复方酮康唑乳膏的制备及在释放度检查中的应用

复方酮康唑乳膏的制备及在释放度检查中的应用

作为一种抗真菌药物，丙酮醇乳膏是一种丙烯醇。在制备复方酮康唑乳膏的工艺中,高温溶解基质中的酮康唑在冷却后极易析出,造成其释放速度上的不同,从而影响临床疗效;而现行的质量标准仅控制酮康唑的含量等项目,未能反映样品使用后有效成分的释放情况,不能完全、有效地控制疗效。中国药典2005年版二部收载的释放度测定法也未收载软膏剂的释放度检查,因此,国内外学者不断地尝试建立适合于软膏剂的释放度检查方法,其中的流通池法(flow-throughcellmethod)显示了其广阔的应用前景,目前已被美国药典、英国药典、日本药局方和欧洲药典收载。流通池法是针对现行的溶出度检查法中无法克服的困难而发展起来的技术,主要优点有:①克服因缺乏下沉条件而导致的饱和或吸附作用的平衡;②在测试中改变pH条件,使测试参数适应生理条件;③给样品定位于小尺寸的溶出室中,溶出介质的体积可根据试验条件或体内参数而定;④保持不溶微粒在池内,不需要附加另外的过滤或离心步骤;⑤设计了多种流通池,不仅可以对片剂、软胶囊、硬胶囊等多种常用剂型直接进行测试,而且也可对软膏剂、粉末、栓剂、颗粒剂和植入剂等固体半固体进行测试;⑥如与其他分析仪器连接,可完成溶出曲线的自动化操作,重现性好;⑦克服药物在溶液中由于停留时间短而引起的不稳定问题。故该方法正被许多制药公司所采用。本文根据流通池法的特点,研究并建立了复方酮康唑乳膏释放度检查方法,为其生产、研究、质量控制及软膏剂释放度检查提供参考。1相对分子质量分数dintSOTAXCE7Offline流通池溶出仪,包括SOTAXCE7溶出试验仪主机、CP7-35陶瓷柱塞泵和C615组分收集器;Agilent1100高效液相色谱仪、醋酸纤维素半透膜(0.45μm,上海市绿鸟科技有限公司),截留相对分子质量(MWCO)为1000。酮康唑对照品(批号0294-9801,中国药品生物制品检定所),复方酮康唑乳膏(规格:含酮康唑10mg·g-1;上海A公司提供,批号分别为060622,060701,060704;市场购得B公司产品,批号为051001)。磷酸氢二钠、甲醇、磷酸、盐酸均为分析纯。2流通池和样品放置器所有试验都使用SOTAX的CE7流通池法溶出仪,有6个流通池;试验中,溶媒储放瓶中的释放介质经CP7-35陶瓷柱塞泵打入每个流通池,经过流通池锥形部放置的约1mm直径的玻璃珠(可使溶出介质在流通池内均匀流动)后,与样品放置器表面接触(药物释放),并从顶端流出回到溶媒储放瓶中。流通池用准备好的插入装置密闭,过滤器由1个筛网和1个玻璃纤维组成,样品放置器由样品储室、醋酸纤维素半透膜及密封圈组成。完整的流通池如图1所示。3测定条件及时间采用流通池法(USP29版溶出度测定法第4法)闭合系统装置,将样品约0.3g分别精密称定,装入池内,用半透膜封口,以0.01mol·L-1盐酸溶液200mL为释放介质,流速为8mL·min-1,温度(32±0.5)℃,按仪器说明书连接各部件,启动CP7-35陶瓷柱塞泵,同时记时,分别在10,30,60,120,240,360,720,1080,1440min时取样2mL(并补充相同体积已预热的释放介质2mL),使用0.45μm的微孔滤膜过滤,精密量取续滤液20μL,按本文选定的HPLC色谱条件进样测定,以标准曲线法计算酮康唑含量,求出各时间点药物的释放量和累计释放量。HPLC色谱条件:色谱柱为WatersSymmetryC18柱(3.9mm×150mm,5μm),柱温为30℃,流动相0.02mol·L-1磷酸氢二钠溶液-甲醇(25:75,用磷酸调节pH至6.9±0.1);流速为1mL·min-1,检测波长为225nm;进样量20μL。在此色谱条件下,酮康唑峰的保留时间为11.2min,理论板数约为2500,丙酸氯倍他索以及辅料不干扰测定。对照品样品色谱图见图2。4hplc方法的研究4.1,5,10.9,4.8,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,10.9,精密量取酮康唑对照品适量,用0.01mol·L-1盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1mL含酮康唑0.30mg的对照品储备溶液,精密量取适量,用0.01mol·L-1盐酸溶液定量稀释制成0.3,0.6,0.9,1.2,2.4,4.8,9,12,15,18μg·mL-1的溶液,摇匀,按上述色谱条件进样20.0μL。结果酮康唑浓度在0.30～18μg·mL-1范围内,与峰面积A具有良好的线性关系,标准曲线的回归方程为:A=45.45C-8.173r=0.9999(n=10)4.2平均回收率测定按A公司的处方,取空白基质约0.15g,置100mL量瓶中,共9份,分别精密加入对照品储备溶液0.5,2.0,5.0mL各3份,用0.01mol·L-1盐酸溶液定容至刻度,摇匀,用0.45μm的微孔滤膜过滤,精密量取续滤液20μL进样,以标准曲线法测定酮康唑含量,计算低、中、高3个浓度点的平均回收率(n=3)分别为99.8%,100.4%,99.2%;RSD分别为0.70%,0.76%,0.56%。4.3进样及色谱稳定性试验取“线性试验”项下的对照品溶液(9.0μg·mL-1)20μL,在色谱系统不改变的情况下分别于0,3,6,10,24h进样,测定酮康唑峰的峰面积,计算RSD(n=5)为0.52%。表明酮康唑对照品溶液在24h内稳定。4.4每次1000公里上述试验结果表明,所建立的HPLC法适合于复方酮康唑乳膏的释放度检查法。5样品释放试验的结果按“3”项下的释放度检查法对A公司的3批样品和B公司的1批样品分别进行释放曲线试验,结果见图3。6讨论6.1固体制剂的质量评价释放度试验是区分药物固体或半固体制剂体外溶出速率的一种手段,它的应用指导了新药的研究,增加了控制药物质量的检查项目,客观评价了固体或半固体制剂,提高了制剂的质量。中国药典2005年版二部附录XD释放度测定法第三法适用于透皮制剂的释放度检查,但对于没有衬布的乳膏则无法进行试验,本文采用流通池法建立了复方酮康唑乳膏释放度的测定方法,并对试验条件进行了筛选。6.1.2介质流速选择流速代表着试验溶剂对样品的流体搅动。分别设定流通池法释放介质的流速为4,8,16mL-1。结果随着流速的提高,在相同的时间内药物释放量略微增加,但无显著性变化,为保证测定的恒定,选择流速为8mL·min-1进行试验。6.1.3溶出度对药物释放的影响考察了流通池法的温度(32～37℃)对溶出度结果的影响,结果表明,随着温度的增加,在相同的时间内药物释放量明显增加。鉴于本品为皮肤用药,故选择32℃进行试验。6.1.4检测介质的选择半透膜的作用为减少药物(包括赋形剂)与释放介质之间接触,同时不阻止药物从基质向溶出介质的扩散。复方酮康唑乳膏为一种乳剂型亲水性基质的乳白色软膏,故选择醋酸纤维素膜(有孔亲水膜)进行试验,多孔的醋酸纤维素膜可以接受释放介质流入软膏中。为保证试验的进行和检测,选择200mL释放介质,取样量约为0.3g;经试验,取样量在0.25～0.35g间,同一生产厂家的释放曲线无明显变化。6.2测量因素的选择6.3合成产品的释放曲线本文采用的2个生产厂家的复方酮康唑乳膏经法定检验(国家药品标准WS1-XG-005-2001),结果均符合规定。其中A制药公司的3批产品释放曲线恒定,在24h释放量超过65%;而市场购得的B公司的1批产品,其释放量明显偏底;本文所建立的方法能够反映不同产品间的释放差异。6.1.1测定药物的释放度本文采用0.01mol·L-1的盐酸溶液为释放介质,原因是酮康唑在水中几乎不溶,而在0.01mol·L-1的盐酸溶液中溶解度良好,同时,分别采用磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液以及添加不同浓度表面活性剂(十二烷基硫酸钠等)等作为释放介质的方法,均无法改善药物的溶出(24h仅最大释放10%),这项研究有待继续。但鉴于释放度试验不仅是模仿临床用药情况,更主要的是控制生产过程以及生产产品质量的一致性,因此本文建立的方法已达到了目的。另外,本实验采用的样品池,其最大装量(复方酮康唑乳膏)约为0.35g,因此选用测定剂量约为0.3g。同