乙型肝炎课件

慢性乙型肝炎

主要内容

乙型肝炎病毒

荧光定量PCR技术HBV-DNA与临床

什么是乙肝？乙肝：是指由乙型肝炎病毒引起的，以肝脏损害为主的一组全身性传染病。

临床表现：以疲乏、食欲减退、厌油、肝功能异常为主，部分病例呈现黄疸。

一、形态和生物学特性：

HBV感染者血清中存在三种形式的病毒颗粒：

①大球形颗粒（Dane）：完整的病毒颗粒，含量最少

包膜：HBsAg，糖蛋白，脂质

核心：DNA，DNA聚合酶，HBcAg

是病毒复制的主体。

②小球形颗粒：

仅HBsAg，无核酸，无感染性，含量最多

③管形颗粒：仅HBsAg，无核酸，无感染性

HBV抵抗力很强，在血清中30-32℃可保存6个月，-20℃可保存15年。

电镜下HBV颗粒HBV病毒结构示意图HBV基因组结构，1979年二、基因组结构和编码蛋白根据HBV全基因序列差异≥8%或S区基因序列差异≥4%，目前HBV分为A-H八个基因型。各基因型又可分为不同亚型。我国主要是B和C。IFN治疗HBV应答率：A＞D，B＞C，A、D＞B、C基因型是否影响核苷类似物的疗效尚未确定。65℃10h、煮沸10min或高压蒸气均可灭活HBV。三、抗原抗体系统HBsAg是HBV感染的主要标志，2-12周出现。只有抗原性，无传染性。目前感染，患者或病毒携带者。抗-HBs保护性抗体，曾感染或免疫HBeAgHBV复制及强感染性的指标，仅见于HBsAg阳性患者，HBeAg阳性标本HBVDNA检出率90％左右，两者有着良好的相关性抗-HBe有一定的保护作用，感染恢复期，传染性低，病情趋于稳定，预后良好抗-HBc非保护性抗体，曾感染，病情趋于稳定。HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBcAg主要存在于感染的肝细胞核心，血循环中游离的极少。与HBVDNA呈正相关，HBV复制及强感染性的指标。四、分子生物学标记

1.HBV-DNA:主要存在于Dane颗粒中，是病毒复制和传染性的直接标志。

2.HBV-DNA多聚酶：位于核心部位，血清中HBV-DNA多聚酶活力是判断病毒复制、传染性高低的指标之一。

流行病学1.传染源：急、慢性乙型肝炎患者，病毒携带者；

2.传播途径：母婴传播、血液及血制品传播、破损的皮肤和黏膜及性接触传播，日常工作或生活接触一般不会传染HBV；经吸血昆虫传播未证实；

3.易感人群：抗HBs阴性者。婴幼儿是获得HBV感染的最危险时期。

全球20亿曾感染HBV，慢性HBV感染者3.5亿我国属HBV感染高流行区，一般人群HBsAg阳性率为9.09%，总感染率为57.6%（包括既往感染和现症感染）。接种与未接种乙型肝炎疫苗人群的HBsAg阳性率分别为4.51%和9.51%。男性高于女性，有家庭聚集现象，婴幼儿感染多见。自然史10/8/202315急性

HBV感染慢性乙肝肝硬化肝癌失代偿期肝硬化

5年病死率70-86%代偿期肝硬化

5年病死率14-20%青少年和成人期

5-10%12-25%5年6-15%5年25-30%

婴幼儿期发生肝硬化的高危因素包括：病毒载量高、HBeAg持续阳性、ALT水平高或反复地波动、嗜酒、合并HCV、HDV或HIV感染等。HBeAg阳性患者的肝硬化发生率要高于HBeAg阴性者HBV感染是HCC的重要相关因素。肝硬化患者发生HCC高危因素包括：男性、年龄、嗜酒、黄曲霉素、合并HCV或HDV感染、持续肝脏炎症、持续HBeAg阳性及HBVDNA持续高水平等发病机制免疫清除期非活动或

低复制期再活动期不治疗

但应检测免疫耐受

需治疗

不治疗

但应检测

需治疗

HBV携带者

HBsAg(+)HBeAg(+)/

抗-HBe(-)

HBVDNA+++

ALT–

肝活检-慢乙肝

HBsAg(+)HBeAg(+)/

抗-HBe(-)

HBVDNA++

ALT/AST+++

肝活检+++HBeAg(-)慢乙肝

HBeAg(-)/

抗-HBe(+)

HBVDNA+

ALT++

肝活检++非活动状态

HBsAg携带者

HBeAg(-)/

抗-HBe(+)

HBVDNA-

ALT/AST-

肝活检-乙肝或HBsAg阳性史超过6个月，现HBsAg和/或HBVDNA仍阳性者，可诊断为慢性HBV感染慢性

乙型肝炎隐匿性

慢性乙肝乙型肝炎

肝硬化

携带者

慢性HBV携带(耐受)非活动性HBsAg携带HBeAg(+)HBeAg(-)慢性

HBV

感染代偿期失代偿期HBsAg(-)，HBVDNA(+)根据肝功能损害程度

分为轻度/中度/重度分为活动期/静止期ALT正常（一）携带者大三阳或小三阳，HBVDNA为阳性或阴性，但1年内连续随访3次以上

ALT和AST均在正常范围，肝组织学检查无异常（二）慢性乙型肝炎大三阳或小三阳，HBVDNA阳性，血清ALT持续或反复升高，或肝组织学检查有肝炎病变

(三)隐匿性慢性乙型肝炎

-血清HBsAg阴性，但血清和(或)肝组织中HBVDNA

阳性，并有慢性乙型肝炎的临床表现。患者可伴

有血清抗-HBs、抗-HBe和(或)抗-HBc阳性-另约20%隐匿性慢性乙型肝炎患者除HBVDNA阳性

外，其余HBV血清学标志均为阴性-诊断需排除其他病毒及非病毒因素引起的肝损伤HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性？●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏。为什么要检测HBV-DNA？

“大三阳”、“小三阳”、“携带者”等免疫学指标反应的是机体的免疫反应状态，不能反应体内病毒复制水平与感染程度。血清学指标(－)不能排除HBV感染。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBVDNA来决定。HBVDNA是HBV本身的遗传物质，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标，也是患者具有传染性的标志。

怎样检测HBV-DNA？荧光定量PCR技术荧光定量PCR技术Polymerasechainreaction(PCR)，聚合酶链式反应，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内反复循环30-40次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板引物TaqDNA聚合酶脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）

实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入荧光标记，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过标准曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。PCR反应过程5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反应组分变性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’延伸5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’3’TaqTaq5’5’重复退火5’3’5’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’3’5’3’循环24个拷贝循环38个拷贝5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’5’3’5’3’TaqMan探针5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反应体系变性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’Taql5’3’RQProbe5’3’RQ5’3’5’3’5’3’RQ退火5’3’1.链取代Taq3’QR5’5’3’3’QTaqR5’2.水解3.聚合5’3’QTaqR3’5’4.检测荧光5’3’3’QTaqR5’l每产生一条DNA链，就切断一条探针每切断一条探针，就产生一个荧光信号信号强度与结合探针的DNA分子数成正比原理图血清标本采集一次性无菌注射器抽取受检者静脉血3-5毫升，注入红帽无菌管中室温（22～25ºC）放置30～60分钟血标本使用水平离心机，4000转/分，离心5分钟吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管

严禁使用肝素抗凝血标本，抑制PCR反应结果分析实验室检查常用指标？常用指标免疫学检查病毒学检查肝功能检查指标HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc诊断结果+++大三阳，急性或慢性现症感染，传染性强+++小三阳，有无传染性应结合HBVDNA检