阿霉素在大鼠体内的药动学及组织分布特征

阿霉素在大鼠体内的药动学及组织分布特征

氨基乙醇（dox）是一种含有大量抗瘤活性的抗高血压药物。它是一种抗肿瘤光谱广、活性强的抗癌药物。广泛用于治疗乳腺癌、结肠癌、肝癌、血红蛋白等肿瘤。但因其对消化道、心脏及骨髓抑制等毒性,限制了临床应用。本文采用RP-HPLC法测定了L-DOX和F-DOX在大鼠血清及组织器官中DOX的浓度,研究了L-DOX的药代动力学规律及靶向定位特征,与国外报道的基本一致。1实验部分1.1高效液相色谱法Waters600E高效液相色谱仪,Waters474荧光检测器,PC800色谱工作站。盐酸阿霉素标准品及盐酸柔红霉素标准品(内标)由美国强生公司提供,脂质体阿霉素为江苏省药物研究所研制。甲醇、乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸水。Sprague-Dawley大鼠,雄性,体重220～400克(东南大学医学院动物中心提供)。1.2流动相、流速色谱柱:Nova-Pak○RC18柱(4μm,150mm×3.9mm),检测波长:激发波长为479nm,发射波长为587nm;流动相:甲醇-乙腈-0.01mol/L磷酸二氢胺-冰醋酸(50∶20∶28∶0.6);流速:1.0ml·min-1;柱温:30℃。1.3样品前处理于干净离心试管中精密加入血清0.3ml、内标盐酸柔红霉素(甲醇为溶媒)30μl,(2.32μg·ml-1)及甲醇30μl,再加入氯仿-甲醇(4∶1)萃取液2ml混匀,于3000r·min-1离心10min,将下层有机层全部转移至另一试管中,26℃下氮气吹干,残渣加100μl甲醇溶解,精密吸取50μl进样分析。1.4萃取-固相萃取-萃取-效率ls分析于干净离心试管中精密加入组织匀浆1ml、内标盐酸柔红霉素50μl、甲醇50μl,再加入萃取液3ml(氯仿-甲醇4∶1)混匀,于3000r·min-1离心10min,定量吸取下层有机相约2ml,26℃下氮气吹干,残渣加100μl甲醇溶解,精密吸取50μl进样分析。1.5l-dox/b组18只雄性Sprague-Dawley大鼠,体重220～420g,随机分成A、B两组。A组,静脉注射F-DOX6mg·kg-1;B组,静注L-DOX6mg·kg-1;股动、静脉插管,经股静脉导管注射给药,股动脉导管采取血样;给药后分别于0,5,15,30,60,90,120,180,240,480,1440min采血样0.6ml,分离血清,-20℃冰箱保存,供血药浓度测定用。1.6动物分组及处理24只雄性Sprague-Dawley大鼠,体重300～380g,随机分成A、B两组,每组12只大鼠。每组再随机分成4小组,每小组3只。A组静注F-DOX6mg·kg-1,B组静注L-DOX6mg·kg-1。于给药后5,120,240,1440min分别用驱血法处死各组大鼠中的一小组,切除脑、心、肝、肺、肾、脾、胃肠;取一定量组织,吸湿后称重,置入盛有磷酸盐缓冲液的烧杯中,以高速分散器5000r·min-1冰浴下,短时多次分散成组织匀浆,-20℃冰箱保存,供组织浓度测定用。2结果2.1阿霉素、柔激素的保留时间在上述色谱条件下,阿霉素和柔红霉素的色谱分离情况如图1。阿霉素、柔红霉素的保留时间分别为2.54min和3.64min。可见阿霉素与柔红霉素达到完全分离。2.2大样本浓度测定的结果2.2.1柔激素含量测定分别取空白血清0.3ml,精密加入不同量的阿霉素及等量柔红霉素(内标),使含0,5,25,50,100,250,500,1000ng·ml-1的柔红霉素标准溶液,按“血清样品的处理”项下操作,记录色谱峰。以阿霉素峰高与内标峰高的比值(hDOX/hDM)为横坐标(X),阿霉素在样品中的浓度为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程:Y=165.79X+0.5191(r=0.9998),最低检测限为1ng。2.2.2阿霉素血清浓度的测定在空白大鼠血清0.3ml中精密加入不同量的阿霉素标准液和内标柔红霉素69.6ng,使阿霉素血清浓度分别为5,500和1000ng·ml-1,按前述方法处理测定后,与同浓度的标准对照品进行比较。结果3种浓度下的回收率分别为100.03%±1.71%,100.10%±2.79%,101.09%±1.03%。2.2.3精密度和准确度配制含阿霉素为5,500,1000ng·ml-1的血清样品5份,重复5d,“按血清样品的处理与测定”项下操作,测得日内精密度分别为4.16%,2.84%,2.4%(n=5);日间精密度分别为4.22%,3.27%,2.55%(n=5)。2.2.4药代动力学参数测定18只大鼠iv.F-DOX(6mg·kg-1)和L-DOX(6mg·kg-1)后经时过程的血药浓度,所得的药—时数据用PKBP-n1程序按三房室模型进行处理,平均药-时曲线见图2,其药代动力学参数见表1。2.3大组织中药物浓度测定的结果2.3.1回归方程的建立分别取空白大鼠组织匀浆1ml,精密加入不同量的盐酸阿霉素,使成为0.06,0.30,0.60,1.0,3.0,6.0μg·g-1的阿霉素标准溶液,按“组织样品的处理”项下操作,记录峰高。以样品的峰高值与内标的峰高值的比值对浓度C作直线回归,得回归方程:y=2.258C-0.0483(r=0.9995)。最低检测限为3ng。2.3.2组织浓度的选择在空白组织匀浆1ml中精密加入不同盐酸阿霉素和内标柔红霉素110ng,使组织浓度分别为0.06、0.6和6.0μg·g-1),按前述组织样品的处理项下操作。结果三种浓度下的回收率分别为96.30%±9.20%,97.3%±5.89%,99.3%±3.49%。2.3.3重复与重复的份量型配制浓度为0.06,0.6和6μg·g-1的组织匀浆样品5份,重复5d。按“组织样品的处理与测定”项下操作,测得日内精密度分别为1.98%,2.45%,2.63%(n=5);日间精密度为别为9.17%,4.42%,3.72%(n=5)。2.3.4在组织中，药物浓度分布的研究测定18只大鼠(两组)静注F-DOX和L-DOX后体内组织分布见表2及图3。3f-dox的清除率1)作者参照有关文献实验建立的RP-HPLC法,简便快速,一个样品从提取处理到色谱分离出结果,可在30min内完成;阿霉素、柔红霉素分离度好,血浆及组织中的杂质不干扰测定,专属性高。2)L-DOX血浆中药代动力学实验结果显示:研制的L-DOX半衰期延长约是F-DOX的3倍;AUC是F-DOX的93倍;F-DOX的清除率是L-DOX的93.86倍,中央室分布容积是L-DOX的5.2倍;F-DOX的K12是K21的8.69倍;K13是K31的33.67倍,而L-DOX的K12是K21的0.65倍,K13是K31的6.75倍。同时F-DOX的K10是L-DOX的18.29倍。(见Tab.1)以上结果表明:L-DOX清除率降低,血浆药物浓度提高,延长DOX在循环系统内的滞留时间,使L-DOX在血浆中的高浓度能维持较长时间,提高了DOX的治疗指数。L-DOX对某些组织的亲和力较F-DOX降低,与某些组织的非特异性结合减少,而与某些特殊组织的选择性分离增加,与国外的报道基本