第2节基因工程的基本操作程序

第2节基因工程的基本操作程序学有目标——课标要求必明1．阐述基因工程的原理和基本操作程序。2．针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。3.尝试进行PCR的基本操作，并用电泳鉴定PCR的产物。记在平时——核心语句必背1．基因工程的基本操作程序：目的基因的筛选与获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。2．PCR反应中需要提供DNA模板、分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶。PCR反应中每次循环一般可分为变性、复性、延伸三步。3．基因表达载体的构建是基因工程的核心，基因表达载体是载体的一种，除了目的基因外，它还必须有启动子、终止子以及标记基因等。4．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和花粉管通道法。导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用感受态细胞法(Ca2＋处理法)。续表[主干知识梳理]一、目的基因的筛选与获取1．目的基因(1)概念：用于改变

或获得

等的基因。(2)实例：培育转基因抗虫棉用到的目的基因是

。2．筛选合适的目的基因(1)较为有效的方法：从相关的

和

的基因中进行筛选。(2)实例：在培育转基因抗虫棉之前，科学家不仅掌握了Bt基因的

，也对Bt基因的表达产物——

有了较为深入的了解。(3)认识基因结构和功能的技术方法：___________技术、

数据库、__________工具。受体细胞性状预期表达产物Bt抗虫蛋白基因已知结构功能清晰序列信息Bt抗虫蛋白DNA测序遗传序列序列比对3．利用PCR获取和扩增目的基因(1)PCR的含义：PCR是________________的缩写，它是一项根据________________的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对_________的核苷酸序列进行大量复制的技术。(2)条件：DNA模板、分别与两条模板链结合的2种

、4种

、耐高温的

。(3)过程①变性：当温度超过90℃时，目的基因DNA

。②复性：当温度下降到50℃左右时，

通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。聚合酶链式反应DNA半保留复制目的基因引物脱氧核苷酸DNA聚合酶受热变性后解为单链两种引物③延伸：当温度上升到72℃左右时，溶液中_______________在耐高温的____________的作用下加到引物的

端合成子链。④重复循环多次。(4)结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成

形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环的次数)。二、基因表达载体的构建1．构建基因表达载体的目的(1)使目的基因在受体细胞中

，并且可以

给下一代。(2)使目的基因能够

和发挥作用。4种脱氧核苷酸DNA聚合酶3′指数稳定存在遗传表达2．基因表达载体的组成(填图)。3．基因表达载体的构建首先用一定的

切割载体，使它出现一个切口，然后用

限制酶或_________________的限制酶切割含有目的基因的DNA片段，再利用___________将目的基因片段拼接到载体的切口处。限制酶同种能产生相同末端DNA连接酶三、将目的基因导入受体细胞1．转化：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内

和

的过程。2．目的基因导入受体细胞的方法(1)目的基因导入植物细胞①花粉管通道法。a．用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入

中。b．在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助

进入

。维持稳定表达子房花粉管通道胚囊②农杆菌转化法。a．农杆菌的特点：农杆菌自然条件下侵染

植物和

植物；农杆菌的Ti质粒上的

能够整合到所侵染细胞的

上。b．转化方法：将目的基因插入农杆菌

中，让农杆菌侵染植物细胞。(2)目的基因导入动物细胞①常用方法：

法。②常用受体细胞：

。(3)目的基因导入微生物细胞①方法：用

处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组的基因表达载体导入其中。②常用受体细胞：原核细胞(使用最广泛的是大肠杆菌)。双子叶裸子T-­DNA染色体DNATi质粒的TDNA显微注射受精卵Ca2＋四、目的基因的检测与鉴定1．分子水平检测(1)通过

等技术检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因或检测目的基因是否转录出mRNA。(2)从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行

杂交，检测目的基因是否翻译成了蛋白质。2．个体水平鉴定包括

实验，以确定是否有抗性及抗性程度。基因工程产品需要与

进行比较等。PCR抗原－抗体抗虫、抗病的接种天然产品活性[边角知识发掘]1．(教材第80页图3­6变式训练)观察基因表达载体构建模式图，写出结构①和②的名称：①

，②

；物质A和B的名称：A.

，B.

。启动子终止子限制酶DNA连接酶2．(教材第81页图示变式训练)下图为农杆菌转化法示意图，请将①～④的操作序号填写在图中相应的方框内。①转入农杆菌②构建表达载体③导入植物细胞④将目的基因插入染色体DNA中答案：A.②

B．④

C．①

D．③[教材问题提示]旁栏思考题1．(教材第79页)mRNA不可以用PCR技术直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。由mRNA逆转录形成cDNA的过程：第一步，逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNADNA杂交分子；第二步，核酸酶H降解RNADNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA；第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子(见下图)。2．(教材第80页)采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物的总DNA提取出来，没有进行基因表达载体的构建，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定哪些基因导入了受体植物。2．PCR扩增目的基因时，复性温度的设定是成败的关键。复性温度过高会破坏引物与模板的碱基配对，复性温度过低又会造成引物不能与DNA模板链的特定部位结合。复性温度的设定与引物长度、碱基组成有关，假设引物的长度相同，在GC含量高时，对复性温度的设定有什么要求？说明理由。提示：在引物的GC含量高时，设定的复性温度要高一些。因为DNA分子中G—C之间有三个氢键，A—T之间有两个氢键。3．在利用PCR获取和扩增目的基因时，从第几轮循环才会产生完整的目的基因(可用相关图解解释)?提示：第3轮，如图所示：[师说重难]

一、利用PCR获取和扩增目的基因1．PCR反应的过程2．PCR技术与生物体内DNA复制的比较比较项目PCR技术DNA复制区别解旋方式DNA在高温作用下变性解旋解旋酶催化场所细胞外(在PCR扩增仪内)细胞内(主要在细胞核内)酶耐高温的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等温度条件需控制温度，在较高温度下进行细胞内温和条件合成的对象DNA片段或基因DNA分子联系①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成②原料：均为四种脱氧核苷酸③酶：均需要DNA聚合酶进行催化④引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸续表二、基因表达载体的构建过程1．用同一种限制酶或产生相同末端的限制酶切割含目的基因的DNA和质粒，使其产生相同末端。2．将切下的目的基因片段与切开的质粒混合，再加入适量DNA连接酶，使目的基因插入质粒的切口处，形成一个重组DNA分子(重组质粒)。构建过程如下图所示：[在应用中悟][典例1]下列关于PCR反应体系中所加物质作用的叙述，错误的是 (

)A．耐高温的DNA聚合酶用于催化DNA子链的合成B．引物使Taq酶能从引物的5′端延伸DNA链C．目标DNA母链用作合成DNA复制的模板D．四种脱氧核苷酸为PCR提供能量和原料[解析]

通过PCR技术扩增目的基因时，需要用耐高温的DNA聚合酶催化单个脱氧核苷酸聚合形成DNA子链，A正确；在复制时，引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶从引物的3′端开始延伸DNA链，因此DNA合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸，B错误；PCR技术的原理是DNA双链复制，DNA复制时两条链均作为复制的模板，C正确；DNA合成的原料是四种脱氧核苷酸，同时两个核苷酸连接时可释放能量，D正确。[答案]

B[典例2]下列有关基因表达载体的构建的说法，错误的是 (

)①一个基因表达载体的组成只包括目的基因、启动子、终止子②有了启动子才能驱动基因转录出mRNA③终止子的作用是使转录在所需要的地方停止④所有基因表达载体的构建是完全相同的⑤必须在细胞内进行A．②③⑤

B．①④⑤C．①②⑤ D．③④[解析]基因表达载体的构建是基因工程的核心内容，基因表达载体是载体的一种，除了目的基因外，它还必须有启动子、终止子和标记基因等，①错误；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，②正确；终止子控制着转录的结束，③正确；由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的，④错误；基因表达载体的构建必须在细胞外进行，⑤错误。[答案]

B[在训练中评]1．下列有关PCR技术的叙述，错误的是 (

)A．在基因工程中，可通过该技术获取目的基因B．要扩增的目的基因的特异性取决于引物序列C．PCR反应过程中需要解旋酶催化D．DNA体外扩增的基本原理与体内DNA复制相同解析：在基因工程中，可通过PCR技术获取目的基因，A正确；要扩增的目的基因的特异性取决于引物序列，B正确；PCR反应过程中通过高温解旋不需要解旋酶催化，C错误；DNA体外扩增的基本原理与体内DNA复制相同，D正确。答案：C

2．基因工程的核心是构建基因表达载体，下列不属于载体作用的是 (

)A．载体能防止目的基因被受体细胞限制酶“切割”B．载体能协助目的基因在受体细胞中复制C．载体含有启动子和终止子协助目的基因表达D．载体具有标记基因，便于筛选含目的基因的受体细胞解析：载体不能防止目的基因被受体细胞限制酶“切割”，A错误；载体在受体细胞中能够稳定存在，并且具有自我复制能力，使目的基因数量扩大，B正确；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能启动转录过程；终止子控制着转录的结束，所以载体含有的启动子和终止子可协助目的基因表达，C正确；载体具有标记基因，标记基因便于筛选含有目的基因的受体细胞，D正确。答案：A

[师说重难]

1．目的基因导入受体细胞的方法类型方法说明特点植物细胞农杆菌转化法将目的基因插入农杆菌Ti质粒的TDNA上→转入农杆菌→用农杆菌侵染植物细胞→将目的基因整合到植物细胞染色体的DNA上→目的基因表达经济、有效，适用于双子叶植物和裸子植物，尤其适用于双子叶植物花粉管通道法在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头→滴加DNA(含目的基因)，使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞→目的基因表达简便、经济，我国科学家独创的一种方法动物细胞显微注射技术将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→注射了目的基因的受精卵，经胚胎早期培养后，移植到雌性动物的输卵管或子宫内→获得具有新性状的动物将目的基因导入动物细胞最为有效的方法微生物细胞Ca2＋处理法(感受态细胞法)用Ca2＋处理微生物细胞→感受态细胞→将基因表达载体与感受态细胞混合→在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子简便、经济、有效续表2．农杆菌转化法分析(1)构建携带目的基因的表达载体，需要两种工具酶：限制酶和DNA连接酶。(2)基因表达载体(重组质粒)导入农杆菌细胞时，要用Ca2＋处理农杆菌细胞，使其处于感受态，利于重组质粒的导入。(3)由导入目的基因的受体细胞培育成完整的植株要用到植物组织培养技术。3．目的基因的检测与鉴定的方法比较类型检测内容方法结果显示分子水平检测目的基因是否插入转基因生物DNA上DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间)是否成功显示出杂交带目的基因是否转录出mRNA分子杂交技术(DNA和mRNA之间)目的基因是否翻译成蛋白质抗原－抗体杂交(蛋白质和蛋白质之间)个体生物学水平鉴定是否具有抗性及抗性程度对转基因生物进行抗性的接种实验是否赋予了预期抗性或蛋白质活性基因工程产品与天然产品的功能活性是否相同比较基因工程产品与天然产品的功能活性[特别提醒]

①探针是用放射性同位素等标记的含目的基因的DNA片段。②DNA分子杂交和分子杂交(DNA和mRNA之间)的依据均是碱基互补配对原则。[在应用中悟][典例1]下列关于目的基因导入受体细胞的叙述，错误的是 (

)A．培育“黄金大米”可用花粉管通道法导入目的基因B．显微注射技术是将目的基因导入动物细胞采用最多的方法C．目的基因导入大肠杆菌最常用的方法是Ca2＋处理法D．农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法[解析]水稻的花很小，不适合用花粉管通道法导入目的基因，A错误；将目的基因导入动物细胞常用显微注射法，B正确；将目的基因导入微生物细胞最常用的方法是用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态，C正确；将目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法，此外还有基因枪法和花粉管通道法，D正确。[答案]

A[典例2]农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T­DNA插入植物基因组中。图示为利用农杆菌培育转基因植物的基本流程，请据图回答：(1)剪除Ti质粒的某些片段、替换复制原点O与添加抗生素的抗性基因T的过程①中，需用多种限制酶处理，原因是______________________________________，需用__________________“缝合”双链DNA片段的平末端。(2)目的基因是指__________________。由过程②形成的基因表达载体中，目的基因的上游具有________，它是________________________识别和结合的部位。(3)过程③常用________处理使农杆菌成为感受态细胞。抗生素抗性基因T的作用是__________________________________________________________________。(4)可通过________技术检测试管苗的染色体DNA上是否插入了目的基因。[解析]

(1)Ti质粒具多种限制酶切割位点，是因为不同的限制酶识别并切割不同的碱基序列。连接平末端应选用T4DNA连接酶。(2)目的基因主要是指编码蛋白质的基因。目的基因的上游具有启动子，以便于RNA聚合酶识别和结合。(3)过程③常采用Ca2＋(CaCl2溶液)处理农杆菌，以增大农杆菌细胞壁的通透性。抗生素抗性基因T用于检测受体细胞中是否含有基因表达载体。(4)检测试管苗的染色体DNA中是否插入目的基因常采用PCR技术。[答案]

(1)不同的限制酶识别并切割不同的碱基序列T4DNA连接酶(2)编码蛋白质的基因启动子RNA聚合酶(3)Ca2＋(CaCl2溶液)用于鉴定和筛选导入了基因表达载体的农杆菌(4)PCR[在训练中评]1．农杆菌Ti质粒上的T­DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板进行PCR，扩增出T­DNA插入位置两侧的未知序列，据此可确定T­DNA插入的具体位置。下列有关说法，正确的是 (

)A．农杆菌在自然条件下对大多数单子叶植物有感染能力B．利用图中的引物②、③组合可扩增出两侧的未知序列C．进行PCR扩增时需要有解旋酶和耐高温的DNA聚合酶D．与受体细胞基因组序列比对可确定T­DNA的插入位置解析：农杆菌在自然条件下对大多数双子叶植物和裸子植物有感染能力，A错误；DNA的两条链反向平行，子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列，B错误；进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)，但不需要解旋酶，C错误；通过与受体细胞的基因组序列比对，即可确定T­DNA的插入位置，D正确。答案：D

2．如图为转基因抗虫烟草的培育流程，下列叙述正确的是 (

)A．培育过程①需要使用纤维素酶和果胶酶B．培育过程②将重组Ti质粒导入烟草细胞前需要使用CaCO3处理农杆菌C．培育过程③④仅通过调节生长调节剂可诱导愈伤组织再生出新植株D．可通过观察害虫吞食转基因烟草后的存活情况进行个体水平检测解析：过程①表示基因表达载体的构建过程，即形成重组Ti质粒的过程，需要使用限制酶和DNA连接酶，不需要纤维素酶和果胶酶，A错误；过程②是将目的基因导入受体细胞的过程，在将重组Ti质粒导入烟草细胞前需要先使用CaCl2处理农杆菌，B错误；过程③④为再分化形成植株的过程，该过程中需要通过调节营养物质和生长调节剂的配比，从而实现由愈伤组织诱导出芽和根的顶端分生组织的目的，并由此再生出新植株，C错误；可通过进行个体水平的检测判断转基因抗虫烟草是否培育成功，即让害虫吞食转基因烟草，观察害虫的存活情况进行判断，D正确。答案：D

2．PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行严格灭菌，为什么？提示：避免污染使外源性DNA大量扩增，造成假阳性反应。3．将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应，程序应该怎样设定？提示：4．本实验中DNA迁移速率主要与哪种因素有关？提示：在本实验中，主要考虑DNA分子的迁移速率与其大小成反比。5．判断是否成功扩增出DNA片段的依据是什么？如果没有成功应该从哪些方面分析？提示：一次成功的DNA片段扩增应该产生与预期大小一致的DNA片段。若出现与预期不一致的结果，可尝试从以下几个方面进行分析：模板DNA的制备、引物的质量与特异性、酶的质量以及PCR循环的条件。6．如果没有出现扩增条带，可能的原因有哪些？提示：模板DNA含有蛋白或含有TaqDNA聚合酶的抑制剂(如蛋白酶K、苯酚、EDTA);TaqDNA聚合酶失活；引物出现质量问题，浓度不合适；Mg2＋浓度过低；变性温度低，变性时间短；目的序列变异等。[师说重难]

一、实验原理1．利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增。PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。一次PCR一般要经历30次循环。2．PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。二、实验操作步骤1．PCR扩增DNA片段2．电泳法鉴定DNA片段三、实验注意事项1．微量移液器不能超量程使用。使用一次性屏蔽式吸液枪头有助于防止吸取的液体流入微量移液器，从而减少实验过程中的交叉污染。2．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。3．为保证加入反应体系中的各试剂体积的准确性，要按照加入体积的大小，由大到小依次加入各试剂，即最先加入无菌水。为保护酶的活性，一般最后加入TaqDNA聚合酶。4．应按照教材或试剂盒说明书建议的体积加入各试剂，随意加大试剂用量并不会提高PCR扩增的成功率。例如，高浓度的引物可能引发错配，导致非特异性扩增；高浓度的4种脱氧核苷酸可能对扩增起抑制作用。5．该实验所需材料可以直接从公司购买，缓冲液和酶应分装成小份，并在－20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。6．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。7．在进行操作时，一定要戴好一次性手套。8．配胶时，当凝胶溶液冷却到不烫手时可加入核酸染料，科学研究中最常用的是EB(溴化乙锭)。EB是一种荧光染料，有剧毒，具有高致癌性，可用其他灵敏度高、毒性低的新型核酸染料替代它，如Goldview。[在应用中悟][典例1]下列关于PCR操作过程的叙述，错误的是 (

)A．PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌B．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20℃储存C．PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化D．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换[解析]在冰箱中放置的缓冲液和酶，取出后应放在冰块上缓慢融化，不能迅速融化。[答案]

C[典例2]

(2021·全国甲卷)PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题：(1)若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是__________(用数字序号表示)。(2)操作③中使用的酶是__________。PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、__________三步，其中复性的结果是_________________________________。(3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能___________特异性结合。(4)PCR(多聚酶链式反应)技术是指____________________________________。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。[解析]

(1)PCR技术可用于临床的病原菌检测，若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是④采集病人组织样本→②从病人组织样本中提取DNA→③利用PCR扩增DNA片段→①分析PCR扩增结果。(2)在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似，操作③中使用的酶是Taq酶(热稳定DNA聚合酶)，PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、延伸三步，其中复性的结果是Taq酶从引物起始进行互补链的合成。(3)DNA复制需要引物，为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与两条单链DNA特异性结合。(4)PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。[答案]

(1)④②③①

(2)Taq酶(热稳定DNA聚合酶)延伸Taq酶从引物起始进行互补链的合成(3)两条单链DNA

(4)一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术[在训练中评]1．PCR(多聚酶链式反应)是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程。下列说法错误的是 (

)A．a过程高温使DNA变性解旋，该过程不需要解旋酶的作用B．c过程要用到的酶在高温下失活，因此在PCR扩增时需要再添加C．如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不标记，控制“94℃～55℃～72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占25%D．PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变解析：PCR中解旋是通过高温进行的，该过程不需要解旋酶的作用，A正确；c过程用到的酶为耐高温的DNA聚合酶，在高温下不会失活，因此在PCR扩增时不需要再添加，B错误；如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，循环3次后，形成的DNA分子为8个，而含有15N标记的DNA分子为2个，故在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占25%，C正确；PCR中由碱基错配引起的变异属于基因突变，D正确。答案：B

2．下列有关电泳的叙述，错误的是 (

)A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．待测样品中各种分子的形状、大小及带电性质的差异等会影响其在电泳中的迁移速度C．进行电泳时，带电粒子会向着与其所带电荷相同的电极移动D．常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳解析：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，A正确；待测样品中各种分子的形状、大小及带电性质的差异等会影响其在电泳中的迁移速度，B正确；进行电泳时，带电粒子会向着与其所带电荷相反的电极移动，C错误；常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳，D正确。答案：C

科学思维——归纳比较目的基因的检测与鉴定方法1．目的基因检测与鉴定方法的比较续表场所不论是复制水平、转录水平还是翻译水平上的检测，都是在体外进行的原理进行转录水平的检测原理与复制水平的检测原理是相似的，都遵循碱基互补配对原则，只是被检测的物质不再是转基因生物的基因组DNA，而是转基因生物细胞内的mRNA；进行翻译水平的检测，则是利用抗原与抗体特异性结合的原理