空白局部也一起取一些下来也不要紧，只有胶图上清楚可见的蛋白点，其含量就足够用于质谱鉴定，所以只要取一次蛋白点就可以了，不需要把几张胶上的蛋白点取了放在一起进展鉴定，同时留意不要把胶点弄得太碎，条件允许的话可以多取一次胶点的重复以做好备份。蛋白凝胶是否可以长期保存？对质谱鉴定有何影响？假设保存时间超过一个月，可以放入-20℃或者-80℃冰箱，假设小于一个月，则可以常温保持，根本不会影响后续质谱鉴定效果。凝胶扫描以及图像分析的根本要素是什么？染色后的凝胶用ImageScanner扫描仪进展扫描，扫描模式为灰度模式，光密度值为300dpi。使用ImageMaster2D6.0软件对图像进展分析，主要操作包括凝胶蛋白点检测、图像背景扣除、蛋白点灰度值标准化、不同凝胶间蛋白点匹配，并依据匹配结果计算差异表达倍数，选择差异表达的蛋白点用于质谱分析对于Mascot网站没有全基因组数据的物种该如何进展蛋白的鉴定？对于已经公布全基因组序列但未在Mascot列出的物种，可以在得到全序列后进展多种生物本地建库并进展本地检索；对于未进展全基因组测序的物种，可以承受近缘物种的数据库进展检索，大大提高了质谱鉴定的效率和成功率。7．在双向电泳凝胶不同位置的多个蛋白点鉴定出同一个蛋白是什么缘由？蛋白翻译后修饰、蛋白提取及电泳过程中的人为修饰和蛋白降解等多种缘由都有可能使得同一个蛋白的不同修饰类型或者不同碎片消灭在凝胶的不同位置，表现为多个蛋白点鉴定结果一样。8．MALDI-TOF-TOF-MS有何种优势？是最