五子衍宗丸对大鼠适配功能及肾阳虚小鼠的影响

五子衍宗丸对大鼠适配功能及肾阳虚小鼠的影响

五子衍宗丸由枸杞、兔蚕丝、覆盆子、五味子和香蕉籽组成。具有补肾益肾健康的功效，受到历代医家的高度赞扬。在现代国内临床上广泛用于治疗肾虚腰痛,尿后余沥,遗精早泄,阳痿不育等男性性功能疾病,疗效显著。本文对其进行了相关药效学研究,进一步为该药的临床应用提供实验依据。1材料表面1.1小鼠、大鼠、小龙虾来源SPF级Wistar种雄性大鼠和雌性大鼠各50只,体重220~240g;ICR雄性小鼠60只,体重18~22g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号SCXK(京)2007-0001。在中国中医科学院西苑医院实验动物中心饲养,二级动物饲养设施,合格证号SYXK(京)2007-0001。室温22~25℃,相对湿度45%~60%。1.2提供材料提供五子衍宗丸,由枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子及车前子组成。以上5味粉碎成细粉,过筛,混匀,比例为8∶8∶4∶1∶2,批号20080909,北京同仁堂股份有限公司科学研究所提供;男宝胶囊,0.3g/粒(批号1001074,山西康威制药有限责任公司生产),雌二醇注射液(批号080401,上海通用药业股份有限公司生产),黄体酮注射液(批号080804,上海通用药业股份有限公司生产),橄榄油(批号F20080219,国药集团化学试剂有限公司生产),氢化可的松注射液(批号0612212,天津金耀氨基酸有限公司),睾酮(T)、黄体生成素(LH)放射免疫试剂盒(北京普尔伟业生物科技有限公司)。1.3仪器、实验动物和小体电子天平DENVERINSTRUMENT(北京赛多利斯仪器系统有限公司),Sn-69513型免疫计数器(上海核所日环光电仪器有限公司产),QH-1小鼠自主活动测定仪(清华大学生产)。2方法2.1黄体酮注射液50只雌性大鼠3.5%水合氯醛ip麻醉(10mL·kg-1),摘除双侧卵巢,术后肌注青霉素(2万U·kg-1),以防感染,14d后用于交配实验。调节动情周期:实验前48h皮下注射(sc)橄榄油配制的苯甲酸雌二醇,4h前再次sc橄榄油配制的黄体酮注射液。50只雄性大鼠随机分为5组,10只/组。即:正常对照组、男宝组(0.35g·kg-1)、五子衍宗丸高、中、低剂量组(按生药量计2.0,1.0,0.5g·kg-1)。每日ig给药,正常对照组ig等体积蒸馏水,1次/日,连续28d。交配实验将雄鼠单独放入笼中5min,使其适应环境,然后每笼中加入1只雌鼠。开始记录下列指标。(1)扑捉潜伏期:自雌鼠投入至雄鼠第1次扑捉雌鼠的时间。(2)射精潜伏期:自雌鼠投入至雄鼠发生第1次射精的时间。(3)20min内雄鼠扑捉雌鼠的次数及射精次数。各组雄鼠麻醉后腹主动脉取血,分离血清测定T,LH;解剖后称量脾脏、胸腺、睾丸、附睾、包皮腺、前列腺+精囊及提肛肌,计算脏器指数。2.2动物分组、给药及自主活动时间、条件确定将60只雄性小鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、男宝组(0.5g·kg-1),五子衍宗丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6g·kg-1)。除正常对照组外,各组均肌注氢化可的松造模(37.5mg·kg-1),1次/日,连续7d。同时阳性药及受试药各组按剂量ig给药,1次/日,连续7d。末次给药后1h,记录各组动物体重、体温、自主活动数及低温游泳存活时间,(自主活动数的测定采用QH-1小鼠自主活动测定仪,低温游泳水温为(11±1)℃,水深20cm,用秒表计算自小鼠落水至溺死所需时间);解剖称量脾、胸腺、睾丸、附睾、包皮腺、前列腺+精囊及提肛肌,计算脏器指数。2.3统计处理将实验数据归类整理,数据以表示,采用SPSS11.5forWindows软件进行方差分析,以P<0.05为具有统计学意义。3结果3.1五子衍宗丸对大鼠移植功能的影响3.1.1两组患者推顶位置和喷射次数情况比较由表1可见,五子衍宗丸高剂量组大鼠的扑捉次数及射精次数明显增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);但对扑捉潜伏期及射精潜伏期无明显影响。3.1.2性对照药男宝组与对照组t、对照组比较表2显示,五子衍宗丸中、低剂量组及阳性对照药男宝组T与对照组比较,有升高的趋势但无显著性差异;各剂量组LH明显降低(P<0.01,P<0.001)。3.1.3各组大鼠肝脏和呼吸腺指数比较正常对照组脾脏、胸腺脏器指数(0.26±0.05),(0.14±0.03)g·(100g)-1,与五子衍宗丸3个剂量组及男宝组与正常对照组比较,脾脏和胸腺指数组间无显著性差异。3.1.4附睾丸指数变化五子衍宗丸各剂量组及男宝组与对照组比较,附睾指数明显增加(P<0.05,P<0.01);但睾丸、包皮腺、前列腺+精囊和提肛肌指数与对照组比较,无显著差异。见表3。3.1.5两组患者体重、性别、年龄的比较各实验组动物连续ig给药28d,正常对照组体重(405.7±41.8)g,五子衍宗丸组体重(409.9±26.2)g,男宝组体重(409.6±24.0)g,组间无显著性差异。3.2五子衍宗丸对肾阳虚鼠的影响3.2.1肾阳虚体征对小鼠造模前后的影响正常对照组小鼠发育良好,活动及摄食正常,体重不断增加,毛白而有光泽,二便无异常。模型组在造模后,逐渐出现肾阳虚体征:反应迟钝、发育迟缓、拱背少动、体毛稀疏无光泽,体重明显下降。各给药组在造模过程中,也相继出现不同程度的肾阳虚体征,但比模型组小鼠状态稍好。由表4可见,各组小鼠造模前体重(21.6±1.1)g,组间无差异,造模后模型组(22.1±1.1)g体重与对照组(27.4±1.5)g比较明显降低(P<0.001)。五子衍宗丸各剂量组给药后体重与模型组比较无显著性差异。3.2.2低温游泳存活率比较表4显示,五子衍宗丸各剂量组和男宝组与模型组比较,低温游泳存活时间明显延长,差异非常显著(P<0.01,P<0.001);高、中剂量组体温及自主活动数有升高趋势,但无统计学差异。见表4。3.2.3对脏器指数的影响各组小鼠造模后脾脏和胸腺均明显萎缩(P<0.01,P<0.001);五子衍宗丸高剂量组及男宝组给药7d后的脾脏指数与模型组比较有所升高(P<0.05或P<0.01);五子衍宗丸各剂量组小鼠的胸腺指数与模型组比较无显著差异。见表5。3.2.4对脏器指数的影响模型组睾丸+附睾指数比对照组有所增加(P<0.05),可能是小鼠体重降低导致脏器指数增高所致;给药7天后五子衍宗丸高、中剂量组睾丸+附睾指数与模型组比较,有增加的趋势,但无统计学差异;中剂量组提肛肌与模型组比较有所增加(P<0.05);包皮腺、前列腺+精囊指数与模型组比较无显著差异。见表6。4子衍宗丸对大鼠睾丸及附睾丸指数的影响中医认为“肾为先天之本,生命之根”,肾藏精,主生长发育与生殖。肾精充足,肾气旺盛,生殖功能正常。五子衍宗丸具有补肾益精强身之功效,被誉为“古今种子第一方”。补肾类药物对下丘脑-垂体-性腺轴功能具有调节作用,临床上在治疗男性性功能疾病方面有具有显著的疗效。本研究显示:五子衍宗丸高剂量组大鼠的扑捉次数、射精次数及各剂量组附睾指数明显增加,与对照组比较有显著性差异。中、低剂量组T与对照组比较有升高的趋势,各剂量组LH明显降低。说明五子衍宗丸能刺激睾丸间质细胞分泌T,使血中T增加;并负反馈抑制垂体分泌LH,导致血中LH降低。结果提示五子衍宗丸能够提高大鼠的交配能力,对性激素具有调节作用。氢化可的松模型是较为经典的肾阳虚证动物模型,本研究结果表明:五子衍宗丸可明显延长其低温游