艾纳香挥发油栓的制备工艺研究

艾纳香挥发油栓的制备工艺研究

爱纳香是蔷薇科爱纳香科的一种含有广泛抗败血症药物的奇植物。服药部位为枝叶、枝叶和根茎。活血、镇痛、消炎、防风、除湿。主要用于妇女分娩后的风湿性、杀菌和止痒。它具有很强的抗感染效果，愈合效果显著。艾纳香在民族地区具有很大的知名度,被称作“大风艾”,在海南岛、广东、云南和贵州民族地区被广泛使用,多用于妇女产后祛风除湿、杀菌止痒,多数山区和农村妇女皆知此功用。现代药理研究表明,艾纳香挥发油具有很好的杀菌消炎作用。在抗菌研究方面,艾纳香油在体外抗菌试验中表明对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌等有显著的抑菌效果。目前治疗细菌感染类药物多为抗生素类药物,如达克宁软膏、环丙沙星栓、甲硝唑栓、雌三醇软膏、咪康唑栓、β-干扰素栓等,容易引起耐药性及毒副作用。洗剂、膏剂等传统剂型在作用部位滞留时闻短、难以达到有效浓度,容易被排出体外。为了提高艾纳香油的生物利用度,减少首关效应,降低副作用,本文采用热熔法制备艾纳香挥发油栓,并进行制备工艺和体外溶出度的考察,为艾纳香的临床应用提供更多的选择。1仪器、试药与药品AY120电子分析天平(日本岛津公司);天美GC7890系列气相色谱仪(上海天美科学仪器有限公司);SPH-300A氢气发生器(北京中惠普);PEG色谱柱(北京京科瑞达科技有限公司);78X-2型片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂);ZRS-8G智能溶出试验仪(天津大学无线电厂);RB-1融变时限仪(郑州南北仪器试验有限公司)。艾纳香经广东药学院中药学院李书渊教授鉴定为菊科艾纳香属植物艾纳香B.balsamifear的嫩枝及叶;艾纳香挥发油栓(实验室自制,批号20130113,20130114,20130115);艾纳香挥发油(实验室提取,批号20130111);左旋龙脑对照品(中国食品药品检定研究院,批号881-200001);水杨酸甲酯、石油醚、乙酸乙酯、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、半合成脂肪酸甘油酯-36HS、丙三醇、明胶、山梨酸钾、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(聚山梨酯-80)、液体石蜡均为分析纯,所用辅料均符合《中国药典》2010年版标准。2方法和结果2.1重量测定2.1.1助燃气空气和空气色谱柱PEG-20M(10%)填充柱(3mm×2m,2μm);载气氮气(0.06MPa),燃气氢气(0.04MPa),助燃气空气(0.04MPa);柱温120℃,气化温度250℃,FID检测器,检测器温度280℃;进样量1μL,柱流量1.0mL·min-1,不分流。色谱图见图1。2.1.2品储备液制备精密称取龙脑对照品0.0500g置10mL量瓶中,加乙酸乙酯溶解定容至刻度,摇匀,得质量浓度为5g·L-1的龙脑对照品储备液。精密量取龙脑对照品储备溶液5,10,20,40,80,160,320μL分置于10mL量瓶中,分别精密加入1mL内标溶液水杨酸甲酯(7g·L-1),再添加乙酸乙酯定容,作为龙脑对照品溶液。按2.1.1项下条件进样分析,得线性回归方程Y=1.7283X-0.007(R2=0.9997),龙脑在0.025~1.60g·L-1呈良好的线性关系。2.1.3精密度与加样回收试验按2.1.1项下条件进样分析,理论塔板数不低于3000,分离度大于1.5,精密度试验龙脑峰面积的RSD1.4%,稳定性试验表明试样溶液在室温下放置10h稳定,加样回收试验平均回收率为98.34%,符合相关规定(95%~105%),RSD0.42%,小于3%,表明本方法的加样回收率良好,准确度高。2.1.4供试品溶液的制备取艾纳香挥发油栓剂10粒,精密称定,切碎,精密称取1.500g,置10mL量瓶中,精密加入1mL内标溶液水杨酸甲酯(7g·L-1),加乙酸乙酯适量,超声处理(250W,33kHz)20min,取出,放冷,加乙酸乙酯至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液备用。2.1.5阴性对照溶液取空白栓剂10粒,精密称定,切碎,精密称取1.500g,置10mL量瓶中,精密加入1mL内标溶液水杨酸甲酯(7g·L-1),加乙酸乙酯适量,超声处理(250W,33kHz)20min,取出,放冷,加乙酸乙酯至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为阴性对照溶液备用。2.1.6香挥发油栓中龙脑的含量按2.1.1项下方法进样分析,内标法计算3批艾纳香挥发油栓中龙脑的含量,结果见表1。3批艾纳香挥发油栓中龙脑平均含量的RSD均小于3%,初步将艾纳香挥发油栓中龙脑的含量计定为标示量的95%~105%。2.2关于卡盘剂的溶出度的研究2.2.1缓冲溶液浓度人体阴道正常pH为3.8~4.5,为模拟体内环境,故选择以磷酸盐配成的pH4.5的缓冲溶液作为溶出介质。样品中龙脑的质量分数约为60.04%。据文献报道,艾纳香中龙脑的质量分数在46.56%~57.70%,本样品龙脑含量稳定,故本实验以龙脑作为测定指标。2.2.2转法和桨法对药物溶出度的影响《中国药典》(2010年版二部附录XC)规定的溶出度测定方法有3种:转篮法、桨法、小杯法。艾纳香挥发油为难溶性药物,不适用小杯法。故以pH4.5磷酸缓冲盐溶液900mL(含1.0%聚山梨酯-80)作为溶出介质,温度(37±0.5)℃,考察相同转速下转篮法和桨法对药物溶出度的影响,结果见图2。2条溶出曲线的f2因子为97,可认为2种溶出行为具有相似性,即转法对药物的溶出无显著性影响。因药物为水难溶性物质,故选择桨法作为体外溶出度的测定方法更加适合。2.2.3转速1的影响确定桨法作为体外溶出度的测定方法后,需进一步考察转速对制剂溶出度的影响。根据预试验结果制备相同的栓剂,以pH4.5磷酸缓冲盐溶液900mL(含1.0%聚山梨酯-80)为溶出介质,温度(37±0.5)℃,分别考察50,100r·min-1转速对药物溶出度的影响,结果见图3。当转速为100r·min-1时,药物前10min溶出过快,10min后溶出缓慢。当转速为50r·min-1时,药物溶出速度适中,且最终累积溶出度与转速为100r·min-1时无明显差异,故选择50r·min-1做为体外溶出度的测定转速较为适宜。2.3制备工艺2.3.1最佳提取条件的确定为优化艾纳香挥发油的提取,考察提取时间(A)、料液比(B)、加氯化钠的量(C)对挥发油得率的影响。设计正交试验表,选定各因素的水平,安排L9(34)正交试验,以挥发油出油量作为考察指标,对水蒸气蒸馏法提取艾纳香中挥发油的条件进行优化,以得到提取挥发油的最佳工艺组合。各水平因素取值见表2,正交试验结果见表3,方差分析结果见表4。提取时间(A)对挥发油出油量有显著性影响(P<0.05);料液比(B)及加氯化钠的量(C)对出油量无显著性影响。各因素水平的影响主次为A>C>B。结合各因素K分析及节约成本考虑,艾纳香挥发油的最佳提取条件是A3B2C2,即药材加6倍量的水、加2.5%氯化钠,提取8h。根据正交试验结果,按此最佳工艺条件,投料3批进行工艺验证,挥发油的出油量分别为3.4877,3.5219,3.5126g·kg-1,表明该工艺提取效果最优。2.3.2聚乙二醇基质考察结果见表5,甘油明胶具备一定的弹性,但难与挥发油混合均匀,影响药物的吸收及溶出;半合成脂肪酸甘油酯虽能与药物混合均匀,但影响药物的检测。聚乙二醇混合基质具备一定的硬度,能与药物混合均匀,融变时限、溶出度皆满足要求,故选择聚乙二醇作为最佳基质。称取聚乙二醇6000、聚乙二醇4000及适量蒸馏水,以不同的比例置已称重的蒸发皿中,水浴加热熔融,搅拌均匀,通过外观形态、融变时限、溶出度等考察指标确定最终聚乙二醇基质的最佳比例为5∶3∶2,结果见表6。2.3.3材料温度的选择2.3.4聚山梨酯-80的用量为提高药物在局部的浓度,增加药物的溶出速率,需加入适量的表面活性剂改善栓剂中主药的溶出效果。常用表面活性剂有非离子型和离子型2类。本品选用刺激性较小的非离子型表面活性剂聚山梨酯-80。采用溶出度测定法,以龙脑5,15,45min时的累积溶出度为指标对聚山梨酯-80的用量进行考察,结果见表8。当聚山梨酯-80的用量达到1.0%时,45min的累积溶出度达到70%以上,满足一定的溶出要求。而当聚山梨酯-80的用量达到1.5%,2.0%时,45min的累积溶出度达到80%以上,溶出过快,造成体内局部药物浓度过高,影响药物的吸收及易造成对机体的刺激性,故以加入1.0%聚山梨酯-80的量为宜。2.3.5制备水溶液基质栓剂处方为843g聚乙二醇6000,507g聚乙二醇4000,150g艾纳香挥发油,15g聚山梨酯-80,山梨酸钾适量,每粒1.5g,共制1000粒。制备方法:称取5.0g聚乙二醇6000、3.0g聚乙二醇4000及适量蒸馏水,置已称重的蒸发皿中,水浴加热熔融,搅拌均匀,制成水溶性基质10.0g。精密称取0.15g艾纳香挥发油,置已称重的蒸发皿中,加入0.015g聚山梨酯-80及适量山梨酸钾,再加入制备好的熔融聚乙二醇混合基质1.35g,60~65℃水浴加热熔融,搅拌均匀后,快速灌注于已涂抹过润滑剂的栓模内,固化脱模,用吸水纸吸去栓剂表面的水分。经检验,按上述处方制备出的3批栓剂,外观色泽均匀一致,无裂缝,无分层及药物附聚现象,硬度、溶出度、融变时限、质量差异等均符合规定。3ss-ct-ms法氯化钠在挥发油提取中有助于油水分离,正交试验考察提取时间、料液比、加氯化钠的量等主要因素对药材出油率的影响。艾纳香挥发油为难溶性物质,需在溶出介质中加入一定量的表面活性剂以提高其在溶出介质中的溶解度。为保证制剂的质量,防止微生物的生长繁殖,宜加入一定量的防腐剂,参考《中药药剂学》,常用防腐剂有苯甲酸、苯甲醇、山梨酸、尼泊金等。由于处方中有聚山梨酯-80,不宜使用苯甲酸及尼泊金,且本品为水溶性基质,故选择山梨酸钾作为防腐剂。山梨酸钾毒性小,易溶于水,用量低,能有效地抑制霉菌、酵母菌、好氧菌的生长。防腐剂的用量可通过在对药物的稳定性考察期间,添加的能保证药物质量、使微生物不超标,不对人体产生副作用的最小剂量作为最佳剂量。本品将制成阴道栓,作用于阴道,主要含挥发油等脂溶性成分。选用的基质应该满足无毒、无刺激性,性质稳定,价格适宜等特点,且具有便于药物混合、注模、成型,成品外观性状较好等特性。以药物与基质的比例1∶9,参照相关文献,选择聚乙二醇、甘油明胶、半合成脂肪酸甘油酯作为考察基质,采用热熔法制备栓剂。以栓剂的融变时限、外观及溶出度作为考察指标,确定栓剂的理想基质。药物加入基质时,基质融化的温度对药物混合、流动性、凝固成型过程中的状态均有较大影响,考察不同成型温度对本品质量的影响,结果见表7。结果表明,成型温度过低,影响药物的流动性,造成混合不均匀,成型温度过高,易破坏药物的有效成分,故选择60~65℃作为最佳的成型温度。2.3.6内标法提取药物溶出度测定按照《中国药典》(2010年版附录XC)溶出度测定法项下第二法规定操作,采用浆法,溶出介质为pH4.5磷酸缓冲盐溶液900mL(含1.0%聚山梨酯-80),温度为(37±0.5)℃,转速为50r·min-1。取栓剂6粒,投入溶出杯内,自栓剂接触溶出介质起,立即计时,于0,5,15,30,45,60,90,120,180min分别取样5mL,并立即补充同体积加热