基于顺铂抗癌药物的合成及键和性质的研究毕业设计整理版

资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。(此文档为word格式,下载后您可任意编辑修改!)基于顺铂抗癌药物的合成及DNA键合性质的研究【摘要】癌症是严重威胁人类健康和生命的常见病和多发病,已经成为人类死亡的第二大病因。自1967年发现顺铂具有抗癌活性以来,经过30多年的发展,铂类金属抗癌药物的合成应用和研究得到了迅速的发展。与此同时,研究药物和DNA的相互作用是药物发现和药品研发过程中最重要的课题之一。G-四链体是富含鸟嘌呤碱基的DNA经过氢键相互作用形成的四链螺旋结构。这种结构能够有效的抑制端粒酶的活性,它能够阻碍端粒酶对端粒DNA引物的识别,使细胞正常凋亡,从而达到抗肿瘤的效果,近年来,以G-四链体为靶点的抗癌药物研究引起了人们的广泛注意。本文的工作重点是合成配合物,经过紫外滴定和荧光滴定手段研究已有钌配合物对G-四链体稳定性、DNA对金属离子的特异性识别。【关键词】铂(II)配合物,G-四链体,DNA,钌(II)配合物。ApplicationofBjerrumFunctioninDeterminationofStabilityConstants【Abstract】Cancerisacommonandfrequently-occurringdiseasesseriouslythreateningdeathcause.Sincecisplatinwasfound1967,after30yearsofdevelopment,thesyntheticapplicationsandresearchofmetalanti-cancerdrugsofplatinumobtainedarapiddevelopment.Atthesametime,theresearchofthereactionbetwwendrugsandDNAisoneofthemostinportantissuesintheprocessofdiscoveryanddevelopmentofdrugs.G-quadruplexisrichinguaninebasesofDNAwhichformedthroughthebondinginteractionoftheformationofthefourchainspiralstructure.Thisstructurecaninhibitthetelomeraseactivityeffectively,,andmakenormalcellapoptosis,soastoachieveantitumorpurpose.Inrecentyears,theG-quadruplextargetcancerdrugresearch.Thispaperisfocusedonthesynthesisofcomplexes,usingtheultraviolettitrationandfluorescencetitrationmethodtostudythestabilityofexistingmetalrutheniumcomplexestoG-quadruplexandDNA'sidentificationtothespecificityofthemetalions.【Keywords】Pt(II)complexes,G-quadruplex,DNA,Ru(II)complexes

目录1引言 31.1基于顺铂抗癌药物的研究意义 31.2金属铂抗癌药物的发展 31.3核酸的组成与结构 31.3.1概述1.3.2DNA结构1.4G-四链体与端粒、端粒酶和肿瘤的关系1.4.1G-四链体1.4.2G-四链体与端粒、端粒酶和肿瘤的关系1.5本文所作的工作 32理论部分 42.1DNA与配合物作用的研究方法 42.2各种生成函数法的测定原理 42.2.1光谱学方法 42.2.2流体力学方法 42.2.3密度泛函计算与分子模拟 43实验部分 53.1引言 53.2药品和仪器 53.2.1实验试剂 53.2.2实验仪器 53.3配合物的合成及表征 53.2.1配体的合成3.2.2铂配合物的合成3.4不同辅助配体的多吡啶配合物与G-四链体DNA的相互作用的研究3.4.1缓冲溶液的配制3.4.2配合物与DNA浓度的确定3.4.3.配合物与G-四链体相互作用的紫外——可见光谱滴定3.4.4配合物与G-四链体作用的荧光光谱滴定4结果和讨论 64.1钌配合物与G四链体电子吸收光谱研究 74.2钌配合物对端粒G-四链体的选择识别研究 75结论和展望 85.1结论 85.2展望 8参考文献 9谢辞 101引言1.1金属抗癌药物的发展1965年Rosenberg偶然发现顺二氯二氨合铂(cis-[Pt(NH3)2Cl2],又称顺铂)对大肠杆菌的分裂有抑制作用,并于1969年首次报道了顺铂具有很强的抗癌活性。1975年顺铂成为第一个用于临床的金属配合物抗癌药物。从此以后,金属药物及其抗肿瘤机理成为人们关注的研究热点。可是顺铂水溶性差,且仅能注射给药,缓解期短,并伴有严重的肾、胃肠道毒性、耳毒性及神经毒性,长期使用会产生耐药性。为此,人们开始展开对其它铂系抗肿瘤药物的研究,但结果并不理想。铂系抗肿瘤药物在临床使用上具有毒副作用大以及耐药性的问题,促使研究者积极寻找非铂系抗肿瘤药物。当前非铂系金属抗肿瘤药物研究主要集中在钌、铑、锡、锗等金属配合物,特别是钌配合物。作为铂类配合物的对照物,钌配合物很早就被运用于抗肿瘤实验。与顺铂相较,钌配合物毒性相对较小,在生物体内易于吸收,也易于代谢而且钌配合物有在肿瘤组织中发生聚集的特点,能够与DNA分子以共价键或者非共价键(静电结合、沟面结合和插入结合)方式缔合。从上世纪八十年代以来,钌配合物作为抗肿瘤药物的研究已经成为药物化学、化学生物学、配位化学以及生物无机化学的热点研究领域之一。1.2金属铂抗癌药物的发展自1967年美国密执安州立大学教授RosenbergB.和CampV.发现顺铂具有抗癌活性以来,经过30多年的发展,铂类金属抗癌药物的合成应用和研究得到了迅速的发展。顺铂、卡铂的开发成功和临床应用给癌症的治疗带来了一场新的革命。有数据表明,DNA链中许多相邻的碱基间两个氮原子距离为340pm,而顺铂中两个氯原子间的距离为330pm,两者恰好匹配,形成的铂化DNA寿命较长且不易被细胞蛋白如高移动组(HMG)蛋白识别并修复,因而将破坏肿瘤细胞DNA的复制,抑制细胞分裂,最终杀死肿瘤细胞。现在,顺铂和其它铂化合物已显示出它与病毒、细菌、寄生菌作斗争的潜力。除此另外,铂化合物也有希望用来诊断一些疾病。自从顺铂的抗癌活性被发现以来,铂类抗癌药物的研究和应用得到了迅猛的发展。如今,顺铂和卡铂已成为癌症化疗中不可缺少的药物。1995年,世界卫生组织对世界上近百种抗癌药物进行评价,顺铂的疗效、市场等综合评价得分名列前茅。顺铂和卡铂所获得的成就极大地鼓舞了各国学者积极研究更好、更有效的铂类抗癌新药。当前铂类配合物的合成已历经三代。顺铂是第一代铂类抗癌药物(结构如图1.1所示),该药的使用局限性是它的耐药性及剂量毒性人体器官特别是对肾脏的损害较大。第二代铂类配合物(结构如图1.2所示),其中以卡铂为代表(结构如图1.2所示),其水溶性优于顺铂,肾毒性低于顺铂,主要不良反应为骨髓抑制。第三代铂类代表化合物乐铂(结构如图1.3所示),乐铂全称是环丁烷乳酸盐二甲胺合铂(Ⅱ),研究表明,该药的抗肿瘤效果与顺铂、卡铂的作用相当或者更好,毒性作用与卡铂相同,且与顺铂无交叉耐药。图1.1第一代主要铂类抗癌药物的结构图1.2第二代主要铂类抗癌药物的结构图1.3第三代铂类抗癌药物结构当前铂类配合物研究的方向是:寻找比顺铂和卡铂疗效更好,不良反应更小,药学特性得到改进的化合物、扩大抗癌谱、开发与顺铂和卡铂无交叉耐药性的新型药物。1.3核酸的组成与结构1.3.1概述构成生命物质的两类主要大分子是蛋白质和核酸。核酸是由许多核苷酸聚合而成的生物大分子化合物,广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内,与蛋白质构成生命物质的两类主要的大分子。生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。核酸是生物体的重要组成物质,在蛋白质的生物合成上占重要位置,与生物的生长、发育等正常生命活动以及癌变、突变等异常生命活动中起决定性的作用。因此,核酸是现代生物化学、分子生物学和医学的重要基础之一。衰老和癌变是人类的两大医学难题,二者与端粒和端粒酶有密切关系。端粒是真核细胞染色体末端富含鸟嘌呤的DNA重复序列及一些结合蛋白组成的特殊结构。端粒除了提供非转录DNA的缓冲物之外,还能保护染色体末端免于融合和退化,在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长及寿命方面具有重要作用,并与细胞凋亡、细胞转化和永生密切相关。在生理状况下,随着细胞分裂次数增加,端粒在复制分裂过程中将逐渐丢失碱基,从而使端粒渐进性缩短。当端粒缩短至一定长度时细胞将进入生长停止衰老死亡阶段,即出现细胞的凋亡。研究发现,端粒酶能保证端丽的正常复制。除了胚胎组织、生殖细胞和少数造血肝细胞中具有端粒酶火星外,绝大多数体细胞中无端粒酶活性,可是,85%以上的肿瘤细胞端粒酶表示呈阳性。因此,以抑制端粒酶活性为目标的肿瘤基因治疗研究已成为一种新的药物作用靶点,而且极有希望成为最安全、有效的治疗肿瘤的理想途径。核酸是生物体内的高分子化合物。单个核苷酸是由碱基、戊糖和磷酸三部分构成的。根据所含戊糖的差异,核酸可分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类。核苷酸中的碱基分为嘌呤和嘧啶两类。DNA主要由含腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)的核苷酸构成。RNA主要由含腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)的核苷酸构成。1.3.2DNA结构DNA之因此能含有生物物种的所有遗传信息,是因为其结构非常复杂,每个人体细胞的DNA约含有100亿个碱基。DNA分子的结构,有以下三种:第一,DNA的一级结构。四种脱氧核糖核酸按照一定的顺序,经过3’-5’-磷酸二酯键连结,由一个核苷酸的戊糖环第3’位羟基与另一个核苷酸的戊糖环第5’位的磷酸以酯键相连,具有一定的方向性。碱基间遵循碱基互补配对原则,即腺嘌呤(A)一定与胸腺嘧啶(T)配对,鸟嘌呤(G)一定与胞嘧啶(C)配对。(如图1-4)因为它是指组成核酸的核苷酸之间连键的性质和排列的顺序,因此DNA的一级结构也被称为DNA碱基序列。图1-4核酸一级结构模型第二,DNA的二级结构。它是指磷酸和碱基按照一定顺序排列时,由于扭转角度和各种碱基排列方式不同而产生各种各样构型的DNA。DNA双螺旋结构是DNA二级结构的一种重要形式,它是指两条脱氧多核苷酸链反向平行盘绕所形成的双螺旋结构。由Watson和Crick两位科学家于1953年提出来的一种结构模型。在不同湿度和盐浓度下,DNA的双螺旋有着不同的构象。DNA的二级结构分为两大类:一类是右手螺旋,如A-DNA、B-DNA、C-DNA、D-DNA等;另一类是左手双螺旋,如Z-DNA。双链DNA的构象与其核苷酸序列和碱基组成有密切关系。一般地,含随机的碱基组成和序列的DNA双螺旋分子一般只能形成A、B、C构型;但严重重复的寡聚核苷酸则可形成其它的构型,如D、E、Z和P构型。改变一定的外界环境条件,如温度、相对湿度、盐的浓度以及有机溶剂等能够使这些构型进行相互的转化,而且这些转变从本质上都是改变核酸分子的内在运动来实现的。图1-5A-DNA、B-DNA和Z-DNA第三,DNA的三级结构。它是指DNA中单链与双链、双链之间的相互作用形成的三链或四链结构,由DNA双螺旋进一步扭曲,包括线状双链中间可能有的扭结和超螺旋、多重螺旋及环状DNA中诸如超螺旋和连环之类的各种拓扑学状态。在双螺旋DNA的大沟中存在多余的氢键给体和受体,这些氢键给体和受体能够和专一的结合分子(如蛋白质)发生相互作用,形成专一的复合物,也能够与单链DNA分子结合形成三螺旋DNA。三螺旋DNA一般是由一条寡核苷酸链经过与双链DNA形成Hoogsteen键或反Hoogsteen键,在其大沟处紧密缠绕而成。三螺旋DNA的组成结构基元是三碱基体,这些碱基体也具有专一性,具体体现在T、C、G、A分别要接在AT、GC、GC和AT碱基对上(见图1-6)。形成三螺旋DNA的第三条链的抗酶括性、水溶性、脂溶性和毒副作用等因素直接影响其作为治疗药物的可能性。因而合成能抗核酸酶能力强、水溶性和脂溶性适当、毒副作用小的寡聚核苷酸片段和提高三螺旋DNA稳定性的主链修饰方法仍是当前的研究热点。图1-6三螺旋DNA结构1.4G-四链体与端粒、端粒酶和肿瘤的关系1.4.1G-四链体G-四链体(G-quadruplex)是一类特殊的DNA二级结构,在基因组中的一些鸟嘌呤富集区域,具有形成这一特殊结构的倾向。这些区域包括端粒末端G重复序列,以及一些重要基因的启动子区域,因此G-四链体的形成或拆散可能涉及到体内的一些重要生理过程的调控,比如细胞凋亡、细胞增殖、信号转导和肿瘤形成等。另外,G-四链体结构作为一种特殊的DNA二级结构,与普通双链具有显著的结构差异,能够成为药物选择性识别的靶点。因此,研发与G-四链体相互作用的小分子抗癌药物受到了广泛的关注。四链体结构是由富含GDNA单链,在特定离子强度和pH值条件下,由单链之间或单链内对应的G残基形成Hoogsteen碱基配对,从而使四条或四段富GDNA单链旋聚成一段特殊的DNA二级结构。由于富GDNA中的G残基都是成串排列的,因此,当四条或四段富G单链DNA的G残基并肩形成Hoogsteen碱基配对时,就形成了一个由4个G残基的杂环平面联合形成的G-quartet平面。在4条链中相应的的G之间形成的四分体平面层层堆叠,就形成一段极其稳定的四链体DNA结构(见图1-7)。由于这段四链体是以G残基为主形成的,故称为G-quadruplex。其中每个G碱基既是氢键的受体,又是氢键的给体,她们在结构上是等价的。在两个相邻的四碱基体的中央会形成一个空腔,空腔内有负电性的羰基氧存在,使得此处易于结合阳离子。四链体四链体之间经过π-π作用相互堆积结合在一起。G-quadruplex特殊结构使得它能够成为特异性的DNA靶点。图1-7G-quadruplex结构大量研究表明含不同G序列所形成的四螺旋结构是不同的,即使是相同的序列也能够按不同的方式进行组装。G-四链体DNA能够经过单链,双链以及四链形成三种不同的四螺旋结构,每种结构又有多种异构体(见图1-8)。大量研究表明含不同G序列所形成的四螺旋结构是不同的,即使是相同的序列也能够按不同的方式进行组装。现在普遍认为经过控制适当的条件,如温度、DNA浓度、缓冲液中的Na+和K+的浓度等能够改变G-四链体的构型。图1.8几种典型的G-四链体结构a:分子间四聚体结构(平行);b:分子间二聚体邻位发夹型结构(反平行);c:分子内椅状结构(反平行);d:分子内蓝状结构(反平行);e:分子内螺旋桨状结构(平行);f:分子内混合型结构1.4.2G-四链体与端粒、端粒酶和肿瘤的关系端粒是由高度重复序列的端粒DNA和端粒结合蛋白组成的复合物。20世纪三四十年代,HermannMuller和BarbaraMcClintock同时提出了端粒的概念。它是染色体末端的一种特殊结构,能防止染色体DNA降解、末端融合、缺失及非正常重组维持染色体的完整和稳定,并保证细胞正常分化。端粒的主体是双螺旋结构,富GT链与富CA链配对,但3’末端突出为一段单链悬挂。由于缺乏模板的引导,染色体合成过程中传统的DNA聚合酶就无法完全合成这个末端悬挂,从而造成端粒缩短,这就是所谓的”末端复制问题”。端粒是真核细胞染色体末端的一种特殊的核蛋白复合体,由高度重复序列的端粒DNA和端粒结合蛋白组成[17]。不同物种的端粒DNA序列存在差异,但都以富含鸟嘌呤(G)的重复序列为特征。人的端粒约有15kb重复串联的TTAGGG构成的,而且以50-200bp次分裂进行缩短,主要组成部分为5-15kb长的双链DNA和3′末端100-200bp长的G-单链悬垂(G-overhang)DNA。端粒的主体是双螺旋结构,富GT链与富CA链配对,但3′末端突出为一段单链悬挂。这段单链在名为Shelterin[18]Telosome[19]的蛋白结构催化下折回到端粒内部双链,并将该端区域的一段自身链置换出来,取而代之与互补链配对,形成T-loop(telomereloop)结构,而3’末端单链被”包埋”在T-loop中,端粒末端便形成了一个与外界隔绝的闭合结构。正是由于这个闭合结构,端粒显现出了对于染色体的稳定及其基因组的完整非常重要的作用,它为染色体末端提供保护性,防止染色体互相融合、重组及一些外切酶、连接酶的作用,防止DNA的损伤,并计数在线性DNA复制时出现的末端DNA片断的丢失。同时,这种结构也使端粒酶不可能持续与端粒3’末端单链发生作用,从而保证了端粒长度的恒定。图1.9左图为人染色体末端的端粒DNA;右图为人端粒结构示意图正常细胞的端粒随着细胞分裂进行性缩短,在每一次的复制循环中端粒都要减少50-100个碱基对,细胞在进行大约50次分裂后就开始衰亡。端粒的长短在细胞癌变和衰老中起着重要作用。而端粒的长短可由端粒酶调节。1985年Greider和Blackburn首次从四膜虫细胞提取液合成端粒的实验中,发现了端粒酶活性并同时证实了端粒酶具有维持端粒长度的作用。端粒酶是一种核酸蛋白质复合物,它能以自身RNA为模板,将真核生物染色体末端端粒DNA加以延伸的酶,因此它又被称为特化RNA依赖性DNA聚合酶、反转录酶、端粒末端转移酶。端粒酶由三个部分组成,包括端粒酶RNA(+为中心的d-d跃迁所产生的配位跃迁光谱;2)配体至金属或金属离子(LMCT)或金属离子至配体(MLCT)的电荷迁移光谱,简称荷移光谱;3)以配体L为中心的配体间的电子转移光谱(IL)。其中金属离子向配体的电子跃迁发生在金属离子具有充满的或接近充满的t2g轨道,而配体具有最低空Π轨道的配合物中。核酸分子由于其嘌呤和嘧啶碱基具有共轭双键体系,因此在紫外区260-290nm处有特征的吸收,这种吸收随分子中各碱基的种类、所占比例以及碱基间的堆积方式等的改变而有所不同。一般来说,结构越有序,吸收值越低。因此,我们可利用紫外吸收光谱对上述各核酸分子结构的形成进行初步判断。当配合物插入到DNA碱基对时,对应的吸收峰产生明显的减色效应,并伴有一定程度的红移。2.2.1.2荧光光谱荧光光谱法是研究小分子与核酸相互作用的主要手段。荧光物质在激发光的激发下,由基态跃迁到较高的能级(激发态)后,首先经过内转换过程消耗一部分能量,回到第一电子激发态的最低振动能级,同时以光量子的形式发射能量,即为荧光。配合物以插入方式与DNA作用后,由于它的振动模式受到抑制,或免受水分子的淬灭,配合物受到了DNA碱基疏水环境的保护,其发光强度一般会增强。并根据强度的变化来判断与DNA作用的强弱。2.2.1.3圆二色谱及DNA解旋技术圆二色谱能够检测有无旋光物质的存在[51,52],或比较左、右旋物质的混合物中哪种含量更多,测定透析后的配合物的CD光谱,还可帮助确定配合物与DNA的相互作用有无异构选择性。G-四链体或I-motif结构在圆二色谱中有着特殊的峰结构:平行型G-四链体在265nm附近有正的最大吸收峰,240nm附近有负的最大吸收峰;反平行型的G-四链体在295nm附近有最大正吸收峰,260nm有最大负吸收峰;混合式的G-四链体构型则包括了290nm附近的正吸收以及特征的265nm附近的肩峰。加入配合物后,会使其吸收峰发生移动并改变其强度,明显影响G-四链体的CD光谱。这样的一种现象便有了一定的选择性变化,更容易区分G-四链体的构型转化,反应配合物和DNA的结合模式。又由于CD光谱法灵敏度高,样品在很低的浓度下就能够检测到特征吸收,圆二色谱成为一个很有效的检测手段。利用圆二色谱仪同时能够做热变性的实验。DNA的变性指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。核酸由多链结构(双螺旋或四螺旋)变为单链结构的中点温度反应了该结构的稳定性,该温度的变化也反应了结构稳定性的变化。配合物与DNA作用方式不同,则DNA熔化温度(Tm)变化程度就不同。当配合物与DNA以插入方式作用时,DNA熔化温度(Tm)变化最大。2.2.1.4其它光谱法线二色谱(LD)和电二色谱(ED):线二色谱和电二色谱都是采用与固定光轴方向(在流动梯度体系中旋转和外加电场,使DNA螺旋轴取向固定)平行或垂直的平面偏振光,测量结合DNA后的配合物对垂直和平行于DNA的线偏振光的不同吸收。瞬时共振拉曼光谱:能够探测微环境的变化对配合物激发态的性质或行为的影响,从而能够用来研究配合物与DNA的作用机理。2.2.2流体力学方法应用流体力学技术测试DNA双螺旋长度变化。在确定小分子化合物与DNA作用模式方面,流体力学方法(如粘度[53],沉降速度及在凝胶中的泳动速度等)有其独特的应用。2.2.3密度泛函计算与分子模拟密度泛函理论能够很好地考虑到体系中电子的相对能量,特别适合于单线态金属配合物的计算。由于密度泛函方法考虑了电子相关,计算速度快,而且能有效地估算配合物的分子结构、电子结构及其与DNA相互作用的前线分子轨道,引起了理论化学家的注意。密度泛函理论的计算对于科学家们设计新的功能独特的配合物有着重要的理论指导意义。另外,还有pH滴定、热力学方法和电化学方法等,不过这些方法在研究小分子化合物与DNA键合机理方面不太常见。

3实验部分3.1引言本章介绍了铂多吡啶配合物的合成步骤,及其配合物的表征。在表征过程中特别是质谱方面上,有些系列的配合物均与应得的分子量有偏差,说明反应过程中可能发生了其它的副反应,因此实验步骤还有待探索。现列出实验步骤,以供参考、指正,预防此后的科研出现不必要的重复工作。本文设计合成得出了铂配合物[(ptap)Pt(en)](PF6)2,经过核磁、质谱表征方法证明为此种配合物。3.2药品和仪器3.1.1实验试剂试剂名称纯度级别生产厂家或提供商1,10-邻菲咯啉AR国药盐酸羟胺AR国药甲醇AR国药氯仿AR国药钯碳催化剂AR国药丙酮AR国药乙醇AR国药氢氧化钾AR国药浓硫酸AR国药石油醚AR国药氢氧化钠AR国药二甲基甲酰胺AR国药乙二醇AR国药四氯合铂(Ⅱ)酸钾AR国药乙二胺AR国药乙二醇AR国药六氟磷酸铵98%阿拉丁乙醚AR国药氯化钾AR国药氯化钠AR国药Tris碱AR国药3.1.2实验仪器核磁共振波谱Brucker400M核磁共振波谱仪记录;电喷雾质谱(ES-MS)用LCMS-A型液相色谱-质谱联用仪;高纯水用SZ97自动三重蒸馏水发生器获得;电子吸收光谱用LambdaBio40紫外分光光度计测量;荧光光谱用HitachiFP7000荧光光度计测量。3.2配合物的合成及表征3.2.1配体的合成1)5-硝基邻菲罗啉的合成称取邻菲罗啉5g置于100mL圆底烧瓶,加入30mL浓硫酸,缓慢升温至150℃,再逐滴加入15mL浓硝酸,反应物继续回流3小时后停止反应,冷却至室温,将反应混合液倾入含500g冰的烧杯中,用事先配制好的NaOH溶液(50gNaOH溶于200mL左右蒸馏水)调节反应液的pH值至接近中性(pH~5)。抽滤得浅黄色固体,用冰水洗涤三次以上,所得产物在50℃干燥后备用。产率87%。2)5-氨基-6-硝基邻菲罗啉将4g(17.8mmol)5-硝基-6-氨基邻菲罗啉溶于100mL无水乙醇并加热回流,待反应物全溶之后加入8g(118.9mmol)盐酸羟胺,此时析出浅黄色悬浮固体,并在45分钟之内,往上述混合液中滴加KOH的乙醇溶液(9gKOH溶于100mL无水乙醇),反应混合物逐渐变为棕黄色。继续回流30分钟后停止反应,冷却至室温后,将反应液倒入300-600mL冰水中,静置一夜后抽滤,滤饼分别用水、甲醇和氯仿洗涤后干燥,得产物1.6g产率35%。3)5,6-二氨基邻菲罗啉将0.4g5-硝基-6-氨基邻菲罗啉溶于400mL无水乙醇,加热回流至全溶,再加0.2gPdC催化剂(10%Pd)搅拌混合均匀,并在15min之内逐滴加入4mL水合肼(80%)。继续回流1小时后停止反应,趁热过滤,旋蒸浓缩滤液,再加入过量的石油醚后析出黄色固体,抽滤后用石油醚洗涤滤饼真空干燥。产率68%。4)双呋喃基dpq-df的合成5,6-二氨基-1,10-邻菲罗啉(0.25g,1.2mmol),2,2’-双呋喃二酮(0.23g,1.2mmol),溶于20mLDMF置于100mL三颈瓶中,在氮气保护下回流2天。反应结束后,冷却抽滤,所得固体用温甲醇洗涤,干燥,产物黄绿色絮状固体,净重0.25g,产率57%。3.2.2铂配合物的合成对于铂配合物的合成,设计了如下一种,并对其进行了合成。因时间关系,没有对其进行再次的纯化。1)(dpq-df)PtCl2的合成将dpq-df0.1822g(0.5mmol)加入一圆底烧瓶中,向其中加入35mL乙二醇加热近沸,全部溶解后,缓缓加入用5ml高纯水溶解的0.2090g(0.5mmol)的K2PtCl4(梅红色晶体),130oC加热回流6小时,出现红棕色沉淀。将其自然冷却至室温,避光放置过夜。过滤,用水洗涤,去掉未反应的K2PtCl4,然后用少量乙醇、乙醚洗涤并进行干燥。最后得红棕色粉末固体0.2432g,产率:77.15%。2)[(dpq-df)Pt(en)](PF6)2的合成将乙二胺240μL加入混有20mL乙二醇和0.2400g(dpq-df)PtCl2的圆底烧瓶中,加热100oC回流3h,未全部溶解。待反应完成后,加少量水稀释,过滤出不溶物(为反应的配体),向滤液中加入NH4PF6饱和溶液,产生沉淀,静置一夜后,用慢速滤纸(因沉淀颗粒太小)两层进行过滤。用乙醇、乙醚洗涤干燥,得到咖啡色固体0.2804g,产率81%。3)[(dpq-df)Pt(en)](PF6)2的表征图3-1[(dpq-df)Pt(en)](PF6)2的1HNMR谱图4.2[(ptap)Pt(en)](PF6)2的质谱示意图3.3不同辅助配体的多吡啶配合物与G-四链体DNA的相互作用的研究3.3.1缓冲溶液的配制缓冲溶液用高纯水配制缓冲溶液1:100mMKCl,10mMTris,pH=7缓冲溶液2:100mMNaCl,10mMTris,pH=73.3.2配合物与DNA浓度的确定3.3.2.1配合物浓度的确定配合物1:[Ru(bpy)2(dpqdf)]2+配合物2:[Ru(phen)2(dpqdf)]2+称取一定质量配合物分别用高纯水和缓冲液1、2、3、4溶解3.3.2.2DNA的处理和浓度确定1)富G单链DNA取一定质量富G单链DNA,溶于高纯水,放入4℃冰箱保持24h,备用。浓度确定:用紫外分光光度计测量DNA在260nm的吸光度值A260。摩尔消光系数为2.285×105m3cm-1,DNA浓度[DNA]=K×A2602.285×105(K是稀释倍数),单位是mol∙L-1。2)富G四螺旋DNA取两份一定质量富G单链DNA(核苷酸序列为5'-AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG-3'),分别溶于缓冲液1及缓冲溶液2中,缓冲溶液476uL,密封加热到90℃,并保持5分钟。然后自然冷却到室温,放入4℃冰箱中保持24小时,备用。浓度确定:用紫外分光光度计测量DNA在260nm的吸光度值A260。摩尔消光系数为2.285×105m3cm-1,取DNA50uL,再加入4950的缓冲液,稀释倍数为100倍,DNA浓度[DNA]=K×A2602.285×105(K是稀释倍数),单位是mol∙L-1。3.2.2.3.配合物与G-四链体相互作用的紫外——可见光谱滴定在紫外-可见吸收光谱仪的双光路系统中,先往参比池中加入475uL缓冲溶液做参比,基线稳定后,往样品池中加入浓度为10uM的配合物溶液25uL,用微量进样器每次往参比池和样品池中加入5uL的DNA储备液,混匀5min后,使DNA在配合物溶液中的浓度比值不断增加,直至饱和。在200-800nm范围内检测配合物的电子吸收光谱的变化。3.2.2.4配合物与G-四链体作用的荧光光谱滴定在样品池中加入1950uL的缓冲溶液以及50uLDNA储备液,测定溶液在620nm(440nm激发)处发光强度,随后样品池中每次加入10uL浓度为200uM的配合物1、2溶液,用移液枪重复吸吐,混匀,5分钟后检测荧光情况,如此重复,滴加10次。

4结果和讨论4.1配合物与G四链体电子吸收光谱研究紫外光谱是研究小分子配合物与DNA相互作用的一种最简便、最常见的技术。价键理论认为,每个分子都有一系列严格分立的能级,处于低能级的分子受到光的能量激发时,可吸收特征频率的光子而跃迁到较高的能级,进而产生吸收光谱。许多小分子配合物本身在紫外可见光区有特征吸收峰,当小分子配合物与DNA相互作用时,一般会出现相应的特征变化,表现为吸收谱带变宽、吸收峰红移(或蓝移)及减色效应)。这种现象的产生往往来源于小分子配合物发色团与DNA碱基电子云的强烈相互作用。因此,紫外可见吸收光谱能够用来研究小分子配合物与G-四链体DNA的相互作用,进而根据其产生的相应特征变化推测其作用模式。在紫外光谱图中(图4-1、4-2、4-3、4-4),300nm以下的吸收峰为配体间的Π-Π*跃迁峰(IL),而可见光区450nm附近的吸收峰为配合物的MLCT峰,能够归属为Ru(dΠ)dpqdf(Π*)的跃迁吸收。可是由于两个吸收峰所在波长比较接近,因此在图中只表现为一个宽的吸收带。配合物与两种端粒DNA作用后的LC峰和MLCT峰表现出了明显的减色效应和一定程度的红移现象,因为DNA在可见光区没有吸收,推测配合物1、2在K+、Na+缓冲溶液环境中都能与G-四链体发生某种相互作用。同时,一般认为配合物与DNA作用时,峰值减小并伴随红移,电子吸收值改变越大,则配合物与DNA作用越强。从图中能够看出,对于K+缓冲条件下,以MLCT峰看,配合物与DNA作用后的减色率比在Na+缓冲条件下的减色率大。产生以上现象的原因可能是由于K+环境下形成的DNA微观结构更有利于其与配合物的键合。图4-1钾离子缓冲溶液配合物1与端粒G-quadruplex作用的紫外滴定曲线,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5μM)。图4-2钠离子缓冲溶液配合物1与端粒G-quadruplex作用的紫外滴定曲线,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5μM)。图4-3钾离子缓冲溶液配合物2与端粒G-quadruplex作用的紫外滴定曲线,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8μM)。图4-4钠离子缓冲溶液配合物2与端粒G-quadruplex作用的紫外滴定曲线,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8μM)。四种配合物在260-280nm附近出现较强的吸收峰,在450nm附近出现较弱的的吸收峰,均可归属为配体中的Π-Π*跃迁,450nm附近的吸收峰对应于金属钌配位体电荷转移(MLCT)。从图中显示,随着AG3(T2AG3)3浓度的逐渐增加,配合物在紫外区吸收光谱都能够出现明显减色现象和一定红移,但MLCT峰的峰值与位移变化不大。以上信息表明配合物能够与AG3(T2AG3)3的碱基发生强烈的Π-Π*作用。根据图4-5、4-6、4-7、4-8,DNA滴定缓冲溶液450nm附近的吸收峰变化趋势图表明,DNA结合了钌配合物,保护了钌配合物的主配体,使得吸收峰减小。一般对于双链DNA来说,当配合物以插入方式进入DNA的碱基对时,与碱基对发生Π电子堆积效应,其Π*空轨道与碱基的Π电子轨道发生耦合,能级下降,从而导致Π-Π*跃迁能减小,产生红移现象。同时,耦合后的Π轨道因部分填充电子,使Π-Π*跃迁几率减小,产生减色效应。可是,对于插入剂结合到四链体里面的G-四分体之间是相当困难的,不但仅是因为四链体是一个稳定和刚性的结构,同时因为破坏四链体的完整性需要耗费很高的能量。因此,推测配合物1是经过堆积到G-四链体末端的四分体与G-四链体作用的,即以外部堆积模式结合的。图4-5DNA滴定钾离子缓冲溶液配合物1在450nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5μM)。图4-6DNA滴定钠离子缓冲溶液配合物1在450nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5μM)。图4-7DNA滴定钾离子缓冲溶液配合物2在450nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5μM)。图4-8DNA滴定钠离子缓冲溶液配合物2在450nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,450nm左右的吸收峰变化是由于DNA浓度的增加(从0,1,2,3,4,5μM)。4.2钌配合物对端粒G-四链体与DNA作用强度的研究人类的端粒含有重复衔接的双链DNA序列(5′-TTAGGG):(5′-CCCTAA)。这些重复序列的DNA可能形成特殊的拓扑结构。富G的链能在K+、Na+等阳离子诱导下形成由堆积的四分体组成经过氢键稳定的G-quadruplex结构。G-四链体被认为对体内端粒酶延长端粒具有负向调控作用。当前,G-四链体被认为是潜在的癌症治疗靶标。一般认为,多吡啶钌配合物与DNA结合后,如果出现荧光增强现象,说明配合物与DNA之间发生了某种方式的结合。荧光增强幅度的大小,基本上能够反映出配合物与DNA作用的强弱。因此,我们也能够根据作用强度差异表现出的荧光强度变化来识别不同种类的DNA。从图4-9、4-10、4-11、4-12中能够看出,DNA在钾、钠离子缓冲溶液中几乎没有发光。当加入配合物1、2后,荧光显著增强,推测产生以上结果是由于G-四链体末端的四分体结构便于平面芳香环堆积,因此荧光大幅增强。说明配合物与G-四链体的键合能力很强。因此能够经过观察荧光强度的变化情况来识别特异性端粒结构,图中变化情况还显示K+环境下G-四链体的加入对配合物1,2的荧光强度影响大于Na+环境下的荧光强度变化。也说明K+缓冲环境对着两种结构识别区分效果更好,这可能是由于K+缓冲条件下形成的的G-四链体更有利于其与配合物的作用。图4-9钾离子缓冲液中,配合物1与G-quadruplex作用的荧光滴定曲线,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物1浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。图4-10纳离子缓冲液中,配合物1与G-quadruplex作用的荧光滴定曲线,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物1浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。图4-11钾离子缓冲液中,配合物2与G-quadruplex作用的荧光滴定曲线,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物1浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。图4-12钠离子缓冲液中,配合物2与G-quadruplex作用的荧光滴定曲线,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物1浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。根据图4-13、4-14、4-15、4-16,由配合物滴定DNA钾、钠离子缓冲溶液,由于DNA是多齿配体,能够与配合物进行多方面结合,荧光强度不断增强,结合比大于一比一。图4-13配合物1滴定DNA钾离子缓冲溶液在600nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物1浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。图4-14配合物1滴定DNA钠离子缓冲溶液在600nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物1浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。图4-15配合物2滴定DNA钾离子缓冲溶液在600nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物2浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。图4-16配合物2滴定DNA钠离子缓冲溶液在600nm左右的吸收峰滴定趋势图,[Ru]=10uM,600nm左右的吸收峰变化是由于配合物2浓度的增加(从0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μM)。

5结论和展望5.1结论本文设计合成了一个铂配合物,运用两种手段研究了钌配合物与端粒DNAG-四链体结构的键合作用,得到了以下结论:(1)经过核磁、质谱表征方法证明首次合成了铂配合物即[(ptap)Pt(en)](PF6)2,只是由于时间限制,没有进行再次提纯。(2)紫外吸收光谱发生一定的增色效应,但变化幅度很小,钌配合物很有可能与DNAAG3(T2AG3)3的作用模式是外部堆积模式,又由于此DNA易形成G-四链体结构,因此发生的作用很可能为非特异性结合。有明显的红移现象也说明了,配合物和DNAAG3(T2AG3)3是有发生结合的。(3)配合物与DNA作用后的减色率比在Na+缓冲条件下的减色率大,可能是由于K+环境下形成的DNA微观结构更有利于其与配合物的键合。也说明K+缓冲环境对结构识别效果更好,这可能是由于K+缓冲条件下形成的的G-四链体更有利于其与配合物的作用。(4)荧光大幅增强说明配合物与G-四链体的键合能力很强,由于G-四链体末端的四分体结构便于平面芳香环堆积,因此能够经过观察荧光强度的变化情况来识别特异性端粒结构。5.2展望端粒酶的活性与细胞的恶性转化具有密切关系。本文的研究虽然取得了初步的成功,但依然任重道远,尚有许多有待进一步深入进行的研究工作,这里择其要者简要讨论如下:(1)本文从现象上分析了两种种多吡啶单核钌配合物与G-四链体的结合情况,下一步能够将钌多吡啶配合物作为端粒G-四链体分子开关的研究,以及运用分子模拟等手段深入探究其与G-四链体具体的结合方式和结合位点。(2)细胞实验,研究配合物对肿瘤细胞中端粒的抑制效果(3)本文说明[(ptap)Pt(en)](PF6)2的合成是可行的,下一步工作在于对其进行提纯,进行分析师谭,探讨其余G-四链体的作用机制。

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64.对中国中小企业信用管理的研究65.对中国中小企业创业版上市公司成长性分析的探讨66.对连锁经营企业资金运行管理的思考67.推行全面预算管理

建立新型财务管理体系68.机会成本及其在企业财务管理中的应用69.建立以预算管理为中心的财务管理模式70.论边际成本在企业理财中的运用71.企业融资障碍及对策研究72.高新技术企业财务管理若干问题的思考73.企业的扩张与财务管理74.行为财务管理新论75.论破产企业财务管理存在的问题及对策76.企业核心能力与财务管理能力研究77.我区企业利用外资融资效率分析78.我区中小企业创新模式研究—基于财务视角79.企业集团成本管理的创新问题研究80.集团公司财务管理模式的探讨81.非营利组织财务管理面临的问题及对策研究82.企业激励与绩效评价问题研究83.我区企业集团财务战略选择问题研究84.非营利组织财务管理创新问题研究85.企业集团资本运营问题研究86.论表内融资与表外融资的关系87.EVA—现代企业的最佳绩效评价指标88.对杜邦分析法的再思考89.EVA与传统业绩评价方法结合问题研究90.财务分析指标体系创新问题研究91.非财务分析法与财务分析法结合有效性研究92.非财务指标在业绩评价体系中运用的有效性问题研究93.关于经营者业绩评价的思考94.企业融资效率实证研究95.信息时代财务控制趋势分析96.期权在企业投资决策中的应用97.企业集团融资中的风险规避问题研究98.我区企业的融资创新问题研究99.现代资本预算技术在企业理财中的运用100.国有资本减持的财务风险研究现在,我把自己多年来撰写毕业论文经验,总结如下,一并赠送给您,希望能帮到您:毕业论文注意事项前言毕业论文(学士学位论文)是本科生毕业设计成果的”固化”与”浓缩”,其规范性历来为指导教师和论文审阅人所重视,几乎系评语中不可或缺之内容。毕业论文的规范性由此可见一斑。各届学生毕业论文中出现的问题比比皆是,笔者将其加以整理,匆匆成文,姑且称之为”毕业论文注意事项”。须指出,本文全部内容乃笔者之见,难免以偏概全、挂一漏万,更无权威性可言,故不敢称之为”毕业论文写作规范”。文中不当之处在所难免,欢迎同仁批评指正,共同商榷,以飨毕业班之学生。或许一些人认为,给一篇毕业论文做”样板”,诸多问题都将迎刃而解;网站上提供论文模版供学生下载更为上策。但笔者必须指出,许多应注意的细微之处,远不是给一篇范文或给一个模版就能做到的,此乃撰本文之初衷。第一章关于插图1．1图号插图要有图号,格式为”图m-n”。其中m为该插图所在的章号,n为本章中该插图的顺序号,m与n均为阿拉伯数字。每一章的插图独立编号。例如第3章的第4个插图标记为”图3-4”1．2图名(图注)图名应确切反映该图的含义,一般为名词性短语,力图简明扼要。图名放于图号后,与图号隔两个全角空格。为便于叙述,不妨将图号与图名并称为”图题”。1．3插图的形式插图一般有四种形式,即手绘图、屏幕抓图、扫描图、文件插图。来自电子版参考文献的插图,多数是模糊不清的,故建议用手绘图取而代之。1．3．1手绘图手绘图系指在Word中直接用绘图命令绘制的图。该类插图所占磁盘空间最少,系使用最多的一种插图形式,数据流图、结构图、程序框图一般用此法绘制。绘图所用图例应注意规范。程序框图的选择框要注意标”是否”或”YN”,起始框、终结框注意用圆角矩形(建议使用专门用于画框图的软件Visio画框图);数据流图的数据线需标数据名称,数据加工与数据存储之间的箭头无数据名称。其它图形的图例参考有关文献。手绘图时必须一丝不苟,搭结欠量、过量均不合格;图中的文字放入文本框中,框内文字注意横纵居中;线框交界处注意匀称;框内文字的笔划宜完整,不得被线框遮盖;文字、线条不得交叉;图中文字尽可能使用统一的字体、字形、字号,其中字号原则上不大于正文字号(以小半号为宜)。微调线条位置、长短时,可将Alt键和箭头键配合使用。观察线条是否存在搭接问题时,可选用500%的显示比例,否则难以看出搭接问题。线条、文字等元素输入完毕后,应选中与所绘之图有关的所有线条、文本框,按鼠标右键,选”组合”,将各元素组合在一起。否则,很有可能排版后”东一只胳膊、西一条腿”,甚至”丢胳膊少腿”。1．3．2屏幕抓图此类图系指使用PrtScreen或Alt+PrtScreen键经过剪贴板获得的图像。采用屏幕抓图制作插图时,应”量身定做”,抓图后不要缩放,以免模糊。1．3．3扫描图如使用扫描图片,分辨率要求为300线,颜色模式为灰度,嵌入文中后不要缩放。1．3．4文件插图文件插图系指使用”插入|图片|来自文件…”命令插入的图像。采用文件插图时,尽量不要使用JPG等类型的压缩图片,以免影响打印效果。1．4插图的位置尽量将插图与正文中的相关文字说明置于同一页。放入前一页或后一页,乃不得已而为之(例如图太大等)。插图一般居中放置;图题位于插图的下方,用宋体5号字,居中放置;图题与插图放于同一页中,即两者不得跨页。换言之,图题不能位于某一页的页首。一张图一般不得跨页(大的程序框图例外,但需按正规要求标清楚)。1．5插图的排版插图很小时,建议使用环绕排版(四周排版),插图前、图题后均应留适当空间,切勿与正文”紧密相连”。第二章关于表格论文中的表格一般使用Word的表格功能直接制作,使用Excel制作亦可。2．1表号表格要有表号,格式为”表m-n”。其中m为该表格所在的章号,n为该章中该表格的顺序号,即每一章的表格独立编号。例如第3章的第4个表格标记为”表3-4”2．2表名表名应确切反映该表的含义,一般为名词性短语,力图简明扼要。表名放于表号后,与表号隔两个全角空格。为便于叙述,不妨将表号与表名并称为”表题”。2．3表格尽量将表格与正文中的相关文字说明置于同一页,放入前一页或后一页乃不得已而为之(例如表格太大等)。表格一般居中放置;表题位于表格的上方,用宋体5号字;居中放置;表题与表格放于同一页中,即两者不得跨页。换言之,表题不能位于某一页的页尾。表格本身能够跨页,但次页的表应加一个表头(注意,不是标题,是表头,即表格的首行),或在次页首部加注”(续表)”。2．4表格内文字的排版表格内文字应比正文小半号,一般居中放置,但文字量较大且长短不一时,以左对齐为宜。表格设计应美观、大方,表格风格尽量一致,推荐使用三线式表格。表格前、后均应留适当空间,切勿与正文”紧密相连”。第三章关于摘要5．1格式中英文摘要各占一页,首行写”摘要””ABSTRACT”(”摘要”之间空两格,采用三号字、黑体、居中,与内容空一行);第三行开始写摘要内容,首行空两格(内容采用小四号宋体)。最后单独列一行,写中英文关键词。关键词一般提供3-5个即可,写于1-2行上,以分号分隔。中文关键词前冠以”关键词:”,靠左;英文关键词前冠以”Keywords:”,亦靠左。第二行首个关键字与第一行的首个关键字对齐。具体要求参见模板。5．2内容课题的意义,工作方法,结果与结论,后续研发建议等。摘要中不可大段大段地引用正文中的段落。切忌使用自动翻译工具将中文摘要翻译为英文摘要。第四章关于目录4．1目录的制作目录必须由Word自动生成,不得手工输入,以免后患无穷。制作方法:先使用格式工具栏的第一个图标将各级标题”格式化”,再使用”插入|索引和目录”便可自动生成。目录生成后,在首行加上”目录”二字,采用黑体三号字,居中。目录只列到三级,一、二、三级标题依次内缩一字,分别采用四号、小四号、五号宋体。4．2目录页的位置目录页位于正文第一页之前。正文首页为论文第一页。目录右端的页号应对齐。目录页超过一页时,应有页码,一般采用大写罗马数字,以区别于正文。注意:目录之前的各页均无页号、无页眉。第五章关于正文5．0关于页面新的一章应换页。正文任何一页的尾部均不得留很多空行(一章的末页除外)。图表过大,致使本页剩余空间容纳不下时,可将其放于次页,并将其后的文字上提至前一页。编了号的图表,原则上可放于正文的任何一页,但一般与正文中的说明性文字不要相隔甚远。只有正文才有页眉。换言之,正文之前的各页无页眉;自”参考文献”起,以后各页亦无页眉。正文各页的页脚只有页码,且居中放置。5．1关于体例第一章章标题(黑体、小三号、居中)1.1节标题(黑体、四号、顶格)1.1.1小节标题(黑体、四号、顶格)一、段落标题1(宋体、小四号、空2格、用1.25倍行间距)1.段落标题2(1)段落标题3=1\*GB3①段落标题4论文正文注意:无论哪一级标题,尾部均无标点符号。不得悬空出现一个标题,如:系统的基本原理提示:根据往届学生论文情况,各级序号尽量不用Word自动生成,以免格式难以控制。5．2关于字体、字形、字号、行距、字距(按模版)正文一般用小四号宋体,行距采用1.5倍,字距采用默认值。5．3关于分页新的一章开始,要换页,但不要用多个回车进行分页(否则后患无穷),而要用^Enter(即Ctrl+Enter)插入换页符;标题不得位于一页的末行;图题不得位于一页的首行(前已提及,此处强调);表题不得位于一页的末行(前已提及,此处强调);不能因图表过大而提前换页(即将大的图表放入次页);可将后页的部分文字提到前页来解决此问题。5．4关于文献引用引用文献处,用[n]以上角标形式标注,其中n为参考文献序号。文献引用属正常现象,无可厚非,但忌讳大量抄录,特别是整章整节内容大肆抄袭。软件介绍、开发工具介绍、数据库原理介绍宜少花笔墨。而且,所”写”内容出自何文献,需以此方法注明(通俗地讲,抄自何处,应让人一目了然)。5．5关于图表只要出现插图或表格,在正文中必须要有相应的说明。例如:”系统的数据流图如图3-1所示”,”数据字典示于表3-1”,等等(前已提及,此处强调)。不得出现”…如下图所示”、”…如下表所示”图表中的文字应注意严肃性,严禁出现不良人名、地名,忌讳影星、歌星名字或