气相色谱法测定艾纳香药材中左旋龙脑

气相色谱法测定艾纳香药材中左旋龙脑

爱斯隆是艾纳香科的一种植物。临床应用于感冒、寒湿、腹泻、风湿关节痛、跌倒和变形。具有开口、醒神、清热、止痛的功效，已被纳入《贵州省医疗产品质量标准》2003年版。贵州省是苗族的主要药物之一。主要成分为发芽，但只有一个品质鉴定标记。为了有效控制艾纳香材料的内部质量，提高材料质量，采用相关文献和气相色谱法对艾纳香材料中的左龙脑进行定量和测定。该方法简便、准确,分离度、稳定性、重现性等均满足要求,可用于艾纳香药材的质量评价。1实验材料1.1仪器、色谱及质谱GC-14C气相色谱仪(上海科创色谱仪器有限公司),N3000色谱工作站,AL104型电子天平(MettlerToledo),SK5200HP型超声波清洗仪(KUDOS),H-1650型高速离心机(长沙湘仪离心机有限公司)。2方法和结果2.1氢火焰离子化检测色谱柱:PEG20M(10%)填充柱(2m×3mm×2μm)(大连三杰科技发展有限公司);载气∶氮气(0.04Mpa);燃气:氢气(0.04MPa);助燃气:空气(0.04MPa);采用氢火焰离子化检测器(FID);气化温度:180℃;柱温:150℃;检测器温度:200℃;进样量为1μL。2.2内标溶液的配制精密称取水杨酸甲酯1250mg,至500mL量瓶中,加乙酸乙酯溶解并定容至刻度,摇匀,制成每1mL含水杨酸甲酯为2.5mg的溶液,作为内标溶液。2.3对照品贮备液的制备精密称取左旋龙脑对照品20mg,用内标溶液(水杨酸甲酯2.5mg/mL)溶解,并定容至2mL量瓶中,即得左旋龙脑对照品贮备液。2.4供试品溶液的制备精密称取艾纳香样品2.00g置于锥形瓶中,精密加入内标溶液(水杨酸甲酯2.5mg/mL)10mL,称质量并密封口塞,100Hz超声提取30min,放冷,用乙酸乙酯补足减失的质量,3000r/min离心10min,取上清液作为供试品溶液。2.5方法学研究和定量测定2.5.1标准品溶液的线性回归分析将左旋龙脑对照品贮备液用内标溶液稀释成质量浓度分别为10.000、7.500、5.000、2.500、1.250、0.625和0.312mg/mL的系列标准品溶液,进样1μL,记录色谱图。以待测物与参照峰面积比为纵坐标,对照品溶液质量浓度(mg/mL)为横坐标,进行线性回归,得到回归方程为Y=0.5877X-0.0866(R2=0.9995)。表明左旋龙脑进样量在0.312~10.000mg/mL范围内线性关系良好。2.5.2试品溶液测定取编号为1的艾纳香药材,按2.4项下操作制备供试品溶液,照上述色谱条件重复进样5次,记录色谱图。结果表明,左旋龙脑与水杨酸甲酯的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%。2.5.3高效液相色谱试验取编号为1的艾纳香药材5份,按2.4项下操作制备供试品溶液,在上述色谱条件下进样分析,计算左旋龙脑色谱峰与内标峰的相对峰面积和相对保留时间,其RSD均小于3.0%。2.5.4溶液稳定性试验取编号为1的艾纳香药材,按2.4项下操作制备供试品溶液,于室温下放置,分别在0、2、4、8、12、24h进样分析,计算左旋龙脑色谱峰与内标色谱峰的相对峰面积,其RSD均小于2.5%,结果表明,艾纳香样品溶液在24h内稳定。2.5.5标准品回收率和精密度称取艾纳香药材(样品1)9份,每份为2.0g,3份为一组,分别精密加入14.0、20.0、24.0mg左旋龙脑标准品,加入内标溶液10mL,按供试品溶液制备方法操作,在上述色谱条件下进行分析测定,计算3个浓度的平均回收率,分别为102.4%、98.4%和101.9%,RSD均小于2.2%。2.6高效液相色谱法测定基因左外执行量取14批艾纳香药材,按照上述的方法进行分析测定,采用内标法计算出样品中左旋龙脑的量,代表样品1和对照品的GC色谱图见图1,样品的测定结果见表2。3讨论3.1加热回流和索氏提取方法缺乏标准为有效提取艾纳香样品中的低极性类成分,本研究对回流提取、索氏提取和超声提取等3种方法进行了考察。结果显示,当采用回流提取法和索氏提取法时,内标色谱峰基本消失,这可能是由于提取过程中需要高温加热,造成了大部分内标物质挥发。同样,待测组分左旋龙脑也一定会有损失,虽然回流提取的提取效率可能会很高,但损失量也是不容忽视的,因此,采用加热回流和索氏提取的方法不能准确定量药材中左旋龙脑。此外,采用前两种提取方法时,提取溶剂要形成回流,就需要加入较多的提取溶剂,这就造成料液比偏小,提取溶液中左旋龙脑的浓度偏低,当样品中左旋龙脑含有量较少时就不利于测定。而采用超声提取法,不仅可以有效的实现左旋龙脑的提取,而且待测组分和内标物质的回收率高,还可以节约试剂,操作简便。因此,本研究采用超声提取法对艾纳香中的左旋龙脑进行提取。3.2提取时价格对提取效果的影响分别采用乙酸乙酯和无水乙醇作为溶剂溶解内标物质并对艾纳香样品中的左旋龙脑进行超声提取时,无水乙醇对艾纳香中左旋龙脑的提取率仅相当于乙酸乙酯提取率的76%。因此,采用乙酸乙酯提取艾纳香中的左旋龙脑的提取效率要明显高于采用无水乙醇的提取效率。此外,参考《中华人民共和国药典》中冰片测定,本研究采用乙酸乙酯作为提取溶剂。4每次1000公里4.1艾纳香药用资源分布艾纳香为多年生草本植物,适宜生长在温暖、向阳的气候环境,贵州、广西、云南、广东均有产;贵州罗甸县年平均气温在30.3℃,无霜期达330d,很适宜艾纳香的生长,尤以罗甸县红水河沿岸产量最大,是贵州艾纳香药用资源的主要分布区。实验结果显示,样品2号、6号、7号、8号中左旋龙脑量较3号、11号、12号、13号高2~3倍,尤以7号样品含量最高,这表明贵州罗甸艾纳香的挥发性成分较贵州望谟县、荔波县、赤水县,云南楚雄艾纳香有较大差异,而广西天鹅县艾纳香(14号样品)与罗甸艾纳香在质量上较接近,这是由于广西天鹅县位于罗甸县红水河下游,其地理气候环境与之接近的结果。因此,气候地理环境的不同是造成艾纳香中左旋龙脑含量差异的原因。4.2不同立地条件下7号样品的生长状况实验结果可以看出,同产地艾纳香样品间左旋龙脑的量差异也较大,这与艾纳香产地的海拔高度有关,实验中6、7号样品为海拔600m以下生长,左旋龙脑量较高,质量较好;2、8号样品为海拔600~800m生长,而1、4、5、9、10号样品均为海拔1000m以上生长,左旋龙脑量较低,质量次之。据相关报道,艾纳香药材的适宜生长地为海拔400~600m,因此,生长的海拔高度也是造成艾纳香中左旋龙脑含量差异的原因。4.3艾纳香药材质量控制的方法分布本试验建立了气相色谱分析方法测定艾纳香药材中左旋龙脑的检测方法。方法的回收率和精密度等都较好,且方法操作简便、灵敏度高,可为艾纳香药材的质量控制提供新的参考。左旋龙脑对照品(中国药品生物制品检定所,编号:1