食品微生物检验基本技术-放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察

放线菌的形态观察技术目录/Contents01放线菌形态观察技术微生物检验室01一、放线菌简介放线菌细胞一般呈分枝无隔的丝状，纤细的菌丝体分为在培养基内部的基内菌丝和伸出培养基表面的气生菌丝。气生菌丝上部分化成孢子丝，呈螺旋状、波浪状或分枝状等，其着生的形式也有所不同。菌丝呈各种颜色，有的还能分泌水溶性色素到培养基内。01插片法用无菌镊子取数块无菌盖片，以45°角斜插在平板培养基上。用接种环取孢子接种于盖片内侧基部中央部位，28℃培养4～5d。01插片法2、制片用镊子取出盖片，用吸水纸擦去生长较差一面的菌丝体，然后用镊子夹住盖玻片，使有菌面朝上，通过灯焰2～3次进行加热固定、冷却。3、染色在盖玻片上滴加一滴石炭酸复红液染色1min，水洗，干燥。4、镜检取干净载玻片一张，将盖玻片染色面向下，放在载玻片中央，在低倍镜、高倍镜、油镜下观察，辨认放线菌的菌丝体、孢子丝及孢子的形态及排列方式。酵母菌的形态观察技术目录/Contents01酵母菌形态观察技术微生物检验室01酵母菌的形态观察法酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多。不必染色即可用显微镜观察其形态。

01酵母菌的形态观察法

（1）水浸片观察①制片：在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵母液体培养物，从侧面盖上一片盖玻片，应避免产生气泡，并用吸水纸吸去多余的水分。②镜检：将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，注意观察各种酵母的细胞形态和繁殖方式，并进行记录。

01酵母菌的形态观察法

（2）美蓝染色①染色：在干净的载玻片中央加一小滴0.1%美蓝染色液，然后再加一小滴预先稀释至适宜浓度的酿酒酵母液体培养物，混匀后从侧面盖上盖玻片，并吸去多余的水分和染色液。②镜检：将制好的染色片置于显微镜的载物台上，放置约3min后进行镜检，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，根据细胞颜色区分死细胞（蓝色）和活细胞（无色），并进行记录。③比较：染色约30min后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。

01酵母菌的形态观察法（4）假菌丝的观察压片培养法：取新鲜的酵母菌在薄层马铃薯浸出汁琼脂培养基平板上划线接种2~3条，取无菌盖玻片盖在接种线上，于25~28℃培养4~5d后，打开皿盖，置于显微镜下直接观察划线的两侧所形成的假菌丝的形状。霉菌的形态观察技术目录/Contents01微生物检验室霉菌形态观察技术01霉菌的形态观察技术（一）直接制片观察法直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：①细胞不变形；②具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；③溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。

01霉菌的形态观察技术（二）载玻片培养观察法载玻片培养观察法：此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。这种方法可观察霉菌自然生长状态下的形态。

01霉菌的形态观察技术（三）玻璃纸培养观察法玻璃纸培养观察法：为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察。01霉菌的形态观察技术（1）一般观察法于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。01霉菌的形态观察技术

（2）载玻片观察法①将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1.05kg/cm2，121.3℃灭菌20min或干热灭菌，备用。②将6～7mL灭菌的马铃薯葡萄糖培养基倒入直径为9cm的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成0.5～1cm2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2块。01霉菌的形态观察技术

（2）载玻片观察法③用灭菌的尖细接种针或装有柄的缝衣针，取（肉眼方能看见的）一点霉菌孢子，轻轻点在琼