食品微生物快速检测 金黄色葡萄球菌的快速检测

金黄色葡萄球菌的快速检测《食品安全快速检测技术》

金黄色葡萄球菌介绍一金黄色葡萄球菌检测方法二金黄色葡萄球菌的快速检测三

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介绍金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中，空气、污水等环境中也无处不在。

介绍金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌能产生多种致病性物质，如肠毒素及凝固酶等。金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒是一个全球性公共卫生问题，据美国疾病预防控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌，居第2位，占细菌性食物中毒的33％，加拿大的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％。

限量标准金黄色葡萄球菌

我国每年发生的此类中毒事件也非常多，国家卫生和计划生育委员会于2013年发布《食品安全国家标准食品中致病菌限量》(GB29921-2013)，在国标中制定了金黄色葡萄球菌的限量标准，规定熟肉制品、熟制水产品、熟制粮食制品等8大类食品中，同批次采集5份样品，每份样品中的金黄色葡萄球菌浓度均不得超出1000CFU/g，仅允许其中1份样品在100~1000CFU/g之间。

检测方法金黄色葡萄球菌检测方法目前，金葡菌的检测方法主要有传统生化鉴定方法、免疫学、分子生物学快速检测方法等。传统生化鉴定方法操作简单，稳定性强，成本低，是目前最常用的鉴定方法。

方法金黄色葡萄球菌检测方法免疫学检测方法主要是基于免疫学理论研究，其是通过设计的抗原、抗体和免疫细胞，检测抗原和抗体的结合以及免疫细胞分泌的细胞因子的，从而达到检测目的一种实验方法。该技术方法主要包括酶联免疫法、免疫荧光法、免疫胶体金法等

方法金黄色葡萄球菌检测方法

方法金黄色葡萄球菌检测方法分子生物学检测方法主要包括聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）技术，核酸探针技术，环介导等温扩增技术等技术。

方法金黄色葡萄球菌检测方法试剂盒法：试剂盒法通常将十多种，甚至几十种培养基或成分集中在特定微型装置内，通过观察微生物的生长和代谢过程的某些产物或现象，对试验现象进行分析，将传统试验中多次试验通过一次完成，缩短了检测时间。此法可大大缩短测试时间，在24h内得出结果，甚至某些可缩短至4h内。目前，用于检测金黄色葡萄球菌的成品试剂盒有API、MIS等

测试片的原理金黄色葡萄球菌测试片本试验利用金黄色葡萄球菌自身生化特性优化培养基，通过代谢而产生特异性酶或其他特异性物质，在培养基中添加相应的显色底物，使菌落呈现特定的颜色实现分离和鉴别。通过无纺布、冷凝胶、塑料薄膜等作为培养基的载体，将以上材料组装成金黄色葡萄球菌的测试片，缩短了检测时间、降低了劳动强度、节约成本。

检测原理金黄色葡萄球菌测试片金黄色葡萄球菌测试片（FilmplateTMStaphylococcusaureusBT206)含有选择性培养基和专一性的酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15~24h就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序。金黄色葡萄球菌测试片

适用范围金黄色葡萄球菌的快速检测本产品适用于各类生、熟食制品，饮料，糕点类，调味品，乳制品等的快速检测。

样品处理金黄色葡萄球菌的快速检测取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌磷酸盐缓冲液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，调节样品匀液pH至6.0~8.0。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，每次换一支吸管。

接种一般食品选2~3个稀释度进行检测，将金黄色葡萄球菌测试片（BT206)置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个稀释度接种两片。做一片空白阴性对照。金黄色葡萄球菌的快速检测

培养将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。金黄色葡萄球菌的快速检测

培养后测试片现象测试片上紫红色的菌落为金黄色葡萄球菌；呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。

出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。金黄色葡萄球菌的快速检测

结果判读（1）选择菌落数在20~200个之间的纸片进行计数。（2）若两个稀释度的菌落数均在20~200之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数，即为每毫升（或每克）样品中金黄色葡萄球菌数。（3）如果所有稀释度的测试片上的菌落数都小于20,则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之；如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。金黄色葡萄球菌的快速检测

结果判读

（4）如果所有稀释度的菌落数都大于200，计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。计数菌落数大于200的测试片时，也可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20(滤纸区面积为20cm2)，即为测试片上估算的菌落数。报告单位以CFU/mL(或CFU/g)表示。金黄色葡萄球菌的快速检测