农业转基因生物安全评价申报书申报流程及实验要点

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pppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppppp'农业转基因生物安全评价申报书-申报流程及试验要点（动物用转基因微生物)报告期间：2016.11.13~2016.11.16单位：姓名：职务：汇报日期：2016.11.16目录1、适使用方法规、公告、指南文件汇总2、要点适使用方法规、公告、指南文件汇总农业转基因生物安全管理条例农业转基因生物安全评价管理措施（2023修订版，2023.10.1实施）（简称《评价措施》）农业转基因生物标识管理措施农业转基因生物加工审批措施有关修订农业行政许可规章和规范性文件的决定基因工程安全管理措施农业生物基因工程安全管理实施措施（修正）农业部公告第736号：转基因生物安全证书续申请程序动物用转基因微生物安全评价指南（现行2023版，2023版正在修订中）（简称《指南》）要点1：安全等级划分《评价措施》（2023修订版，第二章）四个等级（等级不同，申请程序及内容不同）：安全等级I：尚不存在危险安全等级II：具有低度危险安全等级III：具有中度危险安全等级IV：具有高度危险鉴定环节：拟定受体生物的安全等级拟定基因操作对受体生物安全等级影响的类型拟定转基因生物的安全等级拟定生产、加工活动对转基因生物安全性的影响拟定转基因产品的安全等级要点1：安全等级划分受体生物安全等级划分：安全等级I，符合下列条件之一即可：对人类健康和生态环境未曾发生过不利影响演化成有害生物的可能性极小用于特殊研究的短存活期受体生物，试验结束后在自然环境中存活的可能性极小安全等级II：对人类健康和生态环境可产生低度危险，但是经过采用安全控制措施完全能够防止其危险的受体生物。安全等级III：对人类健康和生态环境可产生中度危险，但是经过采用安全控制措施基本上能够防止其危险的受体生物。安全等级IV：对人类健康和生态环境可产生高度危险，而且在封闭设施之外尚无合适的安全控制措施防止其发生危险的受体生物。涉及：可能与其他生物发生高频率遗传物质互换的有害生物尚无有效技术预防其本身或产物逃逸、扩散的有害生物尚无有效技术确保其逃逸后，在对人类健康和生态环境产生不利影响之前，将其捕获或消灭的有害生物。要点1：安全等级划分受体生物的安全等级划分要点：查阅有关资料，以过往的研究文件为佐证。病害报道过敏原自然存活能力是否是原则的菌株、细胞株等……举例：在以往申报书里，水稻、玉米常被申报者列为受体生物安全等级I级，实际上是II级的，因为存在过敏原有关基因。要点1：安全等级划分基因操作对受体生物安全等级影响的类型：类型1：增长受体生物安全性的基因操作，涉及：清除某个（些）已知具有危险性的基因或克制某个（些）已知具有危险的基因体现的基因操作。例如：基因敲除、RNAi等。类型2：不影响受体生物安全性的基因操作，涉及：变化受体生物的表型或基因型而对人类健康和生态环境没有影响（或没有不利影响）的基因操作。例如：同义突变（变化密码子构成、提升体现量）、插入已知且安全功能性基因等。农基安证字（2023）第036号——厦门大学——重组毕赤酵母GS115（pPIC9K-PC-hepc）体现的大黄鱼抗菌肽生产应用安全证书类型3：降低受体生物安全性的基因操作，涉及：变化受体生物的表型或基因型，对人类健康和生态环境可能产生不利影响（或不能拟定对人类健康和生态环境产生的影响）。例如：非同义突变（变化蛋白构成）、插入未知功能的基因等。要点1：安全等级划分转基因生物安全等级确实定要点1：安全等级划分农业转基因产品的生产、加工活动对转基因生物安全等级的影响：类型1：增长转基因生物的安全性，例如：灭活、纯化等类型2：不影响转基因生物的安全性，例如：冻干等类型3：降低转基因生物的安全性，例如：富集、加有毒佐剂等安全等级评价原则：个案原则风险分析原则要点1：安全等级划分转基因产品安全等级确实定要点1：安全等级划分《评价措施》第三章申报和审批第六条：凡从事农业转基因生物研究与试验的单位，应该成立由单位法人代表负责的农业转基因生物安全小组，负责本单位农业转基因生物的安全管理及安全评价申报的审查工作。第十五条：在我国从事转基因生物安全等级III和IV的研究以及I、II、III、IV等级的试验（中间、环境、生产）以及生产和加工的单位和个人，应该根据农业转基因生物的类别和安全等级，分阶段向农业转基因生物安全管理办公室报告或提出申请。第二十条：从事安全等级为I和II的农业转基因生物试验研究，由本单位农业转基因生物安全小组同意；从事安全等级为III和IV的农业转基因生物试验研究，应该在研究开始前向农业转基因生物安全管理办公室报告。要点2：研究阶段实验研究中间试验环境释放生产性实验安全证书报备制审批制完整的农业转基因生物安全证书申请程序：整年可申请。报备制：安全评价阶段——评价报告书——提交报告材料——技术审查——受理备案（主动查询备案情况）——开展试验审批制：安全评价阶段——评价报告书——提交报告材料——技术审查——受理批复——开展试验要点2：研究阶段实验研究系指在实验室控制系统内进行的记忆操作和转基因生物研究工作。中间试验系指在控制系统内或者控制条件下进行的小规模试验。环境释放系指在自然条件下采取相应安全措施所进行的中规模的试验。生产性试验系指在生产和应用前进行的较大规模的试验要点3：各阶段的申请材料试验研究阶段：第二十条：从事安全等级I、II级的转基因生物试验研究，由本单位农业转基因生物安全小组同意；从事安全等级III、IV级的转基因生物试验研究，应该在研究开始前向农业转基因生物安全管理办公室报告。报告时提供如下材料：试验研究报告书（《评价措施》附录V模板）；农业转基因生物的安全等级和拟定安全等级的根据（《评价措施》附录III转基因微生物安全评价，第二部分，动物用转基因微生物安全评价）；相应的试验室安全设施、安全管理和防范措施；要点3：各阶段的申请材料试验研究报告书（《评价措施》附录V模板）项目名称：体现*******在浙江省的试验研究

目录：一、申请表二、项目内容摘要三、工作目的和意义四、国内外研究的有关背景资料五、安全性评价六、有关附件资料七、本单位农业转基因生物安全小组审查意见八、本单位审查意见要点3：各阶段的申请材料中间试验阶段：第二十一条：在农业转基因生物（I、II、III、IV级）试验研究结束后拟转入中间试验的，试验单位应该向农业转基因生物安全管理办公室报告。报告时提供如下材料：中间试验报告书（《评价措施》附录V模板）；试验研究总结报告；农业转基因生物的安全等级和拟定安全等级的根据；相应的试验室安全设施、安全管理和防范措施；要点3：各阶段的申请材料中间试验报告书（《评价措施》附录V模板）项目名称：体现*******活载体疫苗*******在浙江省的中间试验目录：一、申请表二、项目内容摘要三、工作目的和意义四、国内外研究的有关背景资料五、安全性评价六、试验方案七、有关附件资料八、本单位农业转基因生物安全小组审查意见九、本单位审查意见要点3：各阶段的申请材料环境释放/生产性试验阶段：第二十二条：在农业转基因生物中间试验结束后拟转入环境释放的%或者在环境释放结束后拟转入生产性试验的，试验单位应该向农业转基因生物安全管理办公室提出申请，经国家农业转基因生物安全委员会安全评价合格并由农业部同意后，方可根据农业转基因生物安全审批书的要求进行相应的试验。报告时提供如下材料：安全评价申报书（《评价措施》附录V模板）；农业转基因生物的安全等级和拟定安全等级的根据；农业部委托的技术检测机构出具的检测报告；相应的试验室安全设施、安全管理和防范措施；上一试验阶段的试验总结报告；申请生产性试验的，还应该按要求提交农业转基因生物样品、对照样品及检测措施。送样时间为每年3月31日前，但因为程序安排及安排安全评价检测需求，最佳送样时间为春节前，或春节前准备好样品，春节后立即送样。这么，在3月31日前，评价处可根据样品需求制定合适的检测项目及决定合适的检测单位。要点3：各阶段的申请材料安全评价申报书（《评价措施》附录V模板）项目名称：体现******活载体疫苗*******在浙江省的环境释放/生产性试验目录：一、申请表二、项目内容摘要三、工作目的和意义四、国内外研究的有关背景资料五、安全性评价六、试验方案七、有关附件资料八、本单位农业转基因生物安全小组审查意见九、本单位审查意见要点3：各阶段的申请材料安全证书申请阶段：第二十三条：在农业转基因生物试验结束后拟申请安全证书的，试验单位应该向农业转基因生物安全管理办公室提出申请，经国家农业转基因生物安全委员会安全评价合格并由农业部同意后，方可颁发农业转基因生物安全证书。报告时提供如下材料：安全评价申报书（《评价措施》附录V模板）；农业转基因生物的安全等级和拟定安全等级的根据；农业部委托的农业转基因生物技术检测机构出具的检测报告；中间试验、环境释放和生产性试验阶段的试验总结报告；按要求提交农业转基因生物样品、对照样品及检测措施，但按照本措施第二十二条要求已经提交的除外；其他有关材料。动物用微生物——农业转基因生物技术检测机构——农业部转基因兽用微生物环境安全监督检验测试中心（北京）要点3：各阶段的申请材料安全评价申报书（《评价措施》附录V模板）项目名称：体现******活载体疫苗******在浙江省生产应用的安全证书目录：一、申请表二、项目内容摘要三、工作目的和意义四、国内外研究的有关背景资料五、安全性评价六、有关附件资料七、本单位农业转基因生物安全小组审查意见八、本单位审查意见九、所在省（市、自治区）的农业行政主管部门的审查意见要点3：各阶段的申请材料实验研究表达******活载体疫苗******在浙江省的实验研究（III、IV级）中间试验表达******活载体疫苗******在浙江省的中间试验环境释放表达******活载体疫苗******在浙江省的环境释放生产性试验表达******活载体疫苗******在浙江省的生产性试验安全证书表达******活载体疫苗******在应用的安全证书要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）动物用转基因微生物，是指利用基因工程技术变化基因组构成，在农业生产或者农产品加工中用于动物的重组微生物及其产品。动物用转基因微生物主要分为基因工程亚单位疫苗、基因工程重组活载体疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗、基因工程激素类疫苗及治疗制剂、饲料用转基因微生物、基因工程抗原与诊疗试剂盒等。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因工程亚单位疫苗:指利用细菌、病毒、哺乳动物细胞、酵母、植物等体系体现的病原微生物保护性抗原蛋白制备的疫苗。该疫苗能够是纯化的抗原蛋白，也能够是未纯化的灭活混合物，其特点是具有目的抗原蛋白，无复制特征。基因工程重组活载体疫苗：是指利用基因重组技术将病原微生物的保护性抗原蛋白基因插入到低毒或无毒的细菌、病毒、支原体等载体微生物基因组中取得的活载体疫苗。该疫苗的特点是在体内可复制，且低毒或无毒。基因缺失疫苗：是指利用同源重组技术将病原微生物的致病或（和）毒力有关的、且复制非必需的基因或基因片段全部或部分删除后取得的低毒或无毒微生物制备的疫苗。该疫苗的特点是带有基因缺失的遗传标识，能够据此辨别疫苗毒株和野生毒株。核酸疫苗：是指将病原微生物的主要保护性抗原基因插入到真核体现质粒（含真核开启子）中形成DNA重组体，纯化取得的重组质粒即为核酸疫苗。核酸疫苗的特点是质粒DNA，而非蛋白，质粒DNA进入细胞后体现抗原蛋白，能够诱导机体免疫反应。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因工程亚单位疫苗:1．利用基因工程技术体现的抗原并经纯化后制备的基因工程亚单位疫苗，在中间试验结束后，可直接申请安全证书。2．利用基因工程技术体现的抗原未经纯化后制备的基因工程亚单位疫苗，在中间试验和环境释放结束后，根据安全评价情况，可直接申请安全证书。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因工程亚单位疫苗:1．申请中间试验

提供前期研究报告，涉及体现载体的构建、外源基因的体现和蛋白纯化工艺等。评价产品对靶/非靶动物的安全性，要点是产品用于靶动物后的临床反应与致病性。描述不要过于笼统（与对照组无明显差别），应详尽：体温、呼吸、摄食、排泄、精神、死亡率、排毒情况、组织载毒（菌）量、病毒血症、组织病变等。2．申请环境释放

提交中间试验阶段安全性试验的总结报告。

未经纯化的产品用于靶动物后，产品中抗性质粒在环境中的转移情况。环境存活能力：粪便、水样、土壤等，以大肠杆菌为指示菌。3．申请生物安全证书

提交各阶段的安全评价试验总结报告。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因工程重组活载体疫苗:1．利用已知的、安全的载体与已知的、安全的外源基因构建的基因工程重组活载体疫苗，在中间试验和环境释放结束后，可直接申请安全证书。2．利用新型的、安全性不明的载体或外源基因制备的基因工程重组活载体疫苗，应按中间试验、环境释放、生产性试验、安全证书四个阶段申报安全评价。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因工程重组活载体疫苗:1．申请中间试验提供前期研究报告，涉及重组活载体疫苗的构建、外源基因的体现、重组微生物的遗传稳定性、生物学特征等。评价产品对靶/非靶动物临床反应/致病性，以及产品用于靶/非靶动物后的临床反应/致病性。2．申请环境释放提交中间试验阶段安全性试验的总结报告。评价疫苗毒株的水平传播（同居试验）和垂直传播（免疫产仔试验）能力；检测疫苗毒株在应用环境（水、土壤、排泄物）中的存活能力，以及疫苗毒株在靶动物的存留（血液、组织、呼吸道、消化道）和排毒情况。涉及人兽共患病病原的产品，还应评价产品对人类的安全性（毒性试验：小鼠/大鼠），以及疫苗毒株与其他微生物发生遗传重组（指示菌：大肠杆菌）的可能性。3．申请生产性试验提交中间试验和环境释放阶段安全性试验的总结报告。继续检测疫苗毒株在应用环境中的存活能力，以及疫苗毒株在靶动物的存留和排毒情况。4．申请生物安全证书提交各阶段的安全评价试验总结报告。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因缺失疫苗:1．基因缺失活疫苗应按中间试验、环境释放、生产性试验、安全证书四个阶段申报安全评价。2．基因缺失灭活疫苗在中间试验结束后，可直接申请安全证书。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）基因缺失疫苗:1．申请中间试验提供前期研究报告，涉及基因缺失疫苗的构建、遗传稳定性和生物学特征等。基因缺失活疫苗：评价基因缺失疫苗毒株对靶动物致病性，以及以用于非靶动物后的临床反应；提供试验室内基因缺失毒株与野生毒株重组取得缺失致病基因能力的研究报告。基因缺失灭活疫苗：评价产品对靶动物的安全性，要点是产品用于靶动物后的临床反应。2．申请环境释放提交中间试验阶段安全性试验的总结报告。评价基因缺失疫苗毒株在靶动物体内的增殖、分布和存活情况；评价基因缺失疫苗毒株水平传播和垂直传播能力。涉及人兽共患病病原的产品，还应评价产品对人类的安全性，以及疫苗毒株与其他微生物发生遗传重组的可能性。3．申请生产性试验提交中间试验和环境释放阶段安全性试验的总结报告。继续观察基因缺失疫苗毒株的水平传播和垂直传播能力。监测缺失毒株与野生毒株重组取得缺失致病基因的能力（毒力恢复：阴性厂免疫后检测到野毒）。4．申请生物安全证书提交各阶段的安全评价试验总结报告。要点4：动物用转基因微生物安全评价指南（类别）核酸疫苗:应按中间试验、环境释放、生产性试验、安全证书四个阶段申报安全评价。1．申请中间试验提供前期研究报告，涉及核酸疫苗的构建、外源基因的体现、制备工艺等。评价核酸疫苗质粒DNA