【公开课】基因工程的基本操作程序课件-高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

第2节

基因工程的基本操作程序抗虫棉的培育过程2.基因表达载体的构建1.目的基因的筛选与获取3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的

检测与鉴定Bt基因Ti质粒重组DNA分子将目的基因插入染色体DNA中

从社会中来基因工程的基本操作程序：获：目的基因的筛选与获取构：基因表达载体的构建导：将目的基因导入受体细胞检：目的基因的检测和鉴定（核心）一、基因工程的基本操作程序受体生物植物动物微生物导入方法三、将目的基因导入受体细胞1.

将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法。（用于双子叶植物）三、将目的基因导入受体细胞1.

将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法。（用于双子叶植物）（1）农杆菌的特点：农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的DNA上。三、将目的基因导入受体细胞目的基因插入到农杆菌Ti质粒上，形成重组DNA重组DNA转入杆菌农杆菌侵入植物将目的基因带入植物细胞含外源目的基因的重组DNA整合到植物细胞的基因组中目的基因遗传特性稳定维持和表达（2）农杆菌转化步骤：四、将目的基因导入受体细胞2.花粉管通道法

在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。3.将目的基因导入动物细胞方法：显微注射法提纯含目的基因表达载体受精卵显微注射移植到输卵管或子宫受精卵发育新性状动物（2）操作:显微注射技术4.将目的基因导入微生物细胞（1）微生物作受体细胞原因：（2）常用法：Ca2+处理常用菌：大肠杆菌（增加细胞壁的透性，与细胞膜无关）（3）过程：Ca2+处理大肠杆菌感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。Ca2+感受态细胞吸收受体生物植物动物微生物受体细胞导入方法受精卵体细胞受精卵细胞/个体农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射技术用Ca2+处理感受态细胞三、将目的基因导入受体细胞（小结）

按前面三个步骤进行了操作，是否可以确定目的基因进入了受体细胞并能维持稳定？是否可以确定目的基因一定能够进行表达？是否可以确定得到了新的性状？不一定！如何判断？检测—鉴定——③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等②检测目的基因是否转录出了mRNA①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因四、目的基因的检测与鉴定——检查是否成功

目的基因的检测与鉴定

某种特定性状生物大分子具有特异性

----分子水平的检测特定基因控制特定性状,如抗虫、抗旱等

----性状水平的检测1、检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因①首先取出转基因生物的基因组DNA；（1）方法:DNA分子杂交（2）过程:②将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针；③使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中。（一）检测15N15N变性变性2、检测目的基因是否转录出了mRNA①方法:分子杂交②过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。3、检测目的基因是否翻译成蛋白质—抗原-抗体杂交蛋白质脱分化提取苏云金杆菌Bt毒素蛋白抗体

出现杂交带鉴定——抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。五、目的基因的检测与鉴定（小结）3.2基因工程的基本操作程序（四个步骤）目的基因的筛选与获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的