显微技术作业课后作业C

生物电子显微技术作业课后作业C1.简述超高压电子显微镜的长处，以及切片与一般超薄切片的不一样。答：超高压电镜不只分辨率高、单色性好，并且电子穿透力强，对资料的损害较小，能够察看较厚的资料μm)，场深大，成像有立体感，并且不会影响分辨率。主要用于观察资料、矿物、生物样品、器件透射电子显微象及电子衍射图，对样品微观组织、构造、缺点等定性、定量剖析。可对样品在加热、拉伸、电子辐照等条件下微观组织的变化过程进行动向观察。一般透射电镜察看样品时，电子束无法穿过mm以上的切片，所以需将样品切成50~70nm的薄片才能察看。与光镜察看的3~7mm切片对照而言，常将透射电镜的切片称为超薄切片。用于超高压电镜的厚切片制备与一般超薄切片相像，不过有一些特别要求:其切片资料的制备与一般电镜有所不一样。样品块要相对软一些，以保护刀口和便于制作连续切片。覆盖的支持膜要厚，并喷碳加固，以抗高压电子轰击。采纳折叠式载网或单缝载网，以防切片零落和阻拦视线。采纳淹无法染色，并合适延伸染色时间。包埋前可先进行整体染色。比较透射电镜与扫描电镜在察看成效和研究用途上的不一样它们各自的优弊端是什么透射电镜扫描电镜察看成效电子显微镜是使用电子来展现它能够直接察看直径物品的内部或表面的显微镜。100mm，高50mm，或更大高速的电子的波长比可见光的尺寸的试样，对试样的形波长短（波粒二象性），而显状没有任何限制，粗拙表微镜的分辨率受其使用的波长面也能察看，这便免去了的限制，所以电子显微镜的理制备样品的麻烦，并且能论分辨率（约纳米）远高于光真切察看试样自己物质学显微镜的分辨率（约200纳成分不一样的衬度（背反射米）。分辨率为～，放大倍数电子象）。分辨率可达为几万～几十万倍3-10nm,放大倍数可达10万倍研究用途用以察看为亚显微构造或超微主假如用来察看物体表构造。面超微形态,合适察看固察看样品容貌、原位剖析样品态的生物资料,也能够观的晶体构造察生物资料断面或剥蚀面的构造（亚细胞形态），可是需要早先进行切割或蚀刻办理。有时甚至也可进行细胞化学标志物的形态察看。因为拥有很高的分辨率，多以被宽泛用于察看纳米资料。长处1.制样过程对芯片内部构造影1.拥有很高的分辨率响较小2.制样方便，制样周期2.透射电子穿过样品内部，同短，有时能够作非损坏性样品内部的全部东西发生互相的剖析作用，进而直接获取内部构造3.察看范围大，倍率变化信息，所以获取综合的高分辨大，立体感强，景深大，率结果察看成效好3.易于调整，经过改变线圈中流过电流的强度，能够改变磁场强度，达到变化折射率和焦距的目的4.像差较小，且较为简单除去或校订5.对电子束流的能量消耗小弊端1.构造复杂，对制作资料的纯1.只好在样品表面扫描，度、元件几何形状尺寸的加工信号来自样品表面，不可以精细度等都要求极高获取样品内比较深的部2.制样的技术难度大，察看点位的状况的定位难，有时需借用聚焦离2.显微像一般不包含结子束刻蚀才能达成构信号，不可以划分单晶、3.剖析周期长多晶、非晶，不可以划分位4.成本较高错、层错、晶界等3.不合适厚度在微米以下的薄膜的剖析需求采纳低温办理制作电镜样品的优弊端是什么长处弊端固定形态和构造，且固化构造使之易低温办理仍旧不可以解决永远活体，并且于进一步办理制作过程简单产生冷冻损害和干燥损2.在保留生物活性的基础上储藏生物伤。并且切片太厚，不可以做连续切片，资料并且简单破裂。在制作冷冻超薄切片刻，不需经化学药剂固定、脱水、过渡、聚合等，减少了办理过程造成的阎像为何要采纳临界点干燥来办理扫描电镜样品哪些资料不用临界点干燥来办理也能获取满意的图像答：临界点干燥就是利用物质在临界状态下，液体表面张力除去的特征，战胜样品干燥过程中所发生的变形，保持样品原状，达到干燥的目的。其原理是在必定的温度和压力下，物质的液态随和态界面将会消逝，液态瞬时转变为气态，形成非液非固的状态，即达来临界点（）状态。在临界点时，表面张力消逝，分子间的内聚力等于零，所以，利用临界点状态对资料进行干燥，资料理论上不会产生缩短和形变，关于质地较软的资料这类方法是最好的干燥方法。所以说，关于比较坚硬的资料，实时不使用临界点干燥法也能够实现较好的图像察看。查找采纳了低温制样技术的研究文件，收集精巧图片，剖析这些工作的技术难点和发布图片的质量。答：技术难点：1、冰晶冰晶是组织在冷冻固化过程中,因为冷冻迟缓,冷冻时间过长,使细胞质和组织空隙内未联合的水渐渐析出形成解决方法:取材大小、厚薄要适合,过大过厚影响冷冻速度。2、组织挤压、皱缩。常有于组织构造软硬不一样的组织，如皮肤。解决方法：将表皮面放在标本的上端,先切较软的皮下组织,挨次切真皮、表皮,同时用毛笔轻轻睁开,或用抗卷板才能切出完好的切片3、冷冻切片一般不会脱片,偶见于坏死组织或含水量大的组织,如子宫肌瘤粘液变性时。解决方法:第一切片不可以太厚,其次切片固定后用吹风机吹干再染色。4、甲状腺等有腔洞的组织，组织冷冻过头,使之发脆就会破裂形成空洞,这时可用手贴在组织上或用嘴向组织哈气略加温使其融化即可切出完好的切片。5、组织贴附不平或许有皱褶切片切好后用载玻片贴片刻手不可以发抖,并且在贴附组织时手要有一个向下伸展的动作。文件一密方元,李凤山,马邦磊,钱宁.冷冻切片5min迅速制片染色法.临床与实验病理学杂志，2009，Oct25.图1A入口OCT包埋的腮腺混淆瘤冷冻切片B胶片包埋的腮腺混淆瘤冷冻切片图2肾粗针穿刺小标本,先制成冷冻图3脂肪组织冷冻切片,脂肪细胞组织构造平后做冷冻切片,保持了组织保持完好，细胞界限清楚，染色娇艳图4甲状腺组织,HE染色前未经二图5甲状腺组织,HE染色前经二甲苯脱脂甲苯脱脂办理,胞核较模糊办理后，胞核、质构造清楚、透明我以为这几张图片比较好，清楚，甲状腺组织切片中破裂形成空洞，染色很平均。文件二胥维勇，杨红，李科，杨群.介绍一种FAAPT冷冻切片迅速固定液.临床与实验病理学杂志.2002Apr;18纲要手术中冷冻切片的病理诊疗是依据冷冻切片组织学形态来进行,以确立病变组织的良恶性为目的。制作冷冻切片包含制片、固定、染色三个环节,在冷冻切片中固定液的选择是不行忽略的一个要素。我们在工作中经频频试验在众多固定液中选择FAA液(福尔马林-醋酸-乙醇),经改进配成一种合